正交试验优选黄连总生物碱的提取工艺-精选

1、正交试验优选黄连总生物碱的提取工艺:Objective:ToinvestigatetheextractionprocessoftotalalkaloidsfromRhizomacoptidis.Methods:TheextractionprocessoftotalalkaloidsfromRhizomacoptidiswasoptimizedbyL9(34)orthogonalexperimentwiththecontentsoftotalalkaloidsandberberineastheindexwhichweredeterminedbyUVandHPLC.Results:toinvest

2、igatetheeffectsofextractiontime,concentrationalcohol,extractiontimesandsolventvolumeontheextractionofthetotalalkaloidsofRhizomacoptidis:Theoptimalextractionprocesswas:adding8timesof50%alcohol,refluxingandextractingfor3times,1.5hpertime.Conclusion:TheoptimalextractionprocessofRhizomacoptidisissimple,

3、andpracticalforindustrialproduction.黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao、云连CoptisteetaWall.等的干燥块茎。具有清热燥湿、泻火解毒之功效1 。黄连中的小檗碱等生物碱是其作用的主要物质基础。本文采用乙醇为提取溶剂，用L9(34)正交设计，以总生物碱和小檗碱含量为指标，优选较好的提取条件，为黄连总碱的制备工艺提供实验依据。1 材料与仪器1.1 供试药材黄连药材购自河北安国以岭饮片XX公司（产地：四川，批号：070401），经本公司田清存高级工程师

4、鉴定，与中国药典2010版一部正品相符。1.2 试剂盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200208）；95%乙醇（药用规格）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。1.3 仪器98-1-B型电热套（天津市泰斯特仪器XX公司）；S-FCJ-03型电热鼓风干燥箱（江苏海门县实验仪器厂）；FW17座中草药粉碎机（天津市索斯特仪器XX公司）；旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；SHZ-D型循环水真空泵（河南郑州长城科工贸XX公司）；HH.S11-2型电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂）；UV-2550紫外分光光度计（日本岛津公司）；Agilent1100Series效

5、液相色谱仪（美国安捷伦公司）；SartoriusBS110电子天平。2 方法和结果2.1 总生物碱的含量测定2.1.1 对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，用P2O5®空干燥器干燥24h,精密称定，加95浓醇制成每4.6107g•ml-1的溶液，即得。2.1.2 供试品溶液的制备：精密量取提取液2.5ml，经中性氧化铝小柱(5g,直径为1cm),用25m195%&醇洗脱，洗脱液加95%乙醇定容至50ml量瓶中，摇匀；精密量取上述溶液2ml，置50m1量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.1.3 线性关系考察：精密吸取浓度为4.6107以g&

6、amp;#8226;m1-1的小集碱对照品溶液0.3、0.5、0.8、1.0、1.2ml,分别置于10m1容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇均后置345nm波长下测定，以小檗碱对照品浓度为横坐标(C)，吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程Y=0.0474C-0.0192(r=0.9995)。结果表明，小集碱在3.40213.608以g•m1-1浓度范围内与其吸光度线性关系良好。2.1.4 精密度考察：选取某一浓度的供试品溶液共5份，按上述条件测定吸光度，结果RSD=1.18%表明仪器精密度良好。2.1.5 稳定性考察：选取某一浓度的供试品溶液，按上

7、述条件测定吸光度，间隔选取某一浓度的供试品溶液，按上述条件测定吸光度，间隔2h测定1次，结果24h内稳定，RSD=0.57%。2.1.6 重复性试验：取同一供试品溶液连续测定5次，结果，RSD=0.48%，表明方法重复性良好。2.1.7 回收率试验：取已知含量的黄连总生物碱提取物，精密称定，加入小檗碱对照品适量，制备供试品溶液，测定吸收度，计算平均加样回收率为99.6%,RSM1.91(n=6)。2.2 小檗碱的含量测定2色谱条件PhenomenexC18柱(250X4.6mm,0.5m);流动相：乙腈-缓冲盐磷酸-三乙胺-水(1:2:100)(24:76)；柱温：室温；流速：1.0ml&am

8、p;#8226;min-1;检测波长：345nm；进样量:5”。方法学考察结果符合含量测定要求。2.3 提取工艺研究2.3.1 正交试验方法：选取对提取物收率影响较大的提取次数(A)、乙醇浓度(B)、提取时间(C)、溶媒体积(D)四个因素进行考察，将药材粉碎成粗粉，按L9(34)表进行试验，每份样品的称样量为27g,提取液定容于1000ml容量瓶中，以总生物碱和小檗碱含量为指标，进行检查。因素水平表见表1；正交试验结果见表2，表4；方差分析结果见表3，表5。表1因素水平表水平ABCD提取次数乙醇浓度t/h提取时间溶媒体积11501822601.5103 370212表2正交试验总生物碱含量结果

9、分析试验号因素总生物碱含量%ABCD第一次第二次111116.1485.973212225.7556.017313336.1916.006421237.6638.066522318.6877.794623126.8456.856731328.9059.189832137.6197.979933218.4378.916K16.0157.6576.9037.659K27.6527.3087.4767.261K38.5077.2097.7957.254SS19.2470.6662.4510.645SSE0.767dfe9.000表3正交试验总生物碱含量方差分析结果方差来源SSdfS2FP结论A19.

10、2472.0009.624113.2200.01主要因素B0.6662.0000.3333.9180.05C2.4512.0001.22514.4160.01主要因素D0.6452.0000.3223.7940.05e 0.767 9.000 0.085注：F0.05(2,2)=19.00;F0.01(2,2)=99.00note:F0.05(2,2)=19.00;F0.01(2,2)=99.00表4正交试验小檗碱含量结果分析试验号因素小檗碱含量%ABCD第一次第二次111113.3133.133212223.4623.331313333.0443.1724 21234.4824.4175 2

11、2314.07422.2436 23123.3993.6157 31324.4864.8968 32134.5414.3009 33215.0764.819K13.2434.1213.7174.083K24.0113.9654.2643.865K34.6863.8543.9593.993SS6.2600.2160.9030.144SSE0.204dfe9.000表5正交试验小檗碱含量方差分析方差来源 SS df S2 F P 结论A 6.260 2.000 3.130 136.087B 0.216 2.000 0.108 4.703C 0.903 2.000 0.452 19.639D 0.1

12、44 2.000 0.072 3.120e 0.204 9.000 0.023注：F0.05(2, 2) =19.00;<0.01主要因素>0.05<0.01主要因素>0.05F0.01(2, 2) =99.00。noteF0.05(2,2)=19.00;F0.01(2,2)=99.00。根据正交试验结果，采用直观分析法，以总生物碱含量为指标，优选工艺为A3B1C3D1而以盐酸小集碱含量为指标，优选工艺为A3B1C2D1优选工艺的确定：(1)提取次数是总生物碱和小檗碱的主要影响因素，3次为最佳水平。(2)醇浓度对总生物碱、小檗碱提取的影响均不大，两指标中50%乙醇均为最

13、佳水平，此浓度比其它水平均节约用醇，因此选择50%醇为优选工艺。(3)提取时间对小檗碱和总生物碱提取效果的影响均为主要因素，总生物碱2小时的提取效果最佳，；小檗碱是1.5小时提取效果最佳。综合分析，总生物碱中小波见含量最高，应以小檗碱的结果为主，选择1.5小时为优选工艺。(4)提取体积对小檗碱提及总生物碱的影响不大，两指标中8倍体积均效果最优，因此选择8倍体积为优选工艺。(5)根据上述结果可知，最佳工艺和优选工艺相同，为3次、50%乙醇、1.5小时，8倍体积。2.3.2验证试验：经过3批验证试验，结果为平均总生物碱含量=10.72%，平均小檗碱含量=5.54%，而按药典1测得药材中总生物碱和小檗碱的含量分别为10.67%、5.20%，表明优选提取成分完全，优选工艺合理，稳定，可行。3讨论小檗碱是黄连的有效成分和指标性成分。在建立生物碱含量测定方法时考虑到采用小檗碱作为指标性成分考察试验结果不够全面，因此采用测量总生物碱的方法作为另一考察对象。作者对酸性染料比色法、酸碱滴定法进行了详细深入的研究，但是误差都比较大，不适于工艺控制；而HPLC多成分同时测定法耗时耗力，成本也较高，也不适用于快速的工艺中间控制。在研究紫外方法测量总碱时，由于色素等成分的干扰，使得直接测量也有些偏差，而采用中性氧化铝柱进行纯化可有效地除去杂质，得到较纯净的生物总碱，再进行紫外法测定，