甲胎蛋白操作规程sop

1、杭州余杭邦尔医院检验科免疫室项目SOP文件文件编号：YHBE5-JYK-MYS-002标准操作规程 甲胎蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：5-8页甲胎蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目中请：甲胎蛋白测定（缩写 AFP;组合项目中请：月中瘤标志物 检查。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 常规静脉采血约2ml,不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆标本，用肝或 EDTAK凝。2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1

2、.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收 并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于 0.3ml的全血标本，或少于 0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2 标本保存2.2.1 接收标本后在60min内将标本离心分离出血清（浆），避免溶血。离心必 须达到4000rpmx 15min,离心后的

3、血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。2.2.2 标本保存时间：室温（1525C）下可稳定 8h,普通冰箱中（28C） 稳定2d,在-20 C最多可保存4周。避免反复冻融。2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置 48c冰箱内保存7d。2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。3方法原理甲胎蛋白测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本与包被着AFP单克隆抗体的超顺磁性磁珠和另外一种小鼠 AFP 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，标本中的AFP和包被在磁珠上的AFP抗体结合，同时AFP抗体-碱性磷酸酶

4、标记物与样本中同一 AFP 上不同的抗原结合位点结合。在反应管内孵化完成后，结合在固相上的物质将之 与一个磁场内被吸住，洗去未结合的物质。第二步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电 子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的问氧苯甲酸甲酯阴离子从激发 态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行 测量。所产生光子数与样本内甲胎蛋白的浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。文件编号：YHBE6-JYK-MYS-002标准操作规程 甲胎蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：

5、2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：5-8页4试剂及其他用品4.1 试剂：AFP测定试剂包，由迈瑞公司出品。未打开的试剂包保存于28c 避光保存，可稳定保存18个月，不可冻存。开启的试剂包载入系统中可使用28d。4.2 试剂盒组分4.2.1 试剂 1 （Ra）:组分包被着甲胎蛋白抗体（小鼠单抗，IgG）的超顺磁性微粒，悬浮于缓 冲液，含防腐剂。原料及含量：包被着甲胎蛋白抗体（小鼠单抗， IgG）的超顺磁性微粒，0.3g/L;Tris 缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。4.2.2 试剂 2 （

6、Rbb组分：抗甲胎蛋白抗体（小鼠单抗，IgG）-碱性磷酸酶标记物稀释于缓 冲液，含防腐剂。原料及含量：抗甲胎蛋白抗体（小鼠单抗，IgG）-碱性磷酸酶标记物，3mg/L;磷酸盐缓冲液，10mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。4.2.3 试齐1J 3 （R0组分：样本处理缓冲液，好防腐剂。原料及含量：Tris 缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L 。4.3 其他试剂与用品试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准 备。4.3.1 底物液4.3.2 清洗缓冲液等。5校准品与校准模式5.1 校准品：采用专用配套A

7、FP5准液。校准品需在28c贮存。5.2 校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。仪器根据校准曲线卡片 数据（6参数对数拟合曲线）自动建立校准曲线。5.3 校准周期：在同一批号试剂使用期间校准曲线有效，但在间隔28d后需要重新校准。每当：更换试剂批号或出现质控漂移时；仪器进行全面保养后； 仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4 校准液重建方法：冻干校准液，用1mLK储水复溶，复溶后的校准液于28c 保存最长不超过5周，或于-20 C最长保存10周。避免反复冻融。6质控品与室内质控规则6.1 质控品采用AFP配套质控品。6.2 质控液重建方法：液态质控液，即开即用，充分颠倒混匀，无需特

8、殊准备。6.3 质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。6.4 质控规则：采用L-J质控图，以土 3s为失控限。标准差由本室实验数据得 出。6.5 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时 纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器文件编号：YHBE7-JYK-MYS-002标准操作规程 甲胎蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：5-8页深圳迈瑞自动发光免疫分析仪8标本检测步骤装载试剂一进行校准一进行质控一输入标本检测项目一加载标本 一标本测定一结果复核一报告。9主要

9、分析参数无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进 行分析。标本10卜l。10结果计算仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以ng/mL表示。11检验结果的报告及范围11.1 结果的报告11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和 审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2 报告范围：0.5 1210 ng/ml，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本重新稀释

10、后重复测定的结果。12操作性能12.1 精密度：批内CWC3%;批问CVk5%12.2 分析范围：0.5 1210 ng/ml. 。12.3 分析灵敏度：0.5 ng/ml.。12.4 方法的有限性及干扰因素：轻度溶血、黄疸、脂血、 Rh因子对本试验无 明显干扰。甘油三脂(0 1500mg/dL)、血红蛋白(0 500mg/dL)或胆红素(< 20mg/dL) 时对试验的干扰偏差在+-10%范围内。ng/ml以内没有hook效应。13参考范围及医学决定水平参考范围：0 7.0 ng/ml14临床意义14.1 在怀孕时，AFP由胎儿产生并转运至羊水，然后又渗透入母亲的外周血中。 开放性神经

11、管缺陷(NTD可使AFP直接通过胎儿的毛细血管进入羊水；因此， 羊水和母亲血清中的AFP浓度升高，可提示有可能存在包括无脑儿和脊柱裂在内 的一系列胎儿畸形。AFP的测定为筛查NTD勺高风险妊娠提供了一个有效的方法， 可利用这一指标对她们进行筛查；另外，多胎妊娠也可伴有AFP浓度的升高。14.2 AFP浓度升高也可发生在患有原发性肝细胞癌或非精原细胞瘤的睾丸癌 患者，对此类患者的治疗中动态监测其 AFP水平，可用于对患者病情的治疗监控； 另外，AFP浓度升高也可见于非恶性肝脏疾病的患者。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2 审核者认真审核每一个

12、测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报 告单的审核者处签名。文件编号：YHBE8-JYK-MYS-002标准操作规程 甲胎蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：5-8页15.3 相关项目：审核与其他月中瘤标志物的关系，如出现与临床不符甚至相悖的 情况，应分析与查找原因。16有关引用程序与文件16.1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。16.2 免疫检验室内质控标准操作程序。16.3 检验结果审核程序。16.4 标本送检和接收程序。17参考文献17.1 陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术规程.杭州：浙江大学出版社， 2004.17.2 Access甲胎蛋白测定试剂说明书。17.3