waters液质联用

1、1. 适用范围 本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、XeVo TQ- SnIiCro MS/MS质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定 量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数 据处理软件等组成。2. 职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。2.3科室负责人负责监督检查规程的执行。3. 操作程序日常操作步骤：准备UPLC -设置样品表一-运行样品一-定量 打印报告。注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。 建立新方法和ProjeCt的操作步骤：准备UPLC -建立新的 PrO

2、jeCt -用标准品调谐一-编辑质谱方法一-编辑UPLC方法一 一设置样品表一-运行样品一-定量一- 打印报告。3. 1开机：3.1. 1彻底开机顺序（仪器己关闭）确定MS及其它仪器电源电缆己 连接,开氮气发生器、开氮气，小表0. ImPaO打开计算机电源 等待WindoWS正常启动 电脑界面右下角网络图标红叉。打开UPLC 自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。打开 UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。打开质谱电源,等待5min, 离子源透视镜里面亮。打开MaSSIynX软件，masslynx主界面左侧 instrumeIltMaSS tune界面菜单栏 VaCUUm

3、PUmP 同样界 面左侧 偏上 diagnosticsVaCUUm analyser MSI turbospeed：%要在5分钟内升到80。至少抽真空4个小时 查看真空状 态主界面mass COnSOIe 界面左侧XeVO tq ms detector加号展开- -ms display > 碰撞室真空度 >达到 1. 32E5 mBaro3.1.2日常开机顺序（仪器未关闭） 开氮气发生器、开氮气，小 表0. Impa,打开MaSSIynX软件，进入工作站。3. 2建立项目 点击file下的PrOjeCt WiZard ,出现对话框，单击 yes出现对话框,输入PrOjeCt , I

4、OCatiOn为C: MS DATA ,单击 next ,选择 Create existing PrOjeCt as template,并以 C: masslynxdefault. PrO 为模板，单击 finish .点击 OKo3.3准备UPLC系统 准备液相的一般流程：准备流动相 > 准备样 品 > 灌注二元泵 > 灌注自动进样器 > 建立液相方法 > 平衡液相 3. 3.1.准备流动相 用0.22UnI的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和 超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天，缓冲盐一定 要是可挥发的，而且浓度不要大于IOnlMO3. 3. 2.样品

5、要求所有样品尽量用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0. 22UnI的膜过滤。3. 3. 3灌注二元泵 在MaSSIynX主界面，单击MS Console,进入 UPLC 交互显示界面，点击左栏 ACqUity UPLC SySten> COntroI > Start UP SyStem ,单击QSM,选择需要用到的流动相位置，如A和 B,选择SeaI wash,时间设为3分钟。单击SM,选择StrOng WaSh 5 CyCIeS , SamPle Syringe 20 单击 EqUiIibrate to Method,才各流 速设为0 ,单击Start开始灌注.时间大约为9

6、min左右。设定流 速，平衡液相在MaSSIynX主界面，单击InIet MethOd图标,打 开液相方法编辑窗口，单击StatUS > ACQUlTY AdditiOnaI StatUS ,进入液相控制台，单击A或B或流速的位置，出现流速、 比例设定对话框，设定液相流速与比例，单击对勾，开始平衡液相， 如果后面要做调谐，可设定流速0.2 mlmin,有机相与水相的比例为 50:50o3.4准备质谱3.4. 1.计算化合物单同位素质量数 MaSSlynX主界面> 单击 Tools> MOleCUIar Weight Calculator,输入化合物的分子式（大写 -注意C1、

7、Br等正确的输入方法），注意选单同位素MOnOiSO , IOn Mode：离子化模式，+ve正离子，-Ve负离子，单击CaICUIateo 3. 4. 2用IntelIiStart进行自动调谐 在MaSSIynX主界面单击MS TUne图标，打开调谐窗口，单击IOn MOde > ES+或ES-,单击 APl GaS图标打开氮气，单击打开高压 选择MS MOde图标，设 定液相流速0.2 mlmin,水：乙膳的比例为50:50。把标准品调谐液 放入质谱仪塑料瓶位置处的A （或B）号位（注:浓度在200 PPb左右） 单击 FIUidiCS ,选择 ReSerVOir 为 A , FIO

8、W State 为 LC 模式，点击 PUrge图标。PUrge结束后，将FIOW State改为COmbine模式，设 定FUnCtiOn为MSI scan, MaSS为计算出化合物的质量数，SPan为 5,点击进样，开始进样，直到离子的响应比较稳定。保存调谐文 件：FiIe > SaVe AS至己建的项目下。在MaSSIynX主界面，选择 MS COnSOIe> XeVO TQ MS DeteCtOr 选择 Intellistart ,选择 SamPIe TUne and DeVeIOP MethOd , ES+ 单击 Start 图标，出现 IntelIiStart 自 动调

9、谐 编辑窗 U ,选择 SWitCh to AdVanCed mode , 输 入 COmPOUnd name （化 合物 名称），MoleCUlar Mass/FOrmUla （分子量或分子式） AddUCt A+ （ M+H +, 选择 LOad EXiSting SamPIe TUne , 在 SamPIe TUne Name 方框后的“。”处调用开始保存的调谐文件，在DeVeIOP MRM Method前 的方框打钩，并在方框出输入MRM方法的文件名，路径为己建的项 目下。在 Print RePOrt 前方框打钩，COne VOItage , COlIiSiOn Energy 处为默认

10、值，FIUidiCS 下的 FIOW Path 选择 COmbined 模 式，SamPIe ReSerVOir 和 SamPIe FlOW Rate 参数与 FUldiCS 下 COmbined模式下的进样参数保持一致。单击右边的Start开始自动 调谐。调谐成功，会有绿勾出现，查看intellistart报告。3. 4. 3查看intellistart中自动生成的质谱方法：从MaSSLynX主窗口，单击MS MethOd,出现MS Method编辑对话框，选择 FiIe > open,选择IntelIiStart中保存的质谱方法的文件，双击方 法，如发现自动调谐生产的质谱方法中部分参

11、数有误，则可以在 ChanneIS窗口手动修改参数，填写relentinon WindOW中的end时 间，此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致，选择AUtO Dwell,单击OK,点击File> SaVe As,保存质谱方法文件。3. 5建立液相方法3.5. 1编辑液相方法 在液相方法编辑窗口，单击Inlet,输入溶剂 名称，run time及梯度洗脱程序，梯度洗脱程序中最后阶段时间必须 与run time符合，单击OK,选择FiIe > SaVe AS保存方法,单击 LOad MethOd ,平衡液相。3. 5. 2建立样品列表 在MaSSIynX主窗口，选择 FiIeNe

12、W建 立一个空白的表SamPIeIiSt o输入文件名FiIe Name ,样品信息 FiIe TeXt ,双击MS FiIe ,选择质谱方法,双击Inlet File,选 择液相方法，在BOttle中输入样品瓶的位置,在InjeCt VOlUme 中输入进样体积，可右键Add,增加样品表的行数，保存样品表： FiIe > SaVe AS 。3. 6数据采集和处理3. 6. 1.选中要釆集的样品，单击RUn > Start ,选择ACqUire SamPIe Data only,单击OK开始进样并采集。3. 6. 2在采集过程中，可查看色谱图，点击ChrOmatOgram窗口，点

13、击Real-time UPdate icon .如I果不能见整个TIC图,单击DefaUIt Range图标。如果方法中包括多个通道，可通过Display > MaSS查 看 如果方法中包扌舌多个检测器或多个Function,可通过DiSPIay > TIC查看3.6.3处理多个FUnCtiOn的数据 如果质谱方法中有多个 FUnCtiOnJ 如有三个 FUnCtion,如想看第二个 FUnCtiOnJ MS SCan 的数据。3. 6. 3. 1在色谱图窗口，点击DiSPIay > TIC,选中MS SCan ,选择 Add trace ,单击 OKo3. 6. 3. 2如

14、想查第二个Function, DaUghter SCan质谱图,在色谱 图中，选择 DiSPIay > TIC,选择 SCanWaVeDS Add trace ,单击 OKO3. 6. 3. 3.选择PrOCeSS > COmbine SPeCtra.分别用右键输入信号 和本底噪音. 单击OK.得到DaUghter SCan的质谱图，单击 PrOCeSS > Smooth,单击 OKo3.7数据处理-外标定量法3. 7. 1 在 MaSSlynX 主页面单击 T ar get 1 ynx/Ed i t method,出现定量 方法编辑对话框，单击新建方法图标，新建一个定量方法

15、。3. 7. 2单击Add new COmPOUnd （添加新的化合物）图标，添加一个新 的化合物。3. 7. 3 单击菜单栏 UPdate,选中 QUantitatiOn IOn 和 COmPOUnd Name （前面打勾）在MaSSlynX主页面，打开中等偏下低浓度标准品的色 谱图，DiSPIay/Mass ChrOmatOgranI选出要定量的化合物的离子对， 一般强度高的化合物用来做为定量离子，另一个离子对则作为确证离 子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下，则COmPOUnd name, ACqUiSition FUnCtion Number, QUantification Tra

16、ce, PrediCted RetentiOn Time和RetentiOn Time WindOW将自动输入到定量方法 中。注意：在色谱图上拉的时候，要遵循两个原则，拉的位置要以色 谱峰的峰尖左右对称，拉的宽度要超过峰的起点和终点。3. 7.4单击工作曲线图标，在工作曲线设置页面，填入 COnCentratiOn UnitS:浓度单位，例如 ng/ml, ug/kg, ppb, PPnl 等 o COnCentration Of Standard: LeVeI -选择 Cone. A。 POIynOmiaI TyPe -选择Linear.（可根据自己行业的规定） CaIibratiOn Or

17、igin_ 选择 exclude （排除原点），include （包含原 点），force（强制过原点）Weithting FUnCtion（权重）_l/x （根据 自己行业规定）PrOPagate CaIibratiOn ParameterS_如果所有的化 合物均用相同的工作曲线的参数，选YeS3. 7. 5打开积分参数列表，选中APeX TraCk EnabIed（打勾，YES ） , IrItegration WindOW EXtent 输入 2 , 选中 PrOPagate IntegratiOn ParameterS （打勾），如果色谱峰并不是很对称的色谱 图，可先在色谱图上先设定参

18、数，积分，好积分参数满意之后， process/integrate,/COPy ,在 Targetlynx r1 Edit/Past 就可 将其粘贴到TargetIynX方法中。建议用APeX TraCk积分方法， SmOOth 方法建议用 SmOOth iteration 1, SmOOth Width 2。重复上面 的过程，把其他几个化合物的信息全部加入，保存方法：File/Save As,保存到当前项目的MethDB文件夹中，正确的SamPIeIiSt表格 模板，除了前面进样时的选项之外，还要有SamPIe type, ConA,等 选中要处理的样晶，单击PrOCeSS Samples,

19、出现下图的对话框，确 保选中，Integrate、SamPIe , CaIibrate Standard , QUantify SamPIeJ选择刚才编辑的TargetIynX方法，单击OK后,出现定量结 果对话框。可根据自己的需要，用鼠标右键，Chang COIUmn Order 来增加或减少SUnImary中的选项。3. 8关机程序3.8. 1日常关机：3.8. 1.1如果流动相中有缓冲盐必须先将缓冲盐换成水，灌注2分 钟，流速设为0. 2mlnin, 80%水相，冲洗至少30分钟，换成80%有 机相，冲洗至少20分钟，停流速，水相，冲洗至少30分钟，换成 80%有机相，冲洗至少20分钟，

20、停流速，柱温为室温。3.8. 1.2关质谱：主界面mass tune或者电脑下面仪器图标界面 左侧偏上 fluidicsflow State 选择为 waste、关氮气，mass tune界面或者电脑下面仪器图标工具栏第6个> 关高压mass tune界面右 下角> 等待去溶剂气温度降低至100度以下mass tune界面或者电脑 下面仪器图标左侧偏上。ES+sourcetemperaturedesolvation >关氮气，点击氮气发生器开启开关。3. 8. 2彻底关机3. 8. 2. 1先完成日常关机3. 8. 2. 2 泄真空：tune Page > VaCUUn

21、I > Ventyes > 等待涡轮分子泵转速降到10以下,massIynx主界面左侧instrument -MaSS tune 界面左侧偏上 diagnostics VaCUUm SOUrCe turbo SPeed%3. 8. 2. 3退出软件，其他界面先退出，主界面最后退出3. 8. 2. 4关质谱电源 > 关所有UPLC电源，计算机电源,仪器三个 电源顺序无所谓，关氮气发生器，氮气。3. 8. 2. 5如果有UPS,关闭UPS电源，计算机电源。4日常维护、保养及注意事项4. 1仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。4.2仪器室温度应相对稳定，一般应控制在20

22、-25°C,保持恒温；相 对湿度最好为50-70%,室内应备有温度计和湿度计，一般采用空调和 吸湿机调节温度和湿度。4.3气压过滤机械泵油，停止样品采集、停止流动相、关闭高压、 关闭所有气流，关闭离子源内的真空隔离阀。用一字镖丝刀顺时针方 向拧开机械泵上的GaS BallaSt阀四分之一圈，运行30分钟后再把 GaS BalIaSt阀旋转到原来关闭的位置。对于ESI源，至少每星期做 一次，对于APCl源，每天做一次。4.4开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。4.5 ESl离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注 意以下几个方面：三氟乙酸(TFA)多用于蛋白质和多肽分析，但对 ESl