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文档简介

1、* * * * * 灭菌双蒸水灭菌双蒸水 11ul 10buffer H(含含BSA） 2ul 质粒质粒DNA 10U/ul RI 2ul ：稳压条件下：稳压条件下电泳电泳。 （不超过（不超过5V/cm5V/cm胶长度）胶长度）：紫外分析仪上：紫外分析仪上观察，观察，DNADNA存存在处显在处显 ，观察酶切后与未酶，观察酶切后与未酶切质粒的切质粒的DNADNA带位置。带位置。3000bp1500bp1000bp500bp2.96kp1.9kp点样孔点样孔 1. 2. 当样品在当样品在37 水浴时，要水浴时，要水水汽进入管内，使反应体积大大增加，造成酶切汽进入管内，使反应体积大大增加，造成酶切失

2、败失败 3. (含含50甘甘油油) ，每次吸取后应放在冰盒，用完后立即放在，每次吸取后应放在冰盒，用完后立即放在-20，新购的大包装酶应先分装，新购的大包装酶应先分装4.4.倒胶时倒胶时，若有需立刻用枪尖吸掉，若有需立刻用枪尖吸掉或牙签挑破或牙签挑破5.5.，点样时也应检查点样孔，点样时也应检查点样孔中有无气泡，电泳前正确连接正负极中有无气泡，电泳前正确连接正负极6.6.电泳时电泳时胶长胶长1.DNA的纯度会不会影响酶切产物的质量？的纯度会不会影响酶切产物的质量？如果会，请说明原因。如果会，请说明原因。2.2.比较本实验酶切后与未酶切质粒的电泳比较本实验酶切后与未酶切质粒的电泳图谱，综合前两个

3、实验，分析可能的原图谱，综合前两个实验，分析可能的原因因1. DNA中的中的DNase、蛋白、蛋白、RNA、 SDS 、EDTA、酚、酚、氯仿和乙醇等杂质都会影响酶切效果。氯仿和乙醇等杂质都会影响酶切效果。2. DNA中的杂中的杂DNA、蛋白可与、蛋白可与RE非专一性结合使酶活非专一性结合使酶活性降低，另外杂性降低，另外杂DNA 也竞争酶的切口，往往造成切不也竞争酶的切口，往往造成切不动。动。3. DNA中的盐离子（如中的盐离子（如Mn2+、Cu2+、Co2+和和Zn2+等）等）与有机溶剂（如酚、氯仿和乙醇等）都可抑制限制酶与有机溶剂（如酚、氯仿和乙醇等）都可抑制限制酶的活性或使限制酶失活或造成的活性或使限制酶失活或造成DNA切不动或使限制酶切不动或使限

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