乙肝为何测e抗原和s抗原

1、乙肝为何测e抗原和s抗原乙型肝炎病毒(HBV )外膜蛋白包括 S、前S2和前S1 三种成分前S1蛋白在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用.含有前S1的蛋白主要存在于 Dane颗粒和管型颗料上.前S1蛋 白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面 起有十分重要作用 .乙肝病毒前 S1 抗原酶免测定试剂盒的正式推向临床以 及近两年在、 、等近百家医院与乙肝“两对半”检测的联 合应用 ,充分显示了该试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断,指导治疗等方面的重要价值前S1抗原(Pre-S1Ag )检测是对 乙肝“两对半”尤其是 e抗原和HBV-DNA测定的重要补充 和加强 .前 S1 抗原与 HBV-DN

2、A 检出率两者符合 ,前 S1 抗原仅在 HBV-DNA阳性血清中检出前S1蛋白随HBeAg消失而消失, 且与阴转时间呈正相关 ,这样,前 S1 抗原可作为病毒清除与病 毒转阴的指标 .前 S1 抗原阳性的乙型肝炎患者传播乙型肝炎 病毒比前 S1 抗原阴性和无症状 HbsAg 携带者的危险性更大 , 因而说明前 S1 抗原可反映乙型肝炎病毒复制和传染性的指 标.如果前 S1 抗原持续阳性 ,指示 AHB 向慢性转变 .比较急性 乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和 HBsAg 阳性的患者血清中前 S1 蛋白 ,前 S1 抗原阴转愈早 ,AHB 患者的疗程愈短 ,预后也愈好 .说明前 S1 抗原及其抗体的

3、检测是急性乙型肝炎的临床诊 断 ,疗效观察和判数据预后的良好指标.前 S1 蛋白的分子生物学特性1乙肝病毒（ HBV ）的基因结构HBV 为嗜肝 DNA 病毒,由一个不完全双链 DNA 组成 , 约 3200 个氨基酸 . 长链 L 含 4 个开放读码框架 ,为病毒蛋白的 编码区：S区、C区、P区、X区.短链S相当于长链的50%-100%, 其不固定端可被原性 DNA 多聚酶延长 ,使病毒成为完整的双 链.2HBV 基因组编码 HBV 抗原,所有四个功能性读码框 架位于DNA负链,P基因编码DNA聚合酶.C基因编码 HbcAg.S基因编码S抗原,前S1抗原和前S2抗原.X基因编 码X产物.3.

4、编码不同形式的表面抗原（HBsAg ）的HBV基因区 域由大蛋白（LHBs ），中蛋白（MHBs ）和小蛋白（SHBs） 组成 ,其氨基酸组成的肽段长短不同.在第一和第二个起始密码子之间的序列称为 Pres1,在第二和第三个之间为Pres2从第三个密码子到终点密码子的序列为S.前S1抗原（Pre-S1Ag）的临床意义和用途：1反映 HBV 的感染与复制状况的指标前 S1 抗原主要存在于血清中 HBV 表面.提示机体含有HBV 就有前 S1 抗原.前 S1 抗原与 HBV-DNA,HBeAg 检测率高度符合是一项 十分重要的病毒复制指标 .提示前 S1 抗原可作为 HbeAg 和 HBV-DNA

5、 检测的补充和对照 .抗 HBeAb （ +）慢性乙型肝炎（约占患者的30%左右）和 HBV 慢性无症状携带者中 ,前 S1 抗原（ + ）可表示病毒的 复制,提示临床上只检测“乙肝五项”是不够的,补充前 S1 抗原的测定是十分重要的 ,可弥补因病毒变异和其它原因造成 的 HBeAg （ -）的“误寻” .病毒附着于肝细胞上 ,最重要的介导部位是前 S1 蛋白的 氨基酸（AA ） 21-47片段,变异的病毒只要这一区段完好就有 传染性.2预后及药物疗效的判断急性乙型肝炎患者前 S1 抗原阴转越早 ,预后越好 ,是病毒 清除的最早迹象，反之,前S1抗原持续阳性，将发展至慢性肝 炎.因病毒基因变异

6、的 HBeAb （ +）慢性乙型肝炎病人 ,较易 进展为肝硬化 ,甚至肝癌 .加强检测前 S1 抗原,是一种检测疾 病预后的良好手段 .前 S1 抗原可作为药物抗病毒疗效的指标,是对HBV-DNA 和 HBeAg 指标的补充和加强 .3早期诊断乙型肝炎病毒的感染前 S1 抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期,在转氨酶升高前即可查出 ,提示可作为早期诊断乙肝病毒感染在体检和献血员中加查前 S1 抗原,可起来疾病的早期 诊断和尽早切断传染原的重要作用 .问题一、检验两对半为何还要查 Pre-S1,重复检查是浪费吗？答：目前 ,乙型肝炎病毒血清学检测项目主要是 HBV-M （即乙肝五项 ,包括 HBs

7、Ag 、 HBsAb 、 HBeAg、 HBeAb 和 HBcAb ）.目的是诊断患者的感染状况 ,病毒复制情况 ,病程预 后和药物疗效的观察等 .前 S1 抗原的检测能够从以下几个方 面弥补和加强乙肝五项检测的不足 .1前 S1 抗原出现在急性乙型肝炎感染的早期,在转氨酶升高前即可查出 ,提示可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标.2急性乙型肝炎患者前 S1 抗原阴转越早 ,预后越好 ,是 病毒清除的最早迹象 .反之,前 S1 抗原持续阳性 ,将发展至慢 性肝炎 （. 此指标比 HBeAg 阴转、 HBsAb 阳转指标提示要早） .3HBeAb（ +）慢性乙型肝炎约占慢性乙肝的 30%-50%,

8、检测前 S1 抗原 ,提示病毒在机体继续复制 ,此类患者更容易演 变为肝硬化或肝癌 .加查前 S1 抗原 ,弥补了因 HBeAg 缺失造 成的诊断和治疗困难 .4在 HBV 无症状携带者中 ,有一定比例的 HBeAb （+） 者,加查前 S1 抗原（ +）提示病毒在体还较活跃 .病毒并没有 清除 ,肝脏还有潜在的病理损伤的可能.5抗病毒治疗乙型肝炎 ,加查前 S1 抗原可作为治疗前的 患者筛查和治疗后的疗效判断 ,尤其对 HBeAb （ +）的慢性肝 炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用 .所以检验两对半 ,加查前 S1 抗原可在急性肝炎 ,慢性肝炎,HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗

9、过程中起 到十分重要的作用 .这样的加查 ,不能说是浪费 .二、HbeAb （+）的 HBV 感染者中 ,为何要检查前 S1 抗 原?在我国近 3 千万人的慢性乙型肝炎患者中 ,其中约有30%左右的患者，抗HBe阳转后，病毒在体继续复制，病情较重， 其中部分可以演变为肝硬化或肝癌,自然好转率非常低 .同样,HBeAb （ +）的HBV无症状携带者也占有一定的比例 这 一部分 HBeAb （ +）的慢性肝炎和 HBV 无症状携带者 ,往往 是因为病毒基因变异所致 ,其所携带的 HBV 变异毒株大多数 表现为在病毒基因组前 C区末端1896位发生G-A点突变， 产生一个新的终止密码子（ TAG）

10、,阻断了 HBeAg 的形成 ,导 致在临床上出现 HBeAg 缺陷和 HBV 血清型 .因 HBeAg 的缺 失,造成诊断和治疗的困难 .此时 ,检测前 S1 抗原既能较为准 确的检测病毒在机体复制状况 ,又能诊断疾病的转归和了解 是否携带 HBV 变异毒株 .充分显示了前 S1 抗原的临床价值 . 所以抗 HBeAb（ +）的 HBV 感染者中 ,加查前 S1 抗原是非常 必要的 .三、为什么检测 HBV-DNA还要检测前S1抗原？1前 S1 蛋白是乙型肝炎病毒（ H BV ）外膜蛋白的主要 专长部分 ,它含有肝细胞受体 ,在 HBV 感染细胞和机体免疫应 答方面起重要作用 .在病毒感染机

11、体的整个周期中 ,前 S1 蛋白 的独特功能 ,使其能够较充分的反应机体的体液免疫状况,直至病程的转归过程（如早期诊断 ,急性肝炎前 S1 抗原阴转是 病毒清除的最早迹象 ,反之疾病将发展至慢性肝炎等临床诊 断以及前 S1 抗原阴转 ,前 S1 抗体出现等免疫学反应） 这是单 一测定 HBV-DNA 所不能做到的 .2免疫测定技术因其有效、直接、简便的特点,已经在临床诊断应用上占主导地位 .前 S1 抗原的检测与基因测定 HBV-DNA 在治疗方面能够相互补充和加强 ,就像 HBV-DNA 不能替代乙肝五项的检测一样 ,同样 HBV-DNA 也不能替代 前 S1 抗原的检测 .3HBV DNA

12、-PCR 技术要求精密、所需要的条件高 ,易 发生污染和假阳性 ,不适于做常规检测 ,前 S1 抗原测定与之相 互补充和加强 ,使结果特异 ,准确无误 ,进而提高临床大夫的诊 断和治疗水平 .前 S1 抗原的检测由阿尔法生物技术生产的乙型肝炎病毒前 S1 抗原酶免 诊断试剂盒采用 ELISA 双抗体夹心法 ,测定前 S1 抗原肽 ,最低 检测浓度为 0.1ug/L.检测原理采用双抗体夹心 ELISA法，用抗-PreSI和抗HBs作为固 相化抗体和酶标抗体 ,如果标本中存在乙肝病毒 PreS1 抗原 , 则形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物 ,加入 TMB 底物产生显色 反应 ,反之则无显色反应

13、 .适用于血浆和血清类标本 .试剂盒组成 微孔板、阴性对照、阳性对照、酶结合物、显色液A、显色液B、终止液、洗涤液.操作步骤1.反应孔加入待测标本 50ul,设阴、阳性对照各 2孔，每 孔加入阴、阳性对照各 50ul,并设空白对照1孔，置37C孵育 30min.2洗板3.每孔加入酶结合物 1滴或50ul （空白对照孔除外），置37 C孵育30min.4洗板5.加入显色液 A、B各一滴，充分混匀后，置37C孵育15min.6加入终止液、混匀 . 7酶标仪读数 .结果判断1所有阴性对照、阳性对照和标本的读数值减去空白对照读数即为计算值 .2阳性对照读数必须比阴性对照读数大0.300.实验结果成立.3结果判断：临界值（ CUTOFF ） =2.1*阴性对照平均 OD 值 .