全国药品微生物检验重点实验室建设介绍课件

1、2010.92010.9山东省药品检验所时间事件结果2006年5月“齐二药”亮菌甲素及其全线产品调查170批产品无菌检查合格，证明与微生物污染无关2006年7月“欣弗事件”微生物污染2007年1月“克林霉素磷酸酯”及“阿奇霉素”扩大调查克林107批7批无菌不合格；阿奇 90批3批无菌不格。取缔两个品种的热力灭菌大体积液体制剂生产。2007年4月注射用甲氨喋呤及时排除微生物污染2008年10月“刺五加事件”及全线产品调查微生物污染2008年11月“茵栀黄事件”与微生物污染无关2009年“双黄连注射液”有无微生物污染？山东省药品检验所2009年4月23日中检所会同北京、天津、上海、黑龙江、江苏、浙

2、江、广州、四川、总后等九家药检所的主管业务所长及微生物检验部门负责人在浙江省杭州市首次对药品检验所微生物检验重点实验室的建设问题开展研讨。 增强系统能力应对应急检验山东省药品检验所2009年4月28日，中检药函2009809号全国药检所微生物检验重点实验室建设研讨会会议纪要；2009年5月10日，中检药函20091302号全国药检所微生物重点实验室建设参考原则（草案）；2009年10月30日，中检药函20092028号微生物重点实验室工作安排；2009年11月20日，中检药函20092132号关于参加药品微生物实验室能力验证的通知；2009年12月25日，中检函20092355号关于开展协同检

3、验模拟演练的通知；2010年2月2日，中检药函2010183号关于药品微生物阳性检出菌分析能力验证汇总报告的函；2010年3月26日，中检药函2010562号关于参加药品微生物实验室能力验证总结会议的通知。 山东省药品检验所环境保证环境保证培养基保证培养基保证无菌性检查无菌性检查适用性检查适用性检查有效的方法有效的方法方法验证方法验证SOP操作操作有效的结果有效的结果可靠的结论可靠的结论结果判断结果判断山东省药品检验所如何快速完成检验？如何快速完成检验？如何准确下结论？如何准确下结论？应急检验体系建设应急检验体系建设阳性检出菌的综合阳性检出菌的综合分析判断能力建设分析判断能力建设山东省药品检验

4、所一、重点实验建设的分阶段目标 1、2009年内完成第一阶段目标，保证检验结果的准确性。 2、2010年内完成第二阶段目标，开展分子生物学工作，具备微生物追踪溯源能力。山东省药品检验所二、完成第一阶段任务实验室条件标准 1、人员标准（1）、应急检验组织保障 （2）、人员要求：一般实验操作人员，中级实验人员，高级实验人员（3）、人员培训 山东省药品检验所二、完成第一阶段任务实验室条件标准 2、硬件标准（1）、实验室标准：核心实验区，缓冲辅助区，PII级生物安全区，一般实验及准备区 （2）、设备配置要求：检验操作设备，监控设备，培养设备，鉴定分析设备，低温保存设备（3）、消耗性实验器材保障：常用器

5、皿，消毒剂及隔离器材，一次性实验器材，培养基 山东省药品检验所二、完成第一阶段任务实验室条件标准 3、软件标准（1）、应急检验方案（2）、实验室安全保障措施（3）、实验室管理SOP （4）、设备操作SOP （5）、检验程序SOP山东省药品检验所 编写说明及批准页 1 实验室概况 1.1 实验室简介 1.2 实验室通讯资料 1.3 实验室认可项目/参数表 1.4 实验室平面图及功能区域 1.5 仪器设备总览 1.6 常备试剂耗材一览表 1.7 实验室发展目标山东省药品检验所2 管理规范2.1 安全管理2.2 业务流程2.3 人员管理2.4 样品管理3 标准操作规程3.1 检验工作SOP3.2 仪

6、器操作SOP3.3 实验记录SOP4 实验室保障4.1 实验室设施、设备及消耗品供应商确定原则4.2 实验室设施服务商4.3 实验设备供应商4.4 实验室消耗品供应商三、完成第二阶段任务实验室条件标准 完成第二阶段任务实验室条件主要是在第一阶段实验条件的基础上增强对疑难微生物的鉴定能力，重点是建立分子生物学实验室。 1、人员 2、硬件 3、软件 山东省药品检验所应急检验体系建设应急检验体系建设2009年12月25日，中检函20092355号关于开展协同检验模拟演练的通知中检所于2007年8月建立了微生物应急检验方案（NICPBP-JY-SOP-ACWSW-001药品微生物检查应急检验规程） 山

7、东省药品检验所1、组织保障、组织保障 设立专门的药品微生物检查应急处理小组，负责组织实施药品微生设立专门的药品微生物检查应急处理小组，负责组织实施药品微生物检查应急事件。物检查应急事件。2、应急准备、应急准备 保证微生物检查中所需的各种实验条件时时处于有效、合格的状态，保证微生物检查中所需的各种实验条件时时处于有效、合格的状态，做到样品随到随检，是加快应急事件反应速度的关键。无菌室及设做到样品随到随检，是加快应急事件反应速度的关键。无菌室及设施运行正常；建立实验室日常监测菌株库；无菌室小型设备、实验施运行正常；建立实验室日常监测菌株库；无菌室小型设备、实验器材、培养基、冲洗液等齐备，器材、培养

8、基、冲洗液等齐备，24小时随时处于可应用状态；两小时随时处于可应用状态；两个双人实验小组，在不同实验区域平行同步实验个双人实验小组，在不同实验区域平行同步实验。山东省药品检验所应急检验专用应急检验专用灭菌气密包装灭菌气密包装应急检验用一次性薄膜过滤培养器原位辐射剂量原位辐射剂量化学指示剂化学指示剂内含式生内含式生物指示剂物指示剂山东省药品检验所 理化分析（参考化学对照品建立的某些原则） 生物学评价（MPN、回收率、生长曲线、生态学）硫乙醇酸盐流体对照培养基改良马丁对照培养基山东省药品检验所3 、样品确认、样品确认按程序确认样品的来源、信息和完整性，收集背景资料。按程序确认样品的来源、信息和完整

9、性，收集背景资料。4 、方法确定、方法确定合理的检验方法是结果判断的保证。在处理紧急任务时，可以通过下合理的检验方法是结果判断的保证。在处理紧急任务时，可以通过下面面3个方式快速确定检验方法，加快检验进程：个方式快速确定检验方法，加快检验进程：（1）、联系其他先期介入该紧急事件的单位和人员，或者从本实验室）、联系其他先期介入该紧急事件的单位和人员，或者从本实验室的档案中寻找成熟的检验方法，以阳性对照的方式验证，快速开展的档案中寻找成熟的检验方法，以阳性对照的方式验证，快速开展检验工作；检验工作；（2）、采用预实验快速确立检验方法：以金黄色葡萄球菌和白色念珠）、采用预实验快速确立检验方法：以金黄

10、色葡萄球菌和白色念珠菌进行测试，若菌进行测试，若24小时后金黄色葡萄球菌管长菌、小时后金黄色葡萄球菌管长菌、48小时候后白小时候后白色念珠菌管长菌，表明方法可行。色念珠菌管长菌，表明方法可行。（3）、采用薄膜过滤法去除抑菌活性，无菌检查按）、采用薄膜过滤法去除抑菌活性，无菌检查按500ml/膜冲洗，在膜冲洗，在开展检验的同时进行阳性对照实验。开展检验的同时进行阳性对照实验。具体实施根据方式（具体实施根据方式（1）、（）、（2）、（）、（3）的顺序启动。）的顺序启动。山东省药品检验所5 5、 实验要点实验要点（1 1）、确定无菌检查实验方法；）、确定无菌检查实验方法；（2 2）、清洁无菌室，并对

11、无菌室中的浮游菌、表面菌进行监测；）、清洁无菌室，并对无菌室中的浮游菌、表面菌进行监测；（3 3）、按无菌操作规程着装、进场、消毒，监控手部所带入的微生物；）、按无菌操作规程着装、进场、消毒，监控手部所带入的微生物；（4 4）、样品外表面消毒，监控样品取样口可能污染的微生物；）、样品外表面消毒，监控样品取样口可能污染的微生物；（5 5）、实验用到的器材、培养基、冲洗液等分别进行阴性对照实验；）、实验用到的器材、培养基、冲洗液等分别进行阴性对照实验；（6 6）、如果样品量允许，设置对应的阳性对照组；）、如果样品量允许，设置对应的阳性对照组；（7 7）、结果观察：自培养开始，应逐日观察诸培养管的浑

12、浊情况，如发）、结果观察：自培养开始，应逐日观察诸培养管的浑浊情况，如发现任何一管的培养物变浑浊，现任何一管的培养物变浑浊，1 1）立即转接）立即转接2ml2ml该培养物至相同的培养该培养物至相同的培养基中继续培养；基中继续培养；2 2）取）取5 5支冻存管，每管分装支冻存管，每管分装1ml1ml浑浊培养物，浑浊培养物，-80-80保保存；存；3 3）取浑浊培养物在）取浑浊培养物在TSATSA平板上划线，分离污染微生物；平板上划线，分离污染微生物；4 4）如果发）如果发现硫乙醇酸盐流体培养管变浑浊，还应增加血平板划线，并在厌氧条现硫乙醇酸盐流体培养管变浑浊，还应增加血平板划线，并在厌氧条件下培

13、养分离厌氧菌。由平板分离到的菌落应进一步鉴定分析，并逐件下培养分离厌氧菌。由平板分离到的菌落应进一步鉴定分析，并逐一保藏。一保藏。山东省药品检验所6、结果判断与报告、结果判断与报告（1）、如果阳性对照管）、如果阳性对照管48小时仍无细菌生长，提示样品具有较强调抑小时仍无细菌生长，提示样品具有较强调抑菌作用，应立即重新实验，并改进去除样品抑菌活性的方法；菌作用，应立即重新实验，并改进去除样品抑菌活性的方法；（2）、如果所有阴性对照均无菌生长，阳性对照生长正常，供试品管）、如果所有阴性对照均无菌生长，阳性对照生长正常，供试品管培养培养14天后不发生浑浊，可判无菌检查合格；天后不发生浑浊，可判无菌检

14、查合格；（3）、如果个别阴性对照管有菌生长，阳性对照管生长正常，供试品）、如果个别阴性对照管有菌生长，阳性对照管生长正常，供试品管培养管培养14天后不发生浑浊，可判无菌检查合格，但应对阴性对照管天后不发生浑浊，可判无菌检查合格，但应对阴性对照管中的细菌进行分离鉴定，查找污染原因；中的细菌进行分离鉴定，查找污染原因；（4）、任何情况下供试品管长菌，并经分离、鉴定，确定该菌株与实）、任何情况下供试品管长菌，并经分离、鉴定，确定该菌株与实验室及实验过程监控各环节检测到的细菌没有相似性，可判无菌检验室及实验过程监控各环节检测到的细菌没有相似性，可判无菌检查不符合规定；查不符合规定；（5）、如果出现供试

15、品管长菌，但从该培养物中分离出的菌株经鉴定）、如果出现供试品管长菌，但从该培养物中分离出的菌株经鉴定与实验室或实验过程监控各环节检测到的细菌有一定的相似性，或与实验室或实验过程监控各环节检测到的细菌有一定的相似性，或回顾实验过程发现实验存在明显疏漏，样品在实验中存在的污染可回顾实验过程发现实验存在明显疏漏，样品在实验中存在的污染可能，则判此次无菌检查实验无效，应按药典规定尽快重新实验。能，则判此次无菌检查实验无效，应按药典规定尽快重新实验。（6）、无菌检查重试实验结果判断同上述（）、无菌检查重试实验结果判断同上述（1）（）（5）。）。山东省药品检验所如何快速完成检验？如何快速完成检验？如何准确

16、下结论？如何准确下结论？应急检验体系建设应急检验体系建设阳性检出菌的综合阳性检出菌的综合分析判断能力建设分析判断能力建设山东省药品检验所 以国内某微生物检验实验室近期的一次实验室污染实例，该实验室在对不同产地的两个品种进行无菌检查时，短期内多次出现无菌阳性结果，对这些阳性培养结果进行分离，得到18株药品检出阳性菌。要求：中检所提供18株药品阳性检出菌，均为冻存管分装的TSA半固体培养物，编号为118（见管壁标记），各编号注释见下表1-1。各所收到菌株后进行转种、培养，并通过鉴定或比较分析鉴定或比较分析等方法技术手段判断判断无菌检查出现的阳性结果确系样品污染确系样品污染或系实验过程污染或系实验过

17、程污染。山东省药品检验所 2010年4月2日，在上海召开了药品微生物实验室能力验证总结会议。山东省药品检验所对于药品微生物检验重点实验的建设工作，一年来重点促进了三项工作的发展：1、实验室装备水平大力提高；2、应急检验能力及阳性检出结果的分析意识和能力加强；3、重点微生物实验室建设理念逐渐深入人心 山东省药品检验所在重点实验室建设之初，各所微生物检验设备整体较差缺乏大型的、较为先进的设备，2009年4月调查各所的主要设备表明，仅有上海、广州、天津所的条件稍好一些。山东省药品检验所20092009年年4 4月调查各所的主要设备月调查各所的主要设备生物安全柜生物安全柜超净工作台超净工作台百级层百级

18、层流流无菌隔无菌隔离器离器培养箱培养箱厌氧培厌氧培养系统养系统COCO2 2培养培养箱箱其他其他黑龙江黑龙江1 1/ / / /6 61 1/ /自动台式灭菌器自动台式灭菌器北京北京3 37 7/ /1 11515/ /1 1酶标仪酶标仪上海上海10108 8/ / /16161 12 21 1、无菌操作手套箱、无菌操作手套箱2 2、梅里埃鉴定系统、梅里埃鉴定系统3 3、酶标仪（无菌室）、酶标仪（无菌室）江苏江苏1 19 9浙江浙江1 11 13 3/ /14141 1/ / /四川四川4 4/ /7 7/ /1 1总后总后/ /6 6/ / /7 7/ / /广州广州1 11 1/ /1 1

19、、APIAPI鉴定系统鉴定系统2 2、2 2台微粒监测仪台微粒监测仪天津天津1 14 4/ / / /厌氧袋厌氧袋/ /1 1、APIAPI鉴定系统鉴定系统2 2、尘埃粒子计数仪、尘埃粒子计数仪山东省药品检验所经过不到一年的时间，各所基本具备了从形态分析、生化鉴别、相似性分析、甚至分子生物学多层次的技术能力，基本达到重点实验2009年的建设目标，可以在未来的应急检验中发挥积极作用。山东省药品检验所单位单位形态分析形态分析生化鉴定生化鉴定相似性分析相似性分析分子生物学技术分子生物学技术上海所上海所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条、梅里埃实验条、梅里埃VITEK2VITEK2Bruker

20、 Tensor27Bruker Tensor2716sRNA16sRNA、杜邦、杜邦RiboprinterRiboprinter天津所天津所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条、梅里埃实验条、梅里埃VITEK2VITEK2Bruker Tensor27Bruker Tensor27杜邦杜邦RiboprinterRiboprinter（外包）（外包）浙江所浙江所显微数码成像显微数码成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2Bruker Tensor27Bruker Tensor27分子生物学（外包）分子生物学（外包）江苏所江苏所显微数码成像显微数码成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2杜邦

21、杜邦RiboprinterRiboprinter，MicroseqIDMicroseqID广州所广州所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条、梅里埃实验条、梅里埃VITEK2VITEK2杜邦杜邦RiboprinterRiboprinter（外包）（外包）黑龙江黑龙江显微数码成像显微数码成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2（外包）（外包）Bruker Tensor27Bruker Tensor27北京所北京所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条实验条Bruker Tensor27Bruker Tensor27总后所总后所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条实验条Bruker Tensor27Bruker Tensor27四川所四川所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条实验条梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2（外包）（外包）山东所山东所显微数码成像显微数码成像APIAPI实验条实验条山东省药品检验所基本具备应急检验能力。很多单位逐渐形成了对阳性结果分离菌株进行形态观察、生化鉴定、遗传信息分析（16sRNA测序、DNA脉冲场电泳分析等）、FTIR相似性分析等多层次的比较分析程序，结合实验监控菌库和过程监控菌株进行实验室排查分析，必要时结合临床数据、现场调查数据和样品与分离菌的关联实验等综合分析，最