生物化学和分子生物学课程试验教学大纲

1、?生物化学?和?分子生物学?课程实验教学大纲课程名称：生物化学与分子生物学实验技术英文名称: Experiment Technology of Biochemistry andMolecularBiology课程编号：实验课性质：必修课程负责人：崔行开放实验工程数：3一、学时、学分课程总学时：70课程总学分：2.0二、适用专业及年级本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理 、预防医学七年制学生。三、实验教学目的与根本要求掌握人体生命的物质根底，生物大分子的结构和功能。掌握各种生物物质能 量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握根本 的生物化学实验技术及验证局部课堂理论知

2、识。在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、 蛋白质及分子生物学等技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液 成分生化测定，以及局部生物化学理论知识的验证。掌握紫外一可见分光光度计、 高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、 电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及考前须知。四、主要仪器设备紫外一可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、 凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。五、实验课程内容和学时分配序 号实验工程 名称实验内容学时分配实验 属性实验类型每组人数实验 要求指导教师已开 侏 开11 可见

3、分光 光度技术2 蛋白质含 量测定1 掌握朗伯-比尔 定律。2.掌握比 色疋量分析标准 曲线的制备。3熟 悉可见分光光度 计的使用。5设计根底2必做已开2紫外分光光 度法测定蛋 白质含量掌握紫外分光光度计的使用方法2综合根底2必做已开3层析技术， 蛋白质的分 离纯化与鉴疋1.熟悉层析技术 的原理、分类及应 用范围。2.掌握凝 胶层析的根本原 理、特点和应用。用 SephadexG25 脱盐法和用离子 交换剂进行蛋白 质的纯化。3.学习 盐析的方法，用醋 酸纤维素薄膜电 泳法进行蛋白质 的鉴定。7设计根底2必做已开4离心技术， 核酸的别离 纯化及含量 测定1 .熟悉离心技术 的根本原理。掌握 离

4、心力及其作用。 掌握常用离心机 使用方法和注意 事项。2.学习核酸 的别离及生物学 特性，了解RNA DNA勺提取和含量 测定方法。7综合根底2必做已开5酶的提取及 比活性测定1 掌握酶提取纯 化的方法和技术 以及应注意的问 题。2.了解测定碱 性磷酸酶活性的 原理和方法。3.掌 握紫外分光光度 计的使用方法。4. 了解蛋白质测定 在医学中的应用。7综合根底2必做已开6底物浓度对 酶促反响速 度的影响本实验以碱性磷 酸酶为例，测定不 同浓度底物时的 酶活性，再根据Li neweaver-Burk 法作图，计算其Km直。2验证根底2必做已开7pH对酶促 反响速度的 影响本实验以磷酸苯 二钠为底物

5、，在不 同pH值的甘氨酸 缓冲液条件下，测 定碱性磷酸酶的 活性，从而确定其 最适pH值。2验证根底2必做已开8温度对酶促 反响速度的 影响本实验以碱性磷 酸酶为例，在不同 温度卜保温 疋 时间，观察酶活性 的差异。2验证根底2必做已开9聚丙烯酰胺 凝胶电泳分 离血LDH 同工酶掌握电泳别离同 工酶的方法并了 解其原理，了解显 色原理，了解血清 乳酸脱氢酶同工 酶电泳别离的临 床意义。5综合根底2必做已开10胰岛素对血 糖含量的影 响及测定1 .熟悉激素对血 糖含量的影响因 素。2学习邻甲苯 法测定血糖的原 理，了解测定血糖 的方法。1.5综合根底2必做已开11糖酵解中间 产物的鉴定1 .复习

6、糖酵解的 主要中间步骤及 其产物，2. 了解一 碘醋酸对 3-磷酸 甘油醛脱氢酶的 抑制作用。1.5验证根底2必做已开12氨基转换作用GPT测疋掌握血清谷丙转 氨酶活性测定的 方法及临床意义1验证根底2必做已开13血清尿素氮 测定学习尿素测疋的 方法。1验证根底2必做已开14血清脂类薄 层层析1 .学习脂类薄层 层析法的具体操 作。2 了解薄层 层析在脂类成份 分析及脂代谢研 究中的用途。1综合根底2必做已开15电泳技术， 血浆脂蛋白 琼脂糖凝胶 电泳1.熟悉电泳技术 的根本原理。2掌 握影响电泳的因 素介质、缓冲溶 液、电场强度、电 渗等。3掌握电泳 技术的应用，了解 电泳的分类。4. 掌握

7、正常人血浆 脂蛋白的分类。1.5综合根底2必做已开161.分子生物 学技术。2. 感受态的转 化和鉴定1.掌握DNA提 取、转染、PCR、 核酸杂交、DNA重组等生物学技 术和方法。2.掌握 感受态的转化和 鉴定。7综合根底2必做开部分17质粒的提取 及鉴定掌握质粒的提取 及电泳鉴定的方 法7综合根底2必做开部分18酶切及酶切鉴定掌握限制性内切 酶的特点及应用。7综合根底2必做开19DNA 的回 收及重组鉴疋学习DNA的回收 方法及重组子的 连接技术.7综合根底2必做开部分20SDS-PAGE 测定蛋白质 分子量在聚丙烯酰胺凝 胶中参加阴离子 去污剂SDS测定 蛋白质的相对分 子量。7综合根底2必做已开21等电聚焦测 测定蛋白质 等电点根据蛋白质在不 同pH环境中所带 净电荷等于零时， 将蛋白质别离。7综合根底2必做未开22脂蛋白的分 离和提纯用不同沉淀剂或 不同浓度的沉淀 剂将脂蛋白分开， 分别测定各类脂 蛋白。5综合根底2选做未开23PCR扩增技 术对提取的基因组 DNA进行随机引 物PCR扩增，再 观察扩增的结果。6研究根底2选做未开24Western 印迹应用Western印迹 技术，分析经 SDS-PAGE 电泳 别离并转移到硝 酸纤维素薄膜上 的特