Workshop 052010 PNEUMONIA__ 1(1)

1、肺炎诊断法Vircell 间接免疫荧光多项测定, 血清学方法诊断肺炎诊断原理 整个实验室诊断方法包括培养法，抗原法和核酸检测法，而血清学检测法只是实验室诊断法中的一种。这些方法中的每一种都能够被其他任何一种所证实，而诊断结论通常很少只用一种方法来证实。 滴度 急性期 恢复期社区获得性肺炎 非典型肺炎是一种相对轻微的传播肺炎，患者一般表现为发烧和咳嗽。这种肺炎之所以被叫做”社区获得性肺炎”是由于它很容易从社区中的一个成员传播到另一个。 诊断细菌性肺炎的多孔测定卡Pneumobact肺炎血清学诊断的间接免疫荧光检测Pneumoslide诊断病毒性和细菌性肺炎的多孔测定卡优点优点缺点缺点金标准金标准

2、定量性技术定量性技术区别区别IgG 和和 IgM 成本低成本低主观技术主观技术不易自动化不易自动化无重组或纯化的抗原无重组或纯化的抗原间接免疫荧光法的特点军团杆菌:8.000-18.000支原体:18.700-108.000衣原体: 5.890-49.700肺炎检测需要的医院需求量以美国每年的情况为例 1991年, 在俄亥俄州对由细菌引起的社区获得性肺炎进行了一项定期的跟踪研究,数据显示了该病在特定年龄阶段的发病情况.支原体感染的血清转化诊断,采用补体结合实验方法. 这些数据显示: 支原体不仅在小于50岁的肺炎患者中是主要的感染源, 而且它也是引起老年群体性肺炎的重要原因. (Sp:肺炎链球菌

3、; Mp:肺炎支原体; Lp:嗜肺军团菌; Cp:肺炎衣原体 )社区获得性肺炎军团杆菌属临床表现临床表现军团病, 是一种包括肺炎在内的严重的多发病. 庞蒂亚克热，一种自限性流感样疾病微生物学特性微生物学特性军团菌属:48个种(70个血清型)嗜肺军团菌:15个血清型已经被培养法或者尿抗原检测法证实了的病例中有79%是由嗜肺军团菌血清I型引起的.诊断方法诊断方法培养法呼吸道标本的抗原检测法尿抗原检测法 PCR 技术 血清学法培养技术培养技术BCYE 琼脂平板法60% 灵敏度. 100%特异性.标本: 血液, 肺组织, 肺活组织样本, 呼吸道分泌物 痰, 支气管肺泡灌洗, 支气管抽吸直接荧光抗体法直

4、接荧光抗体法灵敏度: 25 - 75%特异性: 95%聚单克隆抗体尿抗原检测法尿抗原检测法最新的检测抗原的方法是免疫层析膜法. 这种方法易于操作而且不需要特殊的仪器设备,可在15分钟内获得结果.军团杆菌属PCR 技术技术已进行的几项研究已经表明用PCR法检测军团菌有适度的敏感性和高度的特异性。在呼吸道的分泌物中(如支气管肺泡灌洗液, 咽的拭子, 鼻咽的拭子),外周血的单核细胞中, 尿液和血清中已经检测到了军团菌的DNA。PCR程序可以通过放大化的琼脂糖电泳DNA扩增产物EB染色或者在尼龙膜上用生物素固相化探针反向斑点杂交来说明。军团杆菌属血清学诊断-间接免疫荧光法抗原生长在已灭菌的BCYE培养

5、基中.抗体应答可能是血清特异性的或者是和共同抗原嗜肺军团菌起反应.一些实验室最新的研究已经显示:当用单价抗原重新测试时,25%的多价抗原的血清转化就不能被证实了.军团杆菌属 目前的标准建议提出了利用嗜肺军团菌血清 I 型抗原可以避免多价抗原的干扰. 依据多价池的间接免疫荧光检测结果很难做出准确的诊断. 甚至以军团菌病的培养法为例, 被记录70-80%的患者体内有4倍的抗体增加, 而且在两个月内不会出现血清转化. 通过培养法证实的68位军团菌病患者中仅仅只有10%急性期滴度大于等于256.POSITIVENEGATIVEWEAK军团杆菌属血清学诊断-间接免疫荧光法判读方法Ref. PLESPGL

6、EGIONELLA SP IFA IgGRef. PLEPNGLEGIONELLA PNEUMOPHILA IFA IgGRef. PLEPNMLEGIONELLA PNEUMOPHILA IFA IgMRef. SLEPNLEGIONELLA PNEUMOPHILA IFA SLIDE我们在IgM 试剂盒的展示会上提供完整的配套试剂,包括IgG吸附剂.我们的配套抗原采用的是生长时间为18-20小时的菌株, 因此, 丝状的是不存在的, 这样也避免了假阳性结果. 我们主要的优势之一是配备抗原的方式, 它能产生比较好的结果.军团杆菌属血清学诊断-间接免疫荧光产品血清学诊断血清学诊断- Vircel

7、l 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. G1000LEGIONELLA PNEUMOPHILA SG1 ELISA IgGRef. M1000LEGIONELLA PNEUMOPHILA SG1 ELISA IgMRef. T1001LEGIONELLA PNEUMOPHILA SG1-6 ELISA IgG+ IgM特异性抗原 (LPS)我们提供各种各样的产品 (间接免疫荧光产品和酶联免疫产品)论文发表在临床微生物学杂志上临床表现临床表现 在社区获得性肺炎患者中由肺炎支原体引起的达40%,其中有18%的住院患者是儿童. 最高的发病年龄在5-15岁之间 肺炎是支原体感染最严重的类型。 在儿童中最

8、典型的综合症是气管支气管炎 肺炎支原体感染通常是比较轻微的,而且许多成年感染者是无临床症状的.3-10%的患者会发展成为肺炎.诊断方法诊断方法 培养技术: 低灵敏度, 低特异性 抗原检测法: 低灵敏度, 和其他支原体一起引起的交叉反应. PCR 技术: 经验仍然有限.血清学法支原体血清学诊断法补体结合试验间接免疫荧光法凝集试验酶联免疫法支原体-被感染7天之后发生IgM抗体应答反应, 发病4-6周后滴度达到高峰. 在儿童中一般能持续一年.- 有时感染晚期也会发生IgG抗体水平的升高, IgG抗体的高阳性率情况将会长期存在于支原体肺炎患者的体内, 在成人中由于缺乏IgM抗体应答反应而使应用血清学方

9、法作为诊断肺支感染变得复杂化, 而且加大了此方法的局限性.- 于是, 将PCR方法和血清学方法结合起来就成了诊断肺支感染的最佳的和最合乎逻辑的方法.补体结合实验补体结合实验糖酯类抗原由于补体结合试验主要是检测IgM和少量的IgG,所以对于肺炎支原体感染的早期来说它的诊断价值是有限的.考虑到不能检测由其他微生物引发的交叉反应产生的抗体, 因此, 补体结合实验不适合作为一种标准方法.间接免疫荧光法间接免疫荧光法 能够提供准确的,量化的血清学数据,但是它的判读比较主观而且需要荧光显微镜.凝集反应试验凝集反应试验乳胶或明胶粒子作为载体用肺支抗原结合物同时检测 IgG和 IgM 除了操作上简单容易一些,

10、 其他的对于酶免和间接免疫荧光来说没有任何优势)支原体酶联免疫法酶联免疫法广泛应用于商业化的支原体血清学实验适合于测试大量或者小量的血清, 检测微量抗体, 要求血清的体积是100 l, 比补体结合实验的灵敏度要高的多.多抗原准备: 纯化的蛋白质(包括P1黏附素), -捕获法, 纯化的糖酯类物质和合成肽等.支原体NEGATIVEWEAKPOSITIVE支原体血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光检测间接免疫荧光检测判读方法血清学诊断血清学诊断- Vircell 间接免疫荧光产品间接免疫荧光产品血清学诊断血清学诊断- Vircell 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. G/M1015MYCOPLASMA

11、 PNEUMONIAE ELISA IgG/IgMRef. G1002MYCOPLASMA PNEUMONIAE ELISA IgGRef. M1002MYCOPLASMA PNEUMONIAE ELISA IgM支原体Ref. PMYPNGMYCOPLASMA PNEUMONIAE IFA IgGRef. PMYPNMMYCOPLASMA PNEUMONIAE IFA IgMRef. SMYPNMYCOPLASMA PNEUMONIAE IFA SLIDE 本公司卖得最好的产品之一P1 富集的水溶性洗涤剂抗原产生很好的结果 在市场上有许多竞争厂家临床表现临床表现:60%无临床症状急性感染的疾

12、病: 发热病, 非典型肺炎, 肉芽肿肝炎(每年每10万个居民中就有50例)轻微的: 38%. 严重的: 2%极其严重的: 心内膜炎(每年每100万个居民中就有1例) 微生物学特性微生物学特性 贝纳柯克斯体显示的抗原性变异类似于肠杆菌科中的光滑和粗糙杆菌的变异. 变异期主要和脂多糖的突变有关. 第一阶段在自然感染的动物，节肢动物，或人类中发现。它具有高传染性，相当于具有感染性的脂多糖. 相比之下, 第二阶段并不具有感染性,并且它仅仅在细胞的培养物和鸡胚培养物中才能获得.它相当于不具感染性的脂多糖.立克次体诊断方法诊断方法: 培养技术 PCR 技术 血清学方法-能够区分急性和慢性的Q热感染- 补体

13、结合试验- 间接免疫荧光法- 酶联免疫法- Western 杂交立克次氏体Coxiella burnettiMRC-5 (24 h)II期期抗体滴度抗体滴度I期期抗体滴度抗体滴度(IgG)说明说明IgGIgM 100Active Q fever improbable 200 50Acute Q fever (100% predictive) 1:800Chronic Q fever (98% predictive) 1:1600Chronic Q fever (100% predictive)TABLE 4*. Cut-off proposal for Q fever diagnosis by

14、 using microimmunofluorescence and interpretation of serological results obtained with a single serum sample*Maurin and Raoult. Clin. Microbio. Rev.考克斯氏体属NEGATIVEWEAKPOSITIVE立克次氏体血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光法间接免疫荧光法判读方法Ref. PCOBU I+II COXIELLA BURNETII I+II IFARef. PCOBUGCOXIELLA BURNETII IFA IgG Ref. PCOBUMCO

15、XIELLA BURNETII IFA IgMRef. SCOBUCOXIELLA BURNETII IFA SLIDE完整的IgM试剂盒中包括IgG吸附剂.对于Focus公司,我们的主要优势是价格, 对于Fuller and BioMrieux公司,我们的主要优势是产品的设计.立克次氏体血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光法间接免疫荧光法血清学诊断血清学诊断- Vircell 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. G1001COXIELLA BURNETII ELISA IgGRef. M1001COXIELLA BURNETII ELISA IgM Q热立克次氏体II相抗原 在市场中没有竞争厂家

16、在间接免疫荧光技术中是补充产品临床表现临床表现 90%病例无临床症状 肺炎 哮喘冠状动脉疾病微生物学特性微生物学特性肺炎衣原体抗原似乎是同质沙眼衣原体：15个血清群三鹦鹉热 C. pecorum血清学诊断血清学诊断 补体结合实验 间接免疫荧光法 微量免疫荧光法 酶联免疫法肺炎衣原体C. pneumoniaeHEp-2 (72 h)血清学诊断血清学诊断 IgM抗体在初次感染后6周出现, IgG抗体在此后两周出现. 在老年患者中,升高的IgG水平不能区分是当前感染还是早期的感染.当重复感染时, IgG抗体水平迅速升高,而IgM抗体水平则保持不变.肺炎衣原体血清学诊断血清学诊断由于IgM抗体的存在能

17、更好地诊断主动感染, 故间接免疫荧光法就为反应抗体中免疫球蛋白种类的确定提供了优势.Chlamydophila pneumoniae Chlamydophila psittaciChlamydia trachomatis肺炎衣原体血清学诊断血清学诊断: 微量免疫荧光法检测由肺炎衣原体和沙眼衣原体感染产生的抗体结合物.当交叉反应的程度在实验室之间不同时,就很容易引起争论. 很显然, 基本的抗体包括脂多糖和属特异性抗原,并且二者引发的感染都会产生同样的抗原,因此,交叉反应在一定程度上是可以检测的.Chlamydophila pneumoniaeChlamydophila psittaciChlam

18、ydia trachomatis肺炎衣原体Ref. PCHPNGCHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE IFA IgGRef. PCHPNGCHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE IFA IgGRef. SCHPNCHLAMYDIA IFA SLIDE 在IgM试剂盒中包括IgG吸附剂初级抗原，为微量免疫荧光技术能诊断3种衣原体：每个种都被分开在独立的孔中，使阅读更加容易。血清学诊断血清学诊断- Vircell 间接免疫荧光产品间接免疫荧光产品肺炎衣原体血清学诊断血清学诊断- Vircell 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. A1007CHLAMYDOPHILA PNEUM

19、ONIAE ELISA IgARef. G1007CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE ELISA IgGRef. M1007CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE ELISA IgM COMP抗原和脂多糖被去除来避免和其他种类的衣原体发生交叉反应肺炎衣原体酶联免疫试剂盒有双重用途:-传统的使用方法获得定性结果.-标准校准器能够援助半定量测定，它允许用户将其分配滴度等同于IFA效价。临床表现临床表现: 呼吸道疾病: 7%呼吸道患者是儿童 眼病: 在儿童中20%病例是急性结膜炎 肠胃炎: 在儿童中占3-10% 心肌炎和心包炎. 在免疫缺陷患者中引发的感染: 在骨髓移植中是一

20、个致命的感染病原体诊断方法诊断方法细胞培养技术抗原检测呼吸道标本 PCR 技术 血清学方法腺病毒AdenovirusHEp-2 (24 h)血清学诊断血清学诊断补体结合实验 (灵敏度低)间接免疫荧光法酶联免疫法特异抗原属的交叉反应实验间接免疫荧光法和酶联免疫法有相同的灵敏度腺病毒NEGATIVEWEAKPOSITIVE腺病毒血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光法间接免疫荧光法判读方法Ref. PADNGADENOVIRUS IFA IgGRef. PADNMADENOVIRUS IFA IgMRef. SADNADENOVIRUS IFA SLIDE腺病毒血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光产品间

21、接免疫荧光产品血清学诊断血清学诊断- Vircell 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. G/M1004ADENOVIRUS ELISA IgG/IgM临床表现临床表现呼吸道合胞病毒是唯一的最主要的引起婴儿和儿童下呼吸道感染的病原体.由此病毒感染引起的公共健康问题已被证实, 大概三分之二的婴儿在1岁之前会被感染, 感染者中的三分之一会引发下呼吸道疾病, 2.5%需要住院治疗, 0.1%死亡.诊断方法诊断方法培养技术抗原检测呼吸道标本PCR 技术血清学方法呼吸道合胞病毒RSVHEp-2 (96 h)NEGATIVEWEAKPOSITIVE呼吸道合胞病毒血清学诊断血清学诊断-间接免疫荧光法间接免疫荧

22、光法判读方法Ref. PVSRGRESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IFA IgGRef. PVSRMRESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IFA IgMRef. SVSRRESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS IFA SLIDE呼吸道合胞病毒血清学诊断血清学诊断- Vircell 间接免疫荧光产品间接免疫荧光产品血清学诊断血清学诊断- Vircell 酶联免疫产品酶联免疫产品Ref. G/M1006RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS ELISA IgG/IgM临床表现临床表现流行性感冒在儿童中表现为呕吐和腹泻H3N2 乙型流感病毒 H1N1支气管炎, 耳炎, 哮吼,