高效液相仪器培训

1、Agilent HPLC 12601260 工作原理工作原理及简单操作及简单操作培训目的：培训目的： 1.了解安捷伦lc1260各模块工作原理及注意事项； 2.了解色谱柱使用、维护相关知识； 3.掌握lc1260开关机操作步骤； 4.掌握安捷伦诊断软件使用方法； 5.了解hplc常见故障维护相关知识及日常保养； 高效液相色谱仪（高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatography）。）。 构造：构造：由由储液器、泵、自动进样器、色谱储液器、泵、自动进样器、色谱柱、检测器、工作站等几个部分组成。柱、检测器、工作站等几个部分组成。 原理：原理：工工作时储液

2、器中的流动相被高压泵作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送

3、到工作站，数据以浓度被转换成电信号传送到工作站，数据以图谱形式打印出来。图谱形式打印出来。经典的经典的LC1260堆积方式：堆积方式：优化流路减小死体积和延迟体积优化流路减小死体积和延迟体积流路自上而下流路自上而下溶剂柜：放置溶剂瓶，管路入口装有过滤溶剂柜：放置溶剂瓶，管路入口装有过滤器，过滤可能存在的固体颗粒物器，过滤可能存在的固体颗粒物脱气机：除去溶解在流动相中的空气，以脱气机：除去溶解在流动相中的空气，以免照成基线噪声免照成基线噪声四元泵：将溶剂按一定的比例和流速传输四元泵：将溶剂按一定的比例和流速传输至整个系统至整个系统自动进样器：按设定样品量吸取样品，将自动进样器：按设定样品量吸取样

4、品，将样品引入系统样品引入系统柱温箱：色谱柱安装与此，维持恒定温度，柱温箱：色谱柱安装与此，维持恒定温度，使样品在稳定的条件下分离。使样品在稳定的条件下分离。检测器：对分离后的各组分进行检测，产检测器：对分离后的各组分进行检测，产生响应信号生响应信号工作站：接受信号，转换成色谱峰，可以工作站：接受信号，转换成色谱峰，可以对其进行积分，计算结果对其进行积分，计算结果 每个部件接通电源后LED灯显示绿色关机 power off准备进样 power on没准备好Not Ready运行Run故障Error驻留ResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示黑Black黑Black黄Yellow

5、绿Green红Red黄闪烁Yellow blinking6种LED仪器状态：每个模块都有独立电源每个模块都有独立电源各个模块均由各个模块均由CANCAN线连接线连接检测器与工作站之间用检测器与工作站之间用LANLAN线连线连 接接 HeHe脱气脱气真空脱气真空脱气回流加热脱气回流加热脱气超声脱气超声脱气 为保证脱气机的良好使用性能，在下述情为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路：况下需要用注射器抽洗脱气机管路：1 1、新的脱气机或新的管路；、新的脱气机或新的管路；2 2、更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间

6、的互换时；两个不相容流动相之间的互换时；3 3、输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶、输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物；剂混合物；4 4、流动相使用前超声。、流动相使用前超声。 主泵腔的活塞运动速度为副泵腔活塞运动速度的二倍。因此，相同时间内，主泵腔提供的流量是副泵腔的两倍，主泵腔提供的溶剂一半直接供给系统，另一半被副泵腔吸入，稍后供给系统。保证了流动相流速的均一、稳定。 打开冲洗阀，以打开冲洗阀，以纯化水纯化水为流动相，为流动相，设置流量为设置流量为5ml/min5ml/min，此时系统压力如果，此时系统压力如果超过超过10bar10bar，则需，则需更换过滤白头更换过滤白头。更

7、换步骤：更换步骤：1 1，关闭泵电源；，关闭泵电源；2 2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管；拔掉废液管；3 3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；4 4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出；垫，将过滤白头拿出；5 5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫；密封垫和金密封垫；6 6，装上清洗阀；，装上清洗阀；7 7，连接管路。，连接管路。1 1、溶剂的过滤、脱气；、溶剂的过滤、脱气；2 2、避免使用腐蚀性溶剂；、避免使用腐蚀性溶剂

8、；3 3、在满足分析的前提下，尽可、在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速能使用较低的流速较低的系统较低的系统压力。压力。4 4、更换过滤白头；、更换过滤白头；5 5、考虑溶剂的相容性；、考虑溶剂的相容性；6 6、尽可能使用新鲜的水；、尽可能使用新鲜的水；7 7、使用、使用0.01M0.01M以上浓度的缓冲溶以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。不能干涸。8 8、使用正相溶剂比如环己烷时，、使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，在建议使用聚乙烯密封垫，在00200Bar200Bar下使用聚乙烯密封垫比标下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨

9、损。准密封垫更耐磨损。四元泵：四元泵： 四元泵多通道比四元泵多通道比例阀使用时注意，缓例阀使用时注意，缓冲溶液要放下面的通冲溶液要放下面的通道，有机相放在上面道，有机相放在上面的通道。的通道。进样针：平头微量进样器进样针：平头微量进样器进样量：满环进样，需推入进样量：满环进样，需推入3-53-5倍定量环体积的样品倍定量环体积的样品动作：在充样（动作：在充样（LoadLoad）状态下推针，动作要）状态下推针，动作要平缓、匀速平缓、匀速，以防止样，以防止样品冲出品冲出。进。进样后先切换到进样（样后先切换到进样（InjectInject）状态再拔针，以防止倒吸）状态再拔针，以防止倒吸或产生气泡或产生

10、气泡清洗进样口：在进样（清洗进样口：在进样（InjectInject）状态下清洗进样口）状态下清洗进样口废液口：废液管的出口末端应与进样口平行，防止样品的倒流泄漏废液口：废液管的出口末端应与进样口平行，防止样品的倒流泄漏和虹吸和虹吸样品要干净、经过过滤。样品要干净、经过过滤。洗针：把洗针：把样品残留样品残留降低到降低到最小最小限度限度，可降低进样的，可降低进样的记忆效应记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。洗针瓶最好不要加瓶垫。进样小瓶和瓶盘要保持干净，进样小瓶和瓶盘要保持干净，不能有灰尘。不能有灰尘。控制范围：最高控制范围：最高80C80C，低，低温温低于室温低于室温10C10C。预热块体积左面为

11、预热块体积左面为3ul3ul，右面为右面为6ul6ul，除非有特殊要，除非有特殊要求，左右温度应保持一致。求，左右温度应保持一致。色谱图：某一波长下各个采集时刻色谱图：某一波长下各个采集时刻的吸光度值描点得到的图。的吸光度值描点得到的图。光谱图：某一时刻各个波长吸光度光谱图：某一时刻各个波长吸光度值描点得到的图。值描点得到的图。DAD DAD 二极管阵列检测器二极管阵列检测器VWDVWD紫外检测器紫外检测器MWDMWD紫外检测器紫外检测器波长范围广波长范围广 更换氘灯方便更换氘灯方便内置钬玻璃可以快速进行内置钬玻璃可以快速进行波长校准波长校准VWDVWD检测器前视图检测器前视图打开氘灯后要预热

12、，新灯大概需要预热打开氘灯后要预热，新灯大概需要预热十几分钟，如果灯已经使用了很长时间，十几分钟，如果灯已经使用了很长时间，那么预热时间也要适当的延长。那么预热时间也要适当的延长。不能频繁的开关灯，否则会影响氘灯的不能频繁的开关灯，否则会影响氘灯的寿命。寿命。氘灯属于消耗品，使用时间为氘灯属于消耗品，使用时间为20002000小时小时左右，在接近使用寿命时应进行灯的能量左右，在接近使用寿命时应进行灯的能量测试，以判断是否需要更换。测试，以判断是否需要更换。氘是一种衰变元素，不建议一次采购很氘是一种衰变元素，不建议一次采购很多。多。结构：柱管、压帽结构：柱管、压帽/ /卡套、筛板（滤片）、堵头。

13、卡套、筛板（滤片）、堵头。规格：规格：4.64.6250mm250mm，5um5um（常见）（常见）填料：反相色谱柱填料：反相色谱柱 C C1818、C8C8，正相，正相 硅胶硅胶柱身标示：柱身标示：P/N P/N 是是 product numberproduct number，是产品的，是产品的编号标识，类似于货号。编号标识，类似于货号。S/N S/N 是是serial number serial number 是产品的生产系列号，类似于是产品的生产系列号，类似于身证号身证号码，是码，是某某个货号下不同产品的区分。个货号下不同产品的区分。1.1.使用色谱柱前先看说明书使用色谱柱前先看说明书，

14、寻找有用的信息（，寻找有用的信息（PhPh、再生方法、再生方法、第一次使用怎么冲洗第一次使用怎么冲洗）2.2.在使用、运输过程中避免机械振动。在使用、运输过程中避免机械振动。3.3.使用合使用合适适pHpH的的溶剂作为流动相。溶剂作为流动相。4.4.使用温度低于使用温度低于4040。5.5.长时间使用水流动相与缓冲盐溶液中加长时间使用水流动相与缓冲盐溶液中加200ppm200ppm的叠氮钠，的叠氮钠，以防以防止长菌止长菌。6.6.流动相中含有缓冲盐溶液，冲洗要注意。流动相中含有缓冲盐溶液，冲洗要注意。7.7.过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，

15、用纯有机溶剂流动相保存（95%95%乙晴最好）。乙晴最好）。8.8.长时间不用的话，定期长时间不用的话，定期甲醇或乙腈甲醇或乙腈冲洗，防止填料干涸。冲洗，防止填料干涸。9.9.填料塌陷时，打开色谱柱，填充填料。填料塌陷时，打开色谱柱，填充填料。10.10.样品脏的话，使用保护住和在线过滤器。样品脏的话，使用保护住和在线过滤器。11.11.样品要过滤。样品要过滤。12.12.不要高压冲洗色谱柱。不要高压冲洗色谱柱。开机操作：开机操作：1 1，打开计算机。，打开计算机。2 2，打开，打开LCLC各模块的电源，等待仪各模块的电源，等待仪器自检完毕，器自检完毕，1-2min1-2min。3 3，双击桌

16、面上，双击桌面上“联机联机”图标，进图标，进入化学工作站入化学工作站, ,调用相应方法，在调用相应方法，在工作站打开各工作模块。工作站打开各工作模块。4 4，打开，打开10%10%异丙醇清洗异丙醇清洗液液( (泵泵) )开开关。关。5 5，打开清洗阀，排除系统中的气，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多泡，平衡差不多30min.30min.6, 6, 拧上清洗阀，将流量设为所需拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡流速，平衡30min30min即可以进样。即可以进样。关机操作：关机操作：1 1，如果使用了缓冲盐溶液流，如果使用了缓冲盐溶液流动相应先用水冲洗系统动相应先用水冲洗系统30min3

17、0min。2 2，用纯有机相冲洗系统，用纯有机相冲洗系统30min30min。3 3，在工作站上关闭各个模块。，在工作站上关闭各个模块。4 4，退出工作站，关闭，退出工作站，关闭LCLC各个各个模块的电源。模块的电源。5 5，关闭计算机。，关闭计算机。样品没有完全溶解样品没有完全溶解柱头塌陷或柱床运动柱头塌陷或柱床运动柱柱前前筛板被堵、污染筛板被堵、污染组分共流出组分共流出样品量过大样品量过大样品劣化样品劣化流通池脏流通池脏氘灯能量下降氘灯能量下降泵的压力不稳泵的压力不稳检测器上的柱温效应检测器上的柱温效应流通池中有气泡流通池中有气泡流动相混合不均匀流动相混合不均匀流动不相容流动不相容其它电子

18、设备的影响其它电子设备的影响梯度洗脱的溶剂有紫外吸收梯度洗脱的溶剂有紫外吸收流动相脏流动相脏色谱柱没有平衡好色谱柱没有平衡好系统被污染系统被污染室温变化剧烈室温变化剧烈流通池被污染、有气泡或者破裂流通池被污染、有气泡或者破裂用尽可能短的管线连接用尽可能短的管线连接确认连接管、接头相互匹配确认连接管、接头相互匹配使用死体积小的流通池使用死体积小的流通池减小进样量减小进样量色谱柱被污染，柱效降低色谱柱被污染，柱效降低样品劣化样品劣化 所有峰都扩展所有峰都扩展柱效降低或填料塌陷柱效降低或填料塌陷进样量过大进样量过大流动相粘度大流动相粘度大色谱柱筛板污染，柱效降低色谱柱筛板污染，柱效降低 部分峰扩展部分峰扩展前一次分析样品的流出物前一次分析样品的流出物大分子量样品大分子量样品 所有峰都拖尾所有峰都拖尾样品过载或样品溶剂不样品过载或样品溶剂不 匹配匹配柱外扩散效应柱外扩散效应柱效降低或填料塌陷柱效降低或填料塌陷重金属影响重金属影响 部分峰都拖尾部分峰都拖尾碱性化合物和硅羟基作碱性化合物和硅羟基作用用大峰后可能有未分离的大峰后可能有未分离的小峰小峰堵堵色谱柱进口筛板被堵色谱柱进口筛板被堵