酶解法制备葡萄糖酸钙

1、酶法制备葡萄糖酸钙酶法制备葡萄糖酸钙 月饼小分队：白朋纲月饼小分队：白朋纲 杨梦雪杨梦雪 姜昌熊姜昌熊 张雪冰张雪冰钙是体内含量最大的无机物，为维持钙是体内含量最大的无机物，为维持人体神经，肌肉，骨骼系统，细胞膜人体神经，肌肉，骨骼系统，细胞膜和毛细血管通透性正常功能所必需。和毛细血管通透性正常功能所必需。 葡萄糖酸钙在中国和许多国家的药典里都有葡萄糖酸钙在中国和许多国家的药典里都有收藏，是一种我们比较熟悉的的药物，葡萄收藏，是一种我们比较熟悉的的药物，葡萄糖酸钙常常被用来做补钙剂。它有利于人体糖酸钙常常被用来做补钙剂。它有利于人体骨质的形成，对青少年骨骼发育有促进作用骨质的形成，对青少年骨骼

2、发育有促进作用,同时由于它是一种抗过敏溶解度高，生理活同时由于它是一种抗过敏溶解度高，生理活性大的钙营养药，可以治疗生理性缺钙症和性大的钙营养药，可以治疗生理性缺钙症和血钙引起的手足抽搐、痉挛等症，以及治疗血钙引起的手足抽搐、痉挛等症，以及治疗软骨、佝偻等缺钙症。软骨、佝偻等缺钙症。发酵法：营养盐和黑霉菌种子营养液，发酵法：营养盐和黑霉菌种子营养液，进行发酵。发酵液加石灰乳中和，过滤，进行发酵。发酵液加石灰乳中和，过滤，滤液减压浓缩，结晶得到粗品，经精制滤液减压浓缩，结晶得到粗品，经精制得到葡萄糖酸钙。得到葡萄糖酸钙。（生产成本较高，纯化工艺较复杂生产成本较高，纯化工艺较复杂 ） 试验原理（1

3、 1）- -淀粉酶淀粉酶(EC (EC 3.2.1.1)3.2.1.1)又称液化型又称液化型淀粉酶，它作用于淀淀粉酶，它作用于淀粉时，随机的从淀粉粉时，随机的从淀粉分子内部切开分子内部切开-1,4-1,4糖苷键，使淀粉水解糖苷键，使淀粉水解成糊精和一些还原糖。成糊精和一些还原糖。（2 2）糖化酶（）糖化酶（EC 3.2.1.3EC 3.2.1.3）又）又称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀粉时，从淀粉分子的非还原端粉时，从淀粉分子的非还原端开始逐个地水解开始逐个地水解-1,4-1,4糖苷键，糖苷键，生成葡萄糖和一些低聚糖，且生成葡萄糖和一些低聚糖，且糖化酶还有一定的水解糖化酶还

4、有一定的水解-1,6-1,6糖苷键和糖苷键和-1,3-1,3糖苷键的能力糖苷键的能力(C6H10O5)n +nH2OnC6H10O6-淀粉酶淀粉酶糖化酶糖化酶 试验原理（3 3）葡萄糖氧化酶（）葡萄糖氧化酶（EC 1.1.3.4EC 1.1.3.4）是）是一种糖蛋白，它能够特异性的氧化一种糖蛋白，它能够特异性的氧化- -D-D-葡萄糖生成中间产物葡萄糖生成中间产物D-D-葡萄糖酸葡萄糖酸- - - -内酯和过氧化氢，并发生非酶促反应内酯和过氧化氢，并发生非酶促反应水解为葡糖酸。水解为葡糖酸。（4 4）过氧化氢酶）过氧化氢酶（EC1.1.1.1.6EC1.1.1.1.6）它以过氧化氢作它以过氧化

5、氢作为专一的底物，为专一的底物，催化过氧化氢分催化过氧化氢分解为水和氧气保解为水和氧气保护酶受到过氧化护酶受到过氧化氢的毒害。氢的毒害。4C6H12O6+3O2+2H2O4C6H12O7+2H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶2C6H12O7+CaCO3Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O2H2O22H2O+O2过氧化氢酶过氧化氢酶500ML烧杯烧杯， PH试纸试纸， 玻玻璃棒璃棒， 水浴水浴锅锅， 电炉电炉， 石棉网石棉网， 温温度计度计， 滤纸滤纸， 漏斗漏斗， 电子电子天平天平， 量筒量筒等常用试验用等常用试验用器材器材实验器材实验器材淀粉，淀粉， a-淀粉淀粉酶酶， 糖化酶糖化酶 ，

6、葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶酶 ， 过氧化过氧化氢酶氢酶 ， NaOH Na2CO3 ，CaCO3， CaCl2， 碘液碘液 ，活性，活性炭等等炭等等试验试剂试验试剂 操作步骤操作步骤一，葡萄糖标准曲线一，葡萄糖标准曲线配置配置5个梯度个梯度浓度的浓度的葡萄糖葡萄糖标准溶液标准溶液各取各取1mL分装分装于五支试管中于五支试管中设置一个空白设置一个空白组组分别加入分别加入2mL DNS试剂试剂沸水浴中沸水浴中2min后取出后取出加加蒸馏水至蒸馏水至15mL测定吸光值，测定吸光值，获得标准曲线获得标准曲线 操作步骤操作步骤 45g淀粉淀粉+150ml水水搅拌搅拌 Na2CO3调调节节pH=6-6.4 加

7、入加入a-淀粉淀粉酶，酶，72加加热搅拌热搅拌15min 再加热至再加热至9030min 淀粉糊化淀粉糊化加加热热到到沸腾沸腾10min，酶酶失活失活二，液化二，液化冷却至冷却至55-60加入糖加入糖化酶化酶调节调节ph=4.5于于60-65恒恒温水浴温水浴糖化糖化3-4h加入活加入活性炭，性炭，在在80搅拌搅拌30min抽滤抽滤，得到透得到透明糖液明糖液测量葡测量葡萄糖含萄糖含量量三，糖化三，糖化 操作步骤操作步骤四，四，双酶氧化双酶氧化葡萄糖+CaCO3 (过量) 加过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶35搅拌反应，通过pH判断反应进行的程度反应结束，加活性炭脱色获得葡萄糖酸钙溶液 操作步骤操作步骤 试验结果试验结果吸光值吸光值1.4142.6822.8912.9583