细胞培养的注意事项

1、相关疾病：每天对待细胞比孝敬爹妈还认真，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培育细胞时有哪些惨痛阅历教训可以共享呢?早走早脱身，从今专注黑生物1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。2. 不要和别人共用试剂耗材，自己预备一套。3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。4. 水浴锅很脏，生化培育箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。非科班出身阅历共享1. 别怕铺张。枪头什么的只要有可能污染就换

2、，假如用酒精灯就什么都略微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来. 刚开头的时候吹细胞太苦痛了，略微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培育基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。3. 离开过操作台的东西再进操作台之前肯定要用酒精喷一遍，包括一切试验耗材、仪器、以及你带着手套的手。4. 试验结束后对试验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比照试验台，又比如培育箱内部。6. 细胞的密度依据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培育基的话

3、最多最多不要超过 2 天就要换一次。细胞可以不传代，但是培育基是肯定要换的。或许就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该用劲的时候确定不模糊，不该用劲的地方肯定忍住。假如是比较简陋的操作台就肯定要摆个酒精灯，全部操作紧密围绕在酒精灯四周进行。假如是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物的试验，心疼钱就还是不要做了。最终一点点确定非科班的阅历。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了 5 天吧，感觉都长了几层出来，培育基都黄了。抱着试一试的心情传了一次，又坚强的活过来了。当然，状态确定也差的很了。换种心情，好好生活!养了三年细胞，各种肿瘤细胞，说一点自己的看法：1. 培育细胞前，可以看看细胞特

4、点说明书，包括细胞正常生长的状态图、传代、培育基的类型等。2. 不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的格外之一就已经足够了，有的又是特殊慢，等的人心焦，BT474 就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培育细胞的过程中多多摸索了。3. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要留意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观看培育基状况、显微镜下观看细胞生长状况。4. 冻存细胞复苏后其次天最好更换一次培育基。5. 培育箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。6. 养细胞最大的教训：不能偷懒!细胞虐

5、我千百遍，我待细胞如初恋。1. 不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手抓紧做两件事：检测是否有支原体污染; 快速扩增冻存。2. 发觉有污染快速处理掉，特殊是当你养了很多种细胞时; 细菌污染，真菌污染很简洁发觉，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原体检测的 kit 定期检测一下。3. 细胞房日常的值日清洁是必需的，此外还要定期熏蒸。4. 细胞的传代肯定要规律，保持相同的 confluency 和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延。5. 留意个人卫生。靠内心感动细胞1. 自己的细胞自己养，血的教训。2. 在生物平安柜 (或者超净台)，枪头，血清管，血清，培育基，瓶子都足够好，并且细胞房有良好的卫生措

6、施 (比如隔离服，手套，口罩，清洁，HEPA 等等) 且不违法操作原则的状况下，你其实很难污染。3. 上述条件不完备的状况下，就要多留意无菌操作了：比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好，由于会拦住紫外线)，使用前 SDS+酒精擦台子，进出超净台肯定要酒精擦手。4. 少对细胞说话，多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不行以的!) 至少 1 天看 1 次。养细胞很简洁养细胞真的不难，最关键几点：1. 全部的东西使用最好的，假如你用的血清、培育皿、培育基、胰酶什么的都是进口的，真的很难信任你会把细胞养坏。2. 动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，

7、要把握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的缘由。3. 有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培育皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。4. 要做什么心里要格外清楚，合理支配时间，细胞房的试验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽搁别人的试验。5. 个人的试验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西略微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢。6. 细胞房不能进去太多人，避开相互干扰。细胞养不好，自挂东南枝现在一大型药企养细胞做检测，工作量很大，很多地方都没方法格外认真的做。但是两年下来只消灭过一次污染，总结一下心得：1. 好的洁净室，空调系统跟得上。

8、2. 好的生物平安柜，硬件跟的上。3. 瓶子移液器吸头大都是进口，耗材跟的上。除了这些就是自己的操作习惯了。4. 任何东西不要从放开的瓶口上面经过。5. 虽然酒精灯会干扰平安柜气流但是还是需要一盏用来勤烧瓶口。6. 试验时所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。养细胞就像打仗细胞饲养涵盖的内容太广了，而且不同种类细胞的饲养难度以及技术要求不同，肿瘤细胞，成纤维细胞，上皮细胞. 甚至各类干细胞. 每一种都有自己的生长要求。假如只是单纯的一般性操作，大同小异，个人觉得练好技术的状况下留意几点就好:1. 各种无菌，从培育基到操作过程再到培育箱，时刻留意无菌。本人曾经所在的试验室消灭过

9、大规模污染并最终导致全部细胞集体毁灭. 教训惨痛。2. 培育基的配制肯定要做好梯度摸索并具体记录，否则细胞死都不知道怎么死的。3. 尽量提高操作娴熟度，削减培育皿在培育箱外的滞留时间，细胞很脆弱，经不起折腾，不像人，热了有空调，冷了能烤火。4. 把握好培育基更换的时间，不同细胞类型时间不同，早了铺张试剂，晚了可能全军覆没。5. 阅历很重要，养细胞的很多阅历你是无法在公开的书籍和资料上找到的。多向试验室前辈学习，他们会让你少走很多弯路，真的。养细胞就像打仗，知彼知己，百战不殆。只有了解你养的对象，才能把他养好。细胞就是矫情养细胞细胞这个东西呢有的时候真说不清。养过一段时间的巨噬细胞，一开头操作各种谨慎当心，随时