球菌（76页）教学课件

1、 球菌球菌（cocci） 菌体形态为球形的一类细菌。临床上通常引起化脓性感染，又称化脓性球菌（pyogenic cocci）。 与医学有关的革兰阳性兼性厌氧球菌有9属。本章主要介绍临床最常见的兼性厌氧球菌，包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。 革兰阴性球菌主要包括奈瑟菌属（Neisseria）和莫拉菌属（Moraxella）。第一节 葡萄球菌属 葡萄球菌属（Staphylococcus）在自然界广泛分布。存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株可致多种化脓性感染，如疖、痈、脓肿、菌血症等，还可引起烫伤样皮肤综合征和毒性休克综合征等疾病。葡萄球菌属 目前有35个种、17个亚种，引起人类疾病的重要菌有金黄

2、色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），头状葡萄球菌（S.capitis），人葡萄球菌（S.hominis）等。 临床常以是否产生凝固酶分为凝固酶阳性和凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase negative staphylococcus, CNS）。 根据噬菌体分型，可分成45群26型。 利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，用来研究细菌的致病性、耐药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系。 该属细菌DNA G+C mol%为30%39%。 二、临床意义 （一）致病因素 1.酶类 （1）凝固酶 （2）耐热核酸酶 （3）透明

3、质酸酶、磷脂酶 2.毒素 （1）葡萄球菌溶素 （2）肠毒素 （3）毒性休克综合征毒素 （4）杀白细胞素 （5）表皮剥脱毒素 （1）凝固酶 葡萄球菌属产生2种血浆凝固酶： 结合凝固酶或聚集因子，是结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集； 游离凝固酶，是细菌分泌到菌体外的凝固酶，能被血浆中的协同因子（cofactor）激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，而使血浆凝固；保护病原菌不被吞噬或免受抗体等的作用。（二）所致疾病 1.化脓性疾病 1）皮肤化脓性感染 2）各种器官的化脓性感染 3）全身感染 2.毒素性疾病 1）食物中毒 2）烫伤样皮肤综合征 3）毒素性休克综

4、合征（TSS） 4）假膜性肠炎 3.医院感染三、微生物学检验 （一）葡萄球菌的基本特性 1.形态结构 2.抗原成分 1.葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal protein A,SPA） 位于菌体表面，存在于菌细胞壁的一种表面蛋白。可与IgG的Fc段结合，应用于协同凝集试验。 A蛋白有抗吞噬作用，还有激活补体替代途等活性。是完全抗原，具属特异性。 2.多糖抗原 具有群特异性，细胞壁中的磷壁酸包含的N-乙酰葡胺核糖醇残基为A群多糖抗原；N-乙酰区糖胺甘油残基为B群多糖抗原。 3.荚膜抗原 几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别菌株有此抗原。 3.变异性

5、（1）细菌细胞壁缺陷型 受抑制破坏细胞壁药物或外界因素作用，可以形成细胞壁缺陷型细菌，在高渗环境中生存。 （2）耐药性变异 部分菌株通过获得外源性的mecA而产生青霉素结合蛋白2a（PBP2a），导致对所有内酰胺类抗生素耐药。2021/7/9119、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:11:47 PM11、人总是珍惜为得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人乱于心，

6、不宽余请。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-62022-3-62022-3-615、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-3-62

7、022-3-62022-3-62022-3-64.培养特性 兼性厌氧菌，有氧条件下生长较厌氧条件迅速和旺盛 对营养要求不高，最适生长温度3537，最适pH7.47.6。 普通培养基上形成直径23mm不透明的圆形凸起菌落。产生金黄色、白色、柠檬色等非水溶性色素附着在菌落上。 金黄色葡萄球菌 血琼脂平板上菌落周围有透明溶血环 能在含10%15% NaCl琼脂中生长 甘露醇高盐平板上为黄色菌落。 5.抵抗力 该菌的抵抗力比其他无芽胞细菌强，耐干燥；近年来耐药性增强，对多种抗菌药物不敏感。葡萄球菌内携带诱导性的青霉素酶和乙酰基转移酶质粒，通过转导进行质粒的转移。 （二）葡萄球菌的临床检验程序 标本采集

8、：根据感染的部位，采集不同的标本。该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。 标本直接检查 显微镜检查 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液等可直接涂片、革兰染色后，显微镜检查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌，则具有重要临床价值；其他体液标本查见细菌的同时伴有炎性细胞则也具有参考价值。可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并进一步进行分离和鉴定。 抗原检测 乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原。 核酸检测 针对耐热核酸酶nuc、16S rRNA可鉴定葡萄球菌，测定macA可以快速检出MRSA。分离培养与鉴定 分离培养 脓液、分泌物等临床标本可接种血琼脂平板； 有污染的标本如粪便

9、等应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板； 血液标本则用肉汤增菌培养基增菌后。初步鉴定 1）菌落性状 平板培养基上孵育24h后，菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实。 2）鉴别试验 触酶试验阳性、溶葡萄球菌素（200g/ml）和呋喃唑酮100g敏感，氧化酶试验阴性可以与其他革兰阳性球菌区别。 红霉素（0.4g/ml）耐药和甘油需氧产酸可以与微球菌区别。 （3）种的鉴定 1）凝固酶试验 玻片法测定结合型凝固酶；试管法测定分泌型凝固酶。金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶而不分泌游离型凝固酶, 因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验

10、阴性。 2）耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。3）其他鉴定试验 磷酸酶试验、吡咯烷酮芳基酰胺酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、-半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B耐药试验、糖产酸试验是常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验。（3）肠毒素检测 1）生物学试验 采用幼猫腹腔注射(肉汤培养物或呕吐物)，4h 内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者，提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在。 2）琼脂扩散试验或ELISA法测定 用琼脂扩散试验、ELISA法或放射免疫分

11、析法检测样本中的肠毒素。 3）肠毒素基因测定 针对肠毒素基因设计毒素的通用引物及特异性引物，应用PCR技术可直接进行分型测定。第二节 链球菌属 链球菌属（Streptococcus）细菌种类多，分布广，是人和某些动物的寄生菌。其中某些菌种为毒力强的致病菌，另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道，还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌 一、分类 （一）A、C、G群溶血性链球菌 菌落直径大于0.5mm A群的化脓性链球菌（S. pyogenes）、C群、G群的马链球菌（S.equi）和似马链球菌（S.equismilis）； 菌落直径小于0.5mm 具A、C、G群抗原，统称

12、米勒链球菌（S.milleri），主要分为3种：咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌。除此之外，米勒链球菌还有溶血和不溶血的细菌。 （二）B群溶血性链球菌又称无乳链球菌（S.agalactiae）。 （三）溶血性链球菌 包括肺炎链球菌（S.pneumoniae）和草绿色链球菌群（Viridans streptococci）。 （四）不溶血D群链球菌 牛链球菌（S.bovis）二、临床意义 （一）致病因素 1.菌体细胞壁成分 （1）脂磷壁酸 位于细胞壁中并伸展至菌体表面，与黏附宿主细胞有关。 （2）M蛋白 是链球菌细胞壁中的表面蛋白质，具有抗吞噬和抵抗细胞内杀菌作用。M蛋白有抗原性，能刺激机体

13、产生型特异性抗体；与心肌、肾小球基底膜有共同抗原成分。2.侵袭性酶 （1）链道酶（SD） 也称链球菌DNA酶，能分解黏稠脓液中具有高度黏性的DNA，使脓汁稀薄易于扩散。主要由A、C、G群链球菌产生。 （2）透明质酸酶 能分解细胞间质的透明质酸，使病菌易于在组织中扩散，又称扩散因子。 （3）链激酶（SK） 又称链球菌溶纤维蛋白酶，能激活血液中溶纤维蛋白酶原转化为溶纤维蛋白酶，使之溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌在组织中扩散。重组链激酶目前用于治疗血栓性疾病。 （4）胶原酶 能水解肌肉和皮下组织中的胶原蛋白纤维，便于细菌在组织中扩散。3.外毒素 （1）链球菌溶素 （2）致热外毒素（1）链球菌溶素

14、 有溶解红细胞，破坏白细胞、血小板及毒害心脏作用 根据对O2稳定性：链球菌溶素O和链球菌溶素S1.SLO 绝大多数A群链球菌株和许多C、G群菌株能产生SLO，SLO为含-SH基的蛋白质，遇氧时-SH基被氧化为-S-S-基，失去溶血能力。若加入亚硫酸钠和半胱氨酸等还原剂，溶血作用可以逆转。SLO对中性粒细胞有破坏作用；对哺乳动物的血小板、心肌细胞、巨噬细胞、神经细胞等也有毒性作用。抗原性强，感染后患者机体产生抗SLO抗体，病愈后可持续数月甚至数年。风湿热患者血清SLO抗体显著增高，活动性病例升高更显著，可作为新近链球菌感染或风湿活动的辅助诊断。 2.SLS 是一种小分子的糖肽，无抗原性。对氧稳定

15、，对热和酸敏感。多数A、C、G群及某些其他群链球菌产生。能破坏白细胞和血小板。血琼脂平板上菌落周围的溶血环是由SLS所致。（2）致热外毒素 由A群链球菌溶原菌株产生的致热外毒素（SPE），曾称红疹毒素或猩红热毒素。 为蛋白质，对热稳定，具有抗原性，是人类猩红热的主要致病物质，具有损害细胞或组织，使患者产生红疹并具内毒素样致热作用。 分为A、B、C三型，A型和C型分别由噬菌体携带的speA和speC编码，B型由染色体基因speB编码。均为超抗原，刺激T细胞诱发淋巴细胞合成和释放TNF、IL-1和IL-6，进一步导致发热、休克及组织损伤。 （二）所致疾病 1侵袭性疾病 皮肤和皮下组织急性化脓性炎症

16、 感染部位界限不明显，脓性分泌物稀薄，常引起蜂窝组织炎；沿淋巴管和血流扩散引起急性淋巴管炎、淋巴结炎及败血症。 其他感染 如扁桃体炎、咽炎、中耳炎、乳突炎、肾盂肾炎、产褥热等。无乳链球菌引起新生儿菌血症和脑膜炎。肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。 草绿色链球菌是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群；可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎。2毒素性疾病 （1）猩红热 是由产生SPE的A群链球菌引起的全身中毒症状。常继发于严重的咽炎或皮肤软组织感染。少数还可见心肌炎、肾小球肾炎等病变。3变态反应性疾病 （1）风湿热 由A群链球菌的多种

17、型别引起，常继发于A群链球菌感染的咽炎，潜伏期为15周，易感人群为10岁以下儿童。临床表现以风湿性关节炎、风湿性心脏病为主。致病机制链球菌细胞壁多糖抗原与心肌瓣膜、关节组织糖蛋白有共同抗原性；胞壁蛋白抗原与心肌有共同抗原性；属第型变态反应。可能是M蛋白的免疫复合物沉积于心瓣膜和关节滑液膜上造成。属第III型变态反应。3变态反应性疾病 （2）急性肾小球肾炎 大多数由A群12型链球菌引起，多见于儿童和少年。临床表现为蛋白尿、浮肿和高血压。其致病机制：链球菌的某些抗原与肾小球基底膜有共同抗原，机体针对链球菌所产生的抗体与肾小球基底膜发生反应，属第II型变态反应；由链球菌的M蛋白所产生的相应抗体形成的

18、免疫复合物沉积于肾小球基底膜，造成基底膜损伤，属于第III型变态反应。猪链球菌病 猪链球菌病主要是由几种C、D、E及L群链球菌引起，现已发现其荚膜抗原血清型有35种以上。大多数致病性血清型在19血清型。血清型2为最常见和毒力最强的血清型。人主要通过接触病死猪感染。 三、微生物学检验 链球菌的基本特性 1. 形态结构 链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关。 肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽胞、无动力，但能形成荚膜和黏液层。2.抗原结构 抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋白抗原，前者位于细胞壁以此可将链球菌分类为A、B、C

19、、D、F、G等20群，后者主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等。3.变异性 肺炎淋球菌的pbp 1a、pbp 2x和pbp 2b的单个突变或多个同时突变，导致对青霉素或头孢菌素的耐药。4.培养特性 兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要CO2促进其生长 营养要求高，须在培养基中加入血液、血清。最适生长温度3537，pH7.47.6 血平板上形成灰白色，透明或半透明，表面光滑的小菌落；不同菌种的菌落可分别形成、三种溶血现象；4.培养特性 B群链球菌菌落较大，溶血环较A、C、G群模糊，某些B群链球菌无溶血环。 牛型链球菌则为无溶血环呈灰色菌落 液体培养基中表现为絮状和颗粒沉淀 肺炎链球菌因荚膜多

20、糖使菌落呈黏液状，因产生自溶酶，在平板上培养48小时后出现中心凹陷的“脐窝状”菌落。5.抵抗力 本菌属大多数细菌对干燥和消毒剂敏感，除肺炎链球菌外，本菌属细菌较少引起细菌耐药性，但近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链球菌的出现并在全球播散，引起高度关注。（二）链球菌的临床检验程序 标本采集 咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运送到实验室，立即进行检查和接种。对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素（10g/ml）和萘啶酸（15g/ml）选择性培养肉汤中孵育1824h，再作分离培养。2.标本直接检查 显微镜检查 标本涂片、革兰染色、显微镜

21、检查见链状排列革兰阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断。 抗原检测 咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B群链球菌可用抗原检测 荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌。 3.分离培养与鉴定 分离培养采用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进一步鉴定。 初代分离需用5%CO2环境，3537孵育24h，观察菌落性状 菌落周围呈现透明溶血环的为溶血性链球菌，菌落直径大于0.5mm或小于0.5mm。 草绿色溶血环的为溶血性链球菌 有些菌落灰白色不出现溶血环。（2）初步鉴定 取分离平板上生长的菌落周围呈现溶血或不溶血的单个菌落作涂片，革兰染色镜检 革兰阳性球菌，链状或短链状排列 触酶试验阴性，6.5%NaC

22、l不生长者 可确定为链球菌属细菌 （3）溶血性链球菌鉴定 Lancefield群特异性抗原鉴定 根据Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，与相应的分群血清进行凝集试验。 与B群抗血清凝集的菌株可直接确认为无乳链菌 与F群抗血清凝集并且菌落直径0.5mm可确定为米勒链球菌 与A、C、G群抗血清凝集的菌株不能确定种类，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。 Lancefield抗原群菌落大小（mm）菌种名PYRVPCAMPBGURA0.5化脓性链球菌 A0.5米勒链球菌 B 无乳链球菌 C0.5马链球菌C0.5米勒链球菌F0.5米勒链球菌 G0.5似马链球菌G0.5米勒链球菌未分群0.5

23、米勒链球菌 杆菌肽敏感试验 A群链球菌对0.04U杆菌肽几乎全部敏感。 从临床分离的菌株中有5%15%非A群链球菌如B、C和G群链球菌等也敏感。 而其他群链球菌绝大多数对其耐药。 可作为A群链球菌的筛选试验。有别于其他PYR阳性的溶血性细菌（猪链球菌、海豚链球菌）和A群小菌落溶血性链球菌（米勒链球菌）。 CAMP试验 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验非溶血链球菌鉴定菌 种optochin敏感试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌S+草绿色链球菌R牛链球菌R+草绿色链球菌鉴定 菌 群VP脲酶精氨酸七叶苷

24、甘露醇山梨醇温和链球菌群变异链球菌群唾液链球菌群/米勒链球菌群/ 第三节 肠球菌属 一、概述 肠球菌属（Enterococus） 广泛分布在自然界，常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道 为医院感染的重要病原菌二、临床意义 肠球菌广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。近年来，研究者在肠球菌内发现了一个约包含150个基因的致病DNA片段，称为“致病岛”。包括多种致病因子，可增强肠球菌离开人类肠道后的侵袭力，引起肠道外感染。二、临床意义 致病因素 表面黏附素、炎症调节因子 、毒性分泌物。 所致疾病 泌尿系感染。 心内膜炎 腹膜炎 牙髓疾病 腹腔和盆腔创伤时肠球菌感染较常见。 肠球菌引起的菌血症常发生于

25、有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者。 临床标本中分离最常见的是粪肠球菌，约占80%90%，屎肠球菌约占5%10%，很少分离到肠球菌属的其他种。 三、微生物学检验 肠球菌的基本特性 形态结构 为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，呈球杆状；液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 抗原成分 含链球菌D群抗原。培养特性 兼性厌氧，最适生长温度35，多数菌株在10和45均能生长。 营养要求不高。 部分粪肠球菌菌株在含有兔血、马血或人血的平板上出现溶血，而在羊血平板上不出现。其他菌种出现溶血或不溶血。 所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生

26、长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。抵抗力 肠球菌属细菌 对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药。 近年来主要表现为对氨基糖苷类耐药和对万古霉素耐药。 对万古霉素的耐药是由van A、van B和van C等基因介导。（二）肠球菌的临床检验程序 标本采集 常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子。 标本直接检查 显微镜检查 涂片染色显微镜检查可见单个、成双或短链排列卵圆形革兰阳性球菌。 核酸检测 16s rRNA基因、efaA、ace是常用的检测肠球菌的靶基因。 万古霉素耐药基因van的检测可直接指示对万古霉素的耐药性。 分离培养与鉴定 标本接种于含血琼脂平板，若送检标本中含革兰阴性杆菌

27、，可选用选择鉴别培养基，常用的有： 叠氮胆汁七叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而肠球菌分解七叶苷产生黑色菌落； 哥伦比亚多粘菌素-萘啶酸琼脂（CAN） 苯乙基乙醇琼脂（PEA） 接种标本平板置于3537，孵育24h后形成灰白、不透明、表面光滑、直径0.51mm大小的圆形菌落，血平板上为溶血或不溶血，粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现溶血。初步鉴定 肠球菌属细菌革兰染色阳性，卵圆形，单个、成双或短链排列。 触酶阴性、胆汁七叶苷和PYR阳性、6.5% NaCl肉汤中能生长。 但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株可表现为触酶弱阳性。与其他触酶阴性、兼性厌

28、氧革兰阳性球菌鉴别 菌属万古霉素分解葡萄糖产气PYR胆汁七叶苷6.5%NaCl生长温度1045肠球菌属敏感乳球菌属敏感VV链球菌属敏感aV明串珠菌属耐药VbVV肠球菌属间的菌种鉴定 有赖于糖代谢试验。根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分成五群。 第一群 分解甘露醇、山梨糖产酸，不水解精氨酸； 第二群 分解甘露醇和水解精氨酸； 第三群 水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖， 第四群为 不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸， 第五群为 分解甘露醇，不分解山梨糖，不水解精氨酸， 第四节 其他需氧革兰阳性球菌 一、触酶阳性的革兰阳性球菌 微球菌属（Micrococcus）、巨球菌属(Macrococ

29、cus)、动球菌属(Planococcus)、考氏考克氏菌(Kocuria kristinae)以及触酶微弱阳性的差异球菌属(Alloiococcus)和粘性罗氏菌(Rothia mucilaginosa) 二、触酶阴性的革兰阳性球菌 乳球菌属（Lactococcus）、气球菌属（Aerococcus）、片球菌属（Pediococcus）、孪生球菌属（Gemella）、白联球菌属（Leuconostoc）和生活力缺损菌属（Abiotrophia）第五节 奈瑟菌属 奈瑟菌属包括 淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae） 脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis） 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄

30、奈瑟菌、粘液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌等 仅淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌对人致病 二、临床意义 脑膜炎奈瑟菌 致病因素 荚膜 菌毛 内毒素 所致疾病 流行性脑脊髓膜炎 可导致机体免疫缺陷患者的非脑脊髓膜炎、急性或慢性菌血症 引起老年人肺炎、结膜炎等 可以在鼻咽部形成带菌状态 二、临床意义 淋病奈瑟菌 致病因素 菌毛 脂多糖 IgA1蛋白酶 外膜蛋白P 所致疾病 单纯性淋病 盆腔炎 口咽部和肛门直肠淋病； 淋菌性结膜炎 播散性淋病微生物学检验 奈瑟菌属的基本特性 形态结构 革兰阴性双球菌，菌体直径0.61.5m，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对 抗原成分 脑膜炎奈

31、瑟菌 荚膜多糖抗原 具有群特异性。分为至少13个血清群,与人类疾病关系密切的主要是A、B、C、Y及W-135群。A群及C群是引起流行性脑脊髓膜炎的主要血清群。 外膜蛋白 淋病奈瑟菌 菌毛蛋白抗原、外膜蛋白抗原、脂寡糖抗原培养特性 大多数奈瑟菌属细菌需要在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。需氧生长，初次分离需要5%7%CO2和高湿度刺激生长。最适生长温度3537，低于30不生长。 血琼脂平板或巧克力（色）琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径12mm的不溶血、圆形、灰蓝色菌落； 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状的菌落。在液体培养基中呈轻度或中度混浊

32、生长，无菌膜。 脑膜炎奈瑟菌于孵育24小时后在培养基上发生自溶。抵抗力 奈瑟菌属细菌对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。对青霉素敏感，但近年来由质粒介导的内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。 生化特性菌 种在巧克力平板上的菌落形态MTMMLNYC生长试验氧化分解产酸硝酸盐还原多糖合成DNA酶巧克力平板或血平板（22）营养琼脂（35）葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖果糖脑膜炎奈瑟菌灰褐色、半透明 、 光 滑 1 2mm+-V+-淋病奈瑟菌灰褐色，半透明，光滑0.51mm+-+-卡他莫拉菌浅红棕色，不透明，干燥13mmV+-+-+奈瑟菌属的临床检验程序 1.标本采集 脑膜炎奈瑟菌 无菌方法抽取

33、脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本，采集后立即送往实验室，或用血平板进行床边接种后置35孵育。血液标本接种在血液培养瓶中置35孵育。标本运送时需要35保温。 淋病奈瑟菌 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留1015秒时间，蘸取阴道和宫颈分泌物； 采集尿道分泌物时应弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本； 尿液可作为检查标本； 直肠肛拭标本应废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物； 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。标本直接检查 显微镜检查 脑脊液 直接或经离心后取沉淀涂片 皮肤瘀点渗出液涂片 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双

34、球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。标本直接检查 显微镜检查 疑为淋病的标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查。 男性尿道分泌物和新生儿眼结膜分泌物标本中见到中性多形核细胞内、外较多的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似淋病奈瑟菌”。 由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，当女性宫颈或直肠拭子标本涂片中见到胞内、胞外大量革兰阴性双球菌时，必须由培养结果加以证实。抗原检测 胶乳凝集试验 包括脑膜炎奈瑟菌A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体核酸检测 脑膜炎奈瑟菌 检测靶片段的基因有16S rRNA 基因、转录调控基因crgA、荚膜转移基因ctrA

35、和插入序列IS1106等 淋病奈瑟菌 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA 探针、rRNA 基因探针和porA 基因。分离培养与鉴定 分离培养 脑脊液 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin（MTM）、GC-Lect、New York City（NCY）等培养基。 血液标本 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力（色）琼脂或羊血琼脂平板上。置5%7%CO2 35孵育培养，每隔24小时观察平板。 疑为淋病奈瑟菌感染的标本接种于 选择培养基如MTM、Martin-Lewis（ML）或NYC。立即置于5%CO2气体条件下3537孵育。每隔24小时观察平板。鉴定 初步鉴定 直径12mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，涂片革兰染色见阴性双球菌，氧化酶和触酶试验阳性可初步确定为奈瑟菌属。 最终鉴定 葡萄糖和麦芽糖