狂犬病疫苗（课堂PPT）

1、2 人用狂犬病疫苗（人用狂犬病疫苗（Vero 细胞）细胞） RabiesmVaccine (Vero Cell) for Human Use 冻干人用狂犬病疫苗（冻干人用狂犬病疫苗（Vero 细胞）细胞）Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞） Rabies Vaccine (Hamster Kidney Cell) for Human Use3一、基本要求一、基本要求 生产和检定用设备、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。4二、制造二、制造2.1 生产用

2、细胞：生产用细胞：Vero Vero 细胞细胞 2.1.1 细胞的管理及检定细胞的管理及检定 应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各细胞种子批代次应不超过批准的限定代次。 取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 2.1.2 细胞制备细胞制备 取工作细胞库中的1支或几支细胞管，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37培养成均匀单层细胞。 52.2 毒种毒种2.2.1 名称及由来名称及由来 生产用毒种为狂犬病病毒固定毒CTN-1V株、a

3、GV株或其他经Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。2.2.2 种子批的建立种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。62.2.3 种子批毒种的检定种子批毒种的检定 （1）鉴别试验：用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性，中和指数应不低于500. （2）病毒滴定：每个稀释度脑内接种体重为11-13g小鼠至少6只，病毒滴度应不低于7.5lgLD50/ml. （3）无菌检查：依法检查，应符合规定。 （4）支原体检查：依法检查，应符合规定。 （5）病毒外源因子检查：依法检查，应符合规定。 （6）免疫原性检查：用主种子批毒种制备原疫苗，腹腔免疫体重为

4、12-14g小鼠，每只0.5ml，7天后重复接种1次。于第1次免疫后的第14天，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击，每只0.03ml，每个稀释度10只小鼠。同时，取同样体重的未免疫小鼠，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击作对照，每个稀释度10只小鼠，每只0.03ml。保护指数应不低于100.2.2.4 毒种保存毒种保存 毒种应置-60以下保存不得超过2年。72.3 原液原液2.3.1细胞制备：同细胞制备：同2.1.2项项2.3.2培养液培养液 培养液为含适量灭能小牛血清的MEM、199或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求。2.3.3对照细胞病毒外源因子检查：对照细胞病毒外源因子检查：

5、 依法检查，应符合规定。2.3.4病毒接种和培养病毒接种和培养 按0.01-0.1MOI或终浓度为4.5-5.5lgLD50/ml接种狂犬病病毒毒种，置适宜温度下培养一定时间后，用PBS冲洗去除小牛血清，加入适量维持液，置33-35继续培养。2.3.5病毒收获病毒收获 经培养适当时间，收获病毒液，各次收获的病毒液为单次病毒收获液，根据病毒收获液，根据细胞生长情况，可多次收获病毒液。 82.3.6单次病毒收获液检定：单次病毒收获液检定：按3.1项进行。2.3.7病毒灭活病毒灭活 病毒收获液按1:4000比例加入-丙内酯，置适宜温度下一定时间内灭活病毒。2.3.8 合并、浓缩、纯化合并、浓缩、纯化

6、 （1）合并及超滤浓缩 同批细胞生产的多次病毒收获液可在严格无菌操作的条件下合并为一批，经超滤或其他适宜方法适当浓缩。 （2）纯化 经浓缩并检定合格的病毒液以柱色谱或其他适宜的方法纯化，纯化后可加入适量人血白蛋白作为稳定剂及一定量硫柳汞作为防腐剂，即为原液。2.3.9原液检定：原液检定：按3.2项进行。92.4半成品半成品2.4.1配制配制 根据蛋白质含量和抗原含量进行配制，总蛋白含量应不高于120g/剂。可加入终浓度不高于0.70g/ml的氢氧化铝佐剂吸附，即为半成品。2.4.2半成品半成品检定：检定：按3.3项进行。102.5成品成品2.5.1分批分批 应符合“生物制品分批规程”规定。2.

7、5.2分装分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。2.5.3规格规格 每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2.5IU。2.5.4包装包装 应符合“生物制品包装规程”规定。11三、检定三、检定3.1单次病毒收获液检定单次病毒收获液检定3.1.1病毒滴定：病毒滴定：按2.2.3（2）项进行，病毒滴度应不低于6.0lgLD50/ml。 人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）病毒滴度应不低于5.5lgLD50/ml。3.1.2无菌检查无菌检查 依法检查，应符合规定。3.1.3支原体检查支原体检查 依法检查，应符合规定。123.2原液检定原液检定3.2.1抗原含量抗原含量 采用适

8、宜的方法检测抗原含量。3.2.2病毒灭活验证试验病毒灭活验证试验 取病毒灭活后的本品，脑内接种体重为11-13g小鼠20只，每只0.03ml，观察14天，应全部健存（3天内死亡的不计）3.2.3蛋白质含量蛋白质含量 取纯化后未加入人血白蛋白的本品，依法测定，应不高于120g/ml。3.2.4牛血清白蛋白残留量牛血清白蛋白残留量 采用酶联免疫法，牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂。3.2.5Vero细胞细胞DNA残留量残留量 应不高于100g/剂。3.2.6无菌检查无菌检查 依法检查，应符合规定。3.3半成品检定半成品检定 无菌检查：依法检查，应符合规定。133.4成品检定成品检定3.4.1

9、鉴别试验鉴别试验 按3.4.4项进行，应符合规定。效价测定不合格时，鉴别试验不成立。3.4.2外观外观 应为乳白色浑浊液体，久置形成可摇散的沉淀，无异物。 人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）无佐剂应为无色澄明液体。3.4.3化化学检定学检定 （1）PH值：应为7.2-8.0。 （2）硫柳汞含量：应不高于0.10mg/ml。 （3）含佐剂疫苗应进行此项检测，氢氧化铝含量应不高于0.70mg/ml。 （冻干人用狂犬病疫苗：水分应不高于3.0%）3.4.4效价测定：效价测定：应不低于2.5IU/剂。3.4.5热稳定性试验热稳定性试验 疫苗出厂前应进行热稳定性试验。于37放置14天后；按3.4.4项进行效价

10、测定。如合格，视为效价测定合格。3.4.6无菌检查无菌检查 依法检查，应符合规定。3.4.7异常毒性检查异常毒性检查 依法检查，应符合规定。3.4.8细菌内毒素检查：细菌内毒素检查： 应不高于100EU/剂。14四、保存、运输及有效期四、保存、运输及有效期 于2-8避光保存和运输。自效价测定合格之日起，有效期为1年。15五、使用说明五、使用说明【药品名称药品名称】 通用名称：人用狂犬病疫苗（Vero疫苗） 英文名称：Rabis Vaccine (Vero Cell) for Human Use 汉语拼音：Renyong Kuangquanbing Yimiao(Vero Xibao)【成分和形

11、状成分和形状】 本品系用狂犬病病毒固定毒株接种Vero（或地鼠肾）细胞，培养后，收获病毒液，经灭活病毒、浓缩、纯化，加入适宜的稳定剂，可加入氢氧化铝佐剂制成。为乳白色浑浊液体，含硫柳汞防腐剂。（冻干人用狂犬病疫苗为白色疏松体，复溶后为澄明液体） 人用狂犬病疫苗（地鼠肾疫苗）含佐剂疫苗为为乳白色浑浊液体，不含佐剂疫苗为无色澄清液体。【接种对象接种对象】 凡被狂犬或其他疯动物咬伤、抓伤时，不分年龄、性别均应立即处理局部伤口（用清水或肥皂水反复冲洗后再用碘酊或酒精消毒数次），并及时按暴露后免疫程序注射本疫苗；凡有接触狂犬病病毒危险的人员（如兽医、动物饲养员、林业从业人员、屠宰场工人、狂犬病实验人员等

12、），按暴露前免疫程序免疫接种。【作用与用途作用与用途】 接种本疫苗后，可刺激机体产生抗狂犬病病毒免疫力。用于预防狂犬病。【规格规格】 每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2,5IU。 16【用法用量用法用量】 （1）使用前将疫苗振摇成均匀悬液。 （2）于上臂三角肌肌内注射，幼儿可在大腿前外侧区肌内注射。 （3）暴露后免疫程序：一般咬伤者于0天（第1天，当天）、3天（第4天，以下类推）、7天、14天、28天各注射本疫苗1剂，共5针，儿童用量相同。对有下列情形之一的建议首剂狂犬病疫苗剂量加倍给予。 注射疫苗前1个月内注射过免疫球蛋白或抗血清者。 先天性或获得性免疫缺陷

13、病人。 接受免疫抑制剂（包括抗疟疾药物）治疗的病人。 老年人及患慢性病者。 于暴露后48小时或更长时间后才注射狂犬病疫苗的人员。 17暴露后免疫程序按下述及程度分级处理： 级暴露 触摸动物，被动物舔及无破损皮肤，一般不需处理，不必注射狂犬病疫苗。 级暴露 未出血的皮肤咬伤、抓伤，破损的皮肤被舔及，应按暴露后免疫程序接种狂犬病疫苗。 级暴露 一处或多处皮肤出血性咬伤或被抓伤出血，可疑或确诊的疯动物唾液污染粘膜，应按暴露后程序立即接种狂犬病疫苗和抗血清或免疫球蛋白。抗狂犬病血清按40IU/kg给予，或狂犬病人免疫球蛋白按20IU/kg给予，将尽可能多的抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白做咬伤局部浸润注射，剩余部分肌内注射。 （4）暴露前免疫程序：按0天、7天、28天接种，共接种3针。 （5）对曾经接种过狂犬病疫苗的一般患者再需接种疫苗的建议： 1年内进行全程免疫，被可疑疯动物咬伤者，应于0天和3天各接种1剂疫苗。 1年前进行过全程免疫，被可疑疯动物咬伤者，则应全程接种疫苗。 3年内进行过全程免疫，并且进行过加强免疫，被可疑疯动物咬伤者，于0天和3天各接种1剂疫苗。 进行过全程免疫，并且进行过加强免疫但不超过3年，被可疑疯动物咬伤者，则应全程接种疫苗。18 【不良反应】 注射后有轻微局部及全身反应，可自行缓解，偶有皮疹。若有速发型过敏反应、神经性水肿、荨麻疹等较严重副反应者，可做对症治疗