２型糖尿病心血瘀证病证结合模型大鼠心血管指标病理改变的观察

1、型糖尿病心血瘀证病证结合模型大鼠心血管指标病理改变的观察    何军锋谢梦洲田浩梅陈楚桃莫楠摘要：目的：观察2型糖尿痛心血瘀证病证结合大鼠模型的心血管指标的病理改变。方法：采用高脂高热量饲料喂养并结合小剂量链脲佐茵素(STZ)腹腔注射的方法制备实验性2型糖尿病大鼠模型，在此模型基础上再予强的松龙和肾上腺素注射制备2型糖尿痛心血瘀证大鼠模型。结果：与其它各组比较，2型糖尿痛心血疼证模型大鼠的心脏湿重与体重的比值显著性增高(P0.01)、心电图ST段下移幅度显著性增大(P0.0l或P0.05)、主动脉与心肌形态学均有不同程度的病理改变。结论：2型糖尿痛心血瘀

2、证大鼠模型具有心血管病理的改变。关键词：2型糖尿病；心血瘀证；大鼠；心血管病理中图分类号：R285.5文献标识码：A 文章编号：16737717(2007)07136503糖尿病心脏病是糖尿病的主要并发症之一，主要涉及心脏的大、中、小及微血管，包括非特异性冠状动脉粥样硬化性心脏病、特异性糖尿病心肌病、糖尿病植物神经性心脏病等病变，是糖尿病人的主要死亡原因。糖尿病心脏病多见于中医2型糖尿病心血瘀阻证。在控制血糖的基础上。中药复方多靶点干预使得中医药治疗糖尿病具有比较优势。研制2型糖尿病心血瘀证动物模型可为临床药物评价提供实验依据，且有利于发挥中医药治疗糖尿病心血管并发症的优势作用，因而笔者进行了

3、以下工作。1材料与方法11动物处理清洁级雄性Wistar大鼠46只(由湖南中医药大学实验动物中心提供)，随机分为空白对照组、糖尿病组、心血淤证组、糖尿病心血瘀证组(以下简称模型组)等4组，每组12只。空白对照组喂以普通饲料，其余3组喂以高脂饲料4周(10脂肪、1胆固醇、10蛋黄粉、0.2甲基硫氧嘧啶、78.8普通饲料，由湖南中医药大学动物实验中心提供)。4周后糖尿病组和模型组大鼠按35mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(STZ)。7天后模型组每只大鼠肌注0.1强的松龙0.1mL，连续13天，第14天每只大鼠皮下注射0.1肾上腺素1mL，再喂养15天。心血瘀证组、糖尿病组在模型组肌注强的松龙和皮下注射

4、肾上腺的同时均予等剂量的生理盐水注射。糖尿病组和模型组大鼠坶在实施腹腔注射STZ后恢复普通饮食，而心血瘀证组于高脂饲料直至实验结束。整个实验持续60天，全部大鼠同时处死。12心电图检测大鼠麻醉后，使用Pdab生物医学信号采集处理系统(北京微信斯达科技发展有限责任公司产品)记录大鼠心电图，将针形电极刺于大鼠四肢的皮下，红色电极与右上肢相连，黄色电极与左上肢相连。黑色电极与右下肢相连。设置参数为(20Hz，4000)，以心电图的标准导联的ST段的下移程度作为衡量心肌的缺血程度的指标。每只大鼠取5个心动周期进行分析，观察ST段的变化值，以其平均数为标准，ST段的偏移，以TP线作为基线。13 切片制备

5、实验结束后，10的乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠，先行心电图检测后开胸，剥离总动脉，取出心脏，心脏称重后10的中性福尔马林固定，制备石蜡切片用于组织病理光镜观察。主动脉于10的中性福尔马林固定，制备石蜡切片用于组织病理光镜观察。2 结果21血糖和红细胞压积模型组血糖与糖尿病组、心血瘀证组、空白对照组比较均有升高(P0.01)；糖尿病组的血糖与空白对照组、心血瘀证组比较也有升高(P0.01)；而心血瘀证组与空白对照组差异无显著性意义(P0.05)；该结果提示模型组、糖尿病组的2型糖尿病模型是成功的。红细胞压积比较，3组与正常对照组有显著性或极显著性差异(P0.01或P0.05)；模型组亦高于心血瘀证组(

6、P0.05)；提示模型组血液瘀积最为严重(见表1)。22 心肌光镜观察的结果光镜下，模型组心肌细胞有炎症细胞浸润、细胞坏死和肌纤维断裂；而糖尿病组可见细胞轻度水肿，细胞坏死和肌纤维断裂现象不明显；心血瘀证组心肌排列较紊乱，心肌细胞水肿；空白对照组心肌则无任何异常。23 主动脉光镜观察结果光镜下，模型组的主动脉有斑块；糖尿病组冠状动脉前降支血管周围有炎症；心血瘀证组内壁下层增厚，出现前期斑块；空白对照组主动脉光滑、无炎症且无斑块。24 心脏湿重与体重比值心电图ST下移值结果与其他3组比较，模型组心脏湿重与体重的比值最大(P0.01)，提示该组大鼠心脏已有扩大。心电图结ST下移结果显示，与其他3组

7、比较，模型组下降最大(P0.01或P0.05)，提示模型组大鼠存在缺血现象，符合糖尿病基础上并发心血管疾病心电图改变的特征(见表2)。3 讨论心脏的病变是糖尿病最危险的并发症之一，流行病学显示糖尿病伴发冠心病较同年龄、同性别的非糖尿病人群高4倍左右，死亡率增高56倍，2型糖尿病患者死于冠心病已超过50。对于糖尿病心病，中医以心血瘀证糖尿病常见。糖尿病为本虚标实的慢性疾病，常以燥热为标。阴虚为本。糖尿病患者久病之后，病乃入络，血脉瘀阻，或因病损及阳，气阳虚弱不能推动血脉，导致痰湿等瘀阻心脉，心脉失常，最终表现为心血瘀证，故消渴患者常伴有心前区憋闷、疼痛，舌质紫黯或有瘀阻等临床特征。中医药在糖尿病

8、并发症的防治中具有比较优势。然而，病证结合模型的缺乏限制了中医药的应用。因而，开展糖尿病心血瘀证模型的研制对于防治糖尿病心脏病以及筛选有效方剂均具有重要意义。STZ常和高脂饮食用来诱导糖尿病模型，此法较成熟、可靠。本研究采用此法发现模型组大鼠血糖高于正常组，因而笔者用小量STZ和持续4周高脂高热量饲料喂养诱导出的糖尿病模型是可靠的。较长时间的高脂饮食可诱发心血管的病理改变。文献表明，以高脂饮食(配方：在80普通饲料中加入14蛋黄粉、1胆固醇、5猪油)喂养新西兰大耳兔，42天后随机抽取2只处死，取胸主动脉标本制作病理切片，可发现主动脉斑块出现。以高脂饮食(5猪油、2胆固醇、0.5胆酸钠、92.5

9、基础饲料、2mL/只蛋黄)喂养大鼠，6周后测血脂等指标均升高，内膜可出现斑块。本研究中笔者观察到心血瘀证组动物在喂以高脂饮食60天后，可见血脂增高、主动脉内壁下层增厚伴前期斑块。脂浊作为一种高凝状态，红细胞压积偏高和心血管形态学改变可认为心血瘀证模型成功。既然较长时间的高脂饮食可诱发心血管病变且在此基础上STZ也可诱发糖尿病模型，为何不采用持续6周的高脂饮食和STZ诱导出糖尿病心血瘀证模型?笔者预实验表明，采用这种方法确实可诱导出糖尿病心血瘀证模型，但由于动物死亡率太高(高达70的死亡率)，故认为此法在大规模药物筛选时作为病证模型不符合实验要求。通过分析，笔者认为此法高死亡率的主要原因是长时间

10、高脂饮食和STL会加重糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱，这种快速进展型的紊乱可使细胞获能减少、缺氧等，从而出现心肌广泛性灶性坏死等损害。为提高糖尿病心血瘀证模型的成功率，笔者拟在STZ诱导糖尿病模型的基础上改进心血瘀证的造模方法。通过文献复习，对于血瘀证模型的制备有暴怒寒凝模型(皮下注射大剂量肾上腺素注射液模拟“暴怒”，以冰水浸泡模拟“寒邪”侵袭)，外伤受损模型(重锤造成击伤模型)，气虚血瘀模型(饥饿合灌服心得安，同时静注10高分子右旋糖酐)等。比较了各种模型的优劣，笔者拟在STZ糖尿病模型基础上加用糖皮质激素、肾上腺素法。肾上腺注射是血瘀证的常用方法，它常引起红细胞聚集而造成邪侵络脉的机体状态，而糖

11、皮质激素在“保护”机体的同时，可升高血糖、且对肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的促进作用。因而，在糖尿病模型的基础上两者合用能更好地模拟心血瘀证。总之，实验表明在SIZ基础上加激素和肾上腺素诱导的糖尿病心血瘀阻证模型。除具有高血糖、主动脉和心肌形态病理改变、心电图异常、心脏湿重与体重的比值改变外，其造模率也高(成模率为77)。因而，该模型可作为糖尿病心血管并发症动物实验研究模型，有利于该病证的病理病机的研究以及治疗，有利于发挥中医药治疗糖尿病心血管并发症的优势作用。    相关论文    · 别让“小胖墩”成为“小糖人”/儿童糖尿病有何征兆/父母要为孩子健康保驾护