静注人免疫球蛋白中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测结果影响的分析.docx

1、论著静注人免疫球蛋白中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测结果影响的分析张继鹏，刘晓，李青，张璘，何彦林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心，甘甫兰州730046摘要：目的分析静注人免疫球蛋白(WIG)中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测的影响。方法检测20批IVIG的白喉抗体效价水平和Fc段生物学活性结果,进一步探讨白喉抗体效价与Fc段生物学活性的关系。结果20批IVIG中白喉抗体效价水平均符合中国药典的要求，在360HAU/g之间，其中有两批IV1G的白喉抗体效价水平相对较高，其他18批IVIG的白喉抗体效价水平变化趋势不明显。20批IVIG的Fc段生物学活性均较高，

2、在60%-140%之间。白喉抗体效价水平高者.其Fc段生物学活性并非高，反之亦然。结论IVIG的Fc段生物学活性与其白喉抗体效价水平无明显的相关性。关键词：静注人免疫球蛋白(PH4.0)；Fc段生物学活性；白喉抗体效价中图分类号：R392.33TQ464.56文献标志码：ADOI：10.13309/ki.pmi.2014.04.013AnalysisoneffectfromtitreofdiphtheriaantibodycontaininginIVIGindetectingforbiologicalpropertiesofFcfragmentofIVIGZHANGJi-peng,LIUXia

3、o,LIQing,ZHANGLin,HEYan-linLanzhouInstituteofBiologicalProductCo.Ltd.CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch,Ijanzhou730046,GansuProuince,ChinaCorrespondingauthorLIUXiao：,E-maill:boylx006Abstract:ObjectiveToanalyzetheeffectfromtitreofdiphtheriaantibodycontaininginIVIG(Humanimmuglobulin(pH

4、4.0)forintravenousinjection)indetectingforbiologicalpropertiesofFcfragmentofIVIG.MethodsThetitreofdiphtheriaantibodyandthebiologicalpropertiesofFcfragmentfrom20batchesofIVIGwereanalyzed,andinvestigationwascarriedoutontherelationshipbetweentitreofdiphtheriaantibodyandbiologicalpropertiesofFcfragment.

5、ResultsDiphtheriaantibodytitrefrom20batchesofIVIGisinarange3to60HAU/g,basedonrelatedrequirements,diphtheriaantibodytitrein2batchesofIVIGisgreaterthanthatofotherbatches.BiologicalpropertiesofFcfragmentisinahigherrangebetween60%and140%.ConclusionBiologicalpropertiesofFcfragmentisnotcorrelatedwithtitre

6、ofdiphtheriaantibodycontainimginIVIG.Keywords:Humanimmunoglobulin(pH4.0)forintravenousinjection(IVIG);Fcfragmentbiologicproperties；Titreofdiphtheriaantibody静注人免疫球蛋白Humanimmunoglobulins(pH4.O)forintravenousinjection,IVIG是一种安全性较好的血液制品，主要用于抗体置换和免疫调节，可以治疗原发性免疫球蛋白缺陷症、细菌感染、病毒感染、血液系统疾病、川崎病等，临床效果令人满意。IVIG的临

7、床疗效与其生物学功能密不可分,IgG分子的各个结构域在机体的免疫反应中均发挥作者简介：张继鹏，医学生物学工程师，主要从事血液制品生产工作。通讯作者:刘晓,E-maill:boybd006着重要作用。因此.IVIG的质量控制应注意对IgG分子完整性的检测。IgG的结构域主要包括Fab和Fc段。IVIGFc段能活化补体系统,从而有效地杀伤病原体是IVIG非常重要的生物学功能，在临床治疗中占据重要的地位。因此VIGFc能否有效地激活补体可作为衡量IV1G制品质量的重要质控指标。国外已建立了较为成熟的IVIG生物学功能检测方法。中华人民共和国药典三部(2010版)也已介绍了Fc生物学功能检测方法。药典

8、推荐IVIG的Fc段生物学活性检测依据激活补体经典途径的原理，使用白喉类毒素抗原致敏红细胞与IVIG结合，此时IVIC中白喉抗体与白喉类毒素结合后形成的抗原抗体复合物，随后加入适量补体即可发生补体反应，从而il算IVIG激活补体的指数。由于该方法中推荐使用的抗原为白喉类帝素，为观察IVIG中白喉抗体效价能否对其FC段生物学活性检测结果产生影响，实验进一步分析rIVIC中白喉抗体水平、IVIG的"段生物学活性及白喉抗体水平对Fc段生物学活性的影响。1材料和方法1.1材料实验用20批IVIG及15批不同白喉抗体效价的IVIG,均由兰州生物制品研究所有限责任公司血液制剂室提供1.2主要试剂

9、与仪器磷酸狙二钠、磷酸二氢钠、叙化钠、敏化钙、氛化镁'狙氧化钠、单宁酸（糅酸）和敏化铭均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；巴比安钠购自Signia公司；牛血清白蛋白购自上海伯奥生物科技有限公司；白喉类毒素由兰州生物制品研究所有限责任公司菌苗一室提供;人。型血为定西兰生单采血浆有限公司岷其站提供;豚鼠补体由兰州生物制品研究所有限赍任公司血液制剂室自行采集制备,效价为150CHso/mLjU-2001型紫外分光光度计为HITACHI公司生产;ModelJ-6M型离心机购flBeckman公司、HZS.H型恒温水浴振荡器购自哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。1.3白喉抗体效价及Fc段生

10、物学活性检测方法按照中华人民共和国药典三部（2010版）人免疫球蛋白中白喉抗体效价和"段生物学活性检测方法进行检测1.4探讨白喉抗体效价对Fc段生物学活性检测的影响分析20批IVIC的白喉抗体效价和Fc段活性结果，观察两者相关性。另外，将15批不同白喉抗体效价的IV【G,按照白喉抗体效价高低分为60.9、30.5、15.1、7.4和3.6HAU/g5组不同效价水平，分别检测其Fc段生物学活性，进一步分析白喉抗体效价与Fc段生物学活性之间的关系。2结果2.120批【V1G的白喉抗体效价水平20批IVIG白喉抗体效价趋势分布结果显示,20批IVIG中白喉抗体效价水平均符合中华人民共和国药

11、典三部（201（）版）要求，在360HAU/g之间;其中2批1VIG的白喉抗体效价水平相对较高，其他18批IVIG的白喉抗体效价水平变化的势不明显（图1）。图120批IVIG中白喉抗体效价水*的趋势图Fig.1'Hietrendsfromdiphtheriauntilxxlylilrrin20IxatchesIVIG星装*邪警-Z2.220批IVIG的Fc段生物学活性结果20批IVIG的Fc段生物学活性趋势分布结果显示，IVIG的Fc段生物学活性均较高，在60%-140%之间（图2）。2.3白喉抗体效价对F（段生物学活性检测结果影响的分析5组不同水平白喉抗体效价IVIG的Fc段生物学活

12、性检测结果显示，白喉抗体效价水平高者，其的段生物学活性并非高，不呈正比关系（表I和图3）。这说明Fc段生物学活性与IVIG中白喉抗体效价水平无明显的相关性。0',I*1234567891011121314151617181920批次8910II批次1213141516图220批IV1G的"段生物学活性情况的趋势图Fig.2ThetrendsfrombiologicalpropertiesofFcfragmentof20batchesofIVI(»表15组不同水平白喉抗体效价IV1G的R段生物学活性检测结果Tab.1Thebiol<>gi<*alpr

13、oprrliesofFcfragmentinfivegroupsofdiphlhrriaanlilMnlywithdifferentlevels白喉抗体效价(HAU/g)R段生物学活性()1160.9682231.877330.292429.4843514.892614.562715.292815.193915.6831015.11144II7.465127.4795133.6100143.8112153.598(3H喉抗体效价(HAU/g).史段生物学活性()图320批IVIG白喉抗体效价与Ec段生物学活性分析Fig.3ThebiologicalpropertiesofFcfragmenta

14、ndthetilreofdiphtheriaantibodyin20batchesof1GIV3讨论中华人民共和国药典三部(2010版)和欧洲药典推荐的人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定方法一致，均是依据激活补体经典途径的原理来检测,此实验法干扰少,操作相对简单，结果准确，但是却受到很多因素的影响,例如抗原种类及效价、补体反应条件、供试品中抗体效价等。在检测1VIG的Fc段生物学活性中采用的抗原为白喉类毒素，由于其特异抗原的抗体滴度不同、亲合力不同，将导致Fc介导不同的生物反应。因此，实验中首先对20批IVIG的白喉抗体效价水平进行了分析，结果显示20批IVIG中白喉抗体效价水平均符合中国药典要

15、求(360HAU/g之间)，其中有2批IVIG的白喉抗体效价水平相对较高，其他18批IVIG的白喉抗体效价水平变化趋势不明显。IVIG中白喉抗体效价水平主要与供浆者血浆中白喉抗体效价的水平有关。周海云等分析了不同来源血浆对静注人免疫球蛋白中抗白喉抗体效价的影响，认为不同地区来源的血浆白喉抗体效价有差异但不明显，均符合国家规定的标准。对实验中20批IVIG的Fc段生物学活性进行分析表明JVIG的Fc段生物学活性较高，均在60%-140%之间，说明其生产工艺较为稳定。为进一步探讨IVIG中白喉抗体效价对Fc段生物学活性的影响，将15批不同白喉抗体效价水平的IVIG分为5蛆,分别对5组IVIG进行F

16、c段生物学活性检测，结果显示，白喉抗体效价水平高者，其Fc段生物学活性并非高，不呈正比关系，反之亦然。说明Fc段生物学活性与IVTG中白喉抗体效价水平无明显的相关性。这主要是由于血液制品生产过程中,需将来源于不同采集地区的原料血浆进行混合，不同批的混合血浆中白喉抗体效价水平差异并不明显。对于实验结果中白喉抗体效价高的IVIG,其Fc段生物学活性反而低，可能与IVIG的生产工艺和储存时间有关,该影响因素还有待进一步的探讨。参考文献1JoliesS,SewellWA,MisbahSA.ClinicalusesofintravenousimmunoglobulinJ.ClinExpImmunol,2

17、005,142(1)：1-11.2_RadosevichM,BumoufT.IntravenousimmunoglobulinG：trendsinproductionmethods,qualitycontrolandqualityassuranceJ.VoxSang,2010,98(l)：12-28.3 国家药典委员会.中华人民共和国药典(三部)SJ.北京：中国医药科技出版社,2010.4 周海云，张安山,何彦林，等.不同来源血浆对静注人免疫球蛋白中抗-HBs、白喉抗体效价的影响J.微生物学免疫学进展,2008,36(1):40-42.收稿日期：2014-03-18修回日期：2014-05-0

18、8编辑:王祖森公念公公公公公公公公分公0公公公公分公公公会会会公分公公公公公公公公分公公公分公公公公公公公分分公公公.文摘*从516名中国病人分离的乙肝病毒的完整基因组分析作者研究了具有不同临床征象的病人其乙肝病毒突变的特征及临床意义。在这项研究中总共登记了516名病人，包括130名病人患急性乙型肝炎，239名病人患慢性乙型肝炎以及146名病人患慢急性肝功能衰竭。通过对病毒的全基因组进行序列分析而分析HBV的基因型和突变。基因型B2、C1、C2和D1分别占22.2%J.6%.74.6%和1.6%。在那些患急性乙型肝炎的患者中，其基因型B的出现频率要比患慢性乙肝和慢急性肝功衰竭的病人中的高。测定了缺失突变，主要发生在前S1区和前S2区，对于急性乙肝病人、慢性乙肝病人以及慢急性肝功衰竭病人而言，其缺失率分别为3.8%、19.7%和24.7%0在基础核心启动子区域发生的T53C(preSlF53L)、G1613A(polR841K)、G1775A和A1762T+G1764A的点突变的发生率，以及在前核区域的G1896A和G1899A点突变的发生率，及核