培养基促生长实验操作

1、制订培养基灵敏度实验操作，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全 进行。2 范围适用于所有配制好并灭菌的培养基。3 编写依据EP6.54 术语无5 职责QC 卫检组人员负责培养基的配制、灭菌、灵敏度实验。6 内容6.1 使用的设备、器具 生物安全柜、无菌培养皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯等6.2 使用的菌株EP检测用ATCC勺菌株：金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC 6538 大肠埃希菌 Escherichia coliATCC 8739铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosaATCC 9027枯草芽

2、孢杆菌 Bacilllus subtilisATCC 6633沙门氏菌 Salmonella enterica subspATCC 14028白色念珠菌 Candida albicansATCC 10231黑曲霉 Aspergillus nigerATCC 16404培养基灵敏度检测所用勺菌株传代次数不得超过 5 代, 并采用适宜勺菌种保藏技术，以保证试验用 菌株勺生物学特性。6.3 检测频率每批配制、灭菌后勺培养基均应做灵敏度测试。6.4 操作方法6.4.1 对照标准培养基用已经过实验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基6.4.2 实验培养基将琼脂类的实验培养

3、基加热融化后，冷却至45 C左右，以无菌的方式在无菌培养皿中注入1520ml ，备用。液体类的培养基直接使用。6.4.3 菌悬液的制备6.4.3.1 细菌菌悬液的制备方法一：取细菌的斜面培养物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤培养基中3035C培养1824h，取上述培养物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-710-8的菌悬液备用。6.4.3.2 霉菌菌悬液的制备取白色念珠菌的斜面培养物1耳匙接种在沙氏琼脂斜面上于2025C培养2448h，加入无菌水4ml 制成原液，取上述原液按 10 倍系列稀释，分别制成10-610-7 的菌悬液备用。取黑曲霉的斜面培养物加入无菌水 4ml 制成孢子悬液，取上

4、述孢子悬液按 10 倍系列稀释，分别制 成 10-6 10-7 的菌悬液备用。方法二：直接用杭州微球生物技术有限公司的产品-培养基灵敏度指示剂，该产品已经帮我们精确控制了细菌数量，只要直接拿稀释液稀释下就可以直接取到10 100CFU 试验菌。使用方便，数量精确。推荐用此方法操作。6.4.4 培养基的生长促进实验6.4.4.1 琼脂类培养基的生长促进实验每株菌用 2 个实验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种0.1 0.5ml 的菌悬液（约 10100CFU 试验菌），同时用 2 个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度 下培养 ,取出平皿点计菌落数。实验培养基上

5、的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的 70%-150% 范围内。（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录1 ）6.4.4.2 液体类培养基的生长促进实验每株菌用 2 管（或瓶）实验培养基，接种 0.1 0.5ml 的菌悬液（约 10 100CFU 试验菌），同时用2 个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在 规定温度下培养 ,对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。6.4.5 培养基的生长促进和抑制特性试验6.4.5.1 液体培养基的生长促进特性试验接种0.10.5ml的菌悬液（约10100CFU试验菌）于一定量适合的培养基。在特定

6、温度下培养， 培养时间不超过试验中规定的最短期限。与对照标准的培养基获得的微生物生长相比，接种微生物的 生长应明显。645.2 固体培养基的生长促进特性试验采用表面涂布法，在每一块平皿上接种0.10.5ml的菌悬液（约10100CFU试验菌）适宜微生物在特定温度下培养，培养时间不长于试验中规定的最短期限。接种微生物的生长与对照标准的培养基 获得的微生物生长相当。645.3 液体或固体培养基的抑制特性试验用适当培养基接种至少100 CFU适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间至少为试验中规定的最长期限。无受试微生物生长。（注：每种培养基生长促进和抑制特性试验的具体菌株见附录1）7附录附录1培养基

7、生长促进和抑制特性表附录1:培养基的生长促进、抑制特性表培养基特性受试菌株培养时间培养温度生长促进金黄色葡萄球菌3天30-35 C铜绿假单胞菌3天30-35 C酪蛋白大豆消化琼 脂枯草芽抱杆菌3天30-35 C白色念珠菌5天30-35 C黑曲霉5天30-35 C酪蛋白大豆消化肉汤生长促进金黄色葡萄球菌3天30-35 C铜绿假单胞菌3天30-35 C枯草芽抱杆菌3天30-35 C沙氏葡萄糖琼脂生长促进白色念珠菌5天20-25 C黑曲霉5天20-25 CR2A生长促进金黄色葡萄球菌3天30-35 C铜绿假单胞菌3天30-35 C枯草芽抱杆菌3天30-35 C大肠埃希菌3天30-35 C麦康凯肉汤生长促进大肠埃希菌3天42-44 C抑制1金黄色葡萄球菌3天42-44 C麦康凯琼脂生长促进大肠埃希菌3天30-35 C氯化镁孔雀绿沙门生长促进J沙门氏菌J3天30-35 C1氏菌增