食品中常检病原微生物的检验技术课件

1、 1. 掌握志贺菌的生物学特性。 2.掌握沙门菌的致病性。 3.掌握沙门菌的检验程序。345检样25g样品+225mLBPW1mL+SC10mL1mL+TTB10mLBSXLD(HE、显色培养基)挑取可疑菌落非沙门氏菌生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统+H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+H2S+靛基质+尿素-KCN-赖氨酸+H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+/-反应结果与左侧描述不符甘露醇+、山梨醇+ONPG-沙门氏菌，血清学试验报告TSI，赖氨酸，靛基质，尿素（pH7.2），KCN421,18h24h361,40h48h361,18h24h361,18h24h361,8h18h

2、 1. 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 2.掌握金黄色葡萄球菌的致病性。 3.掌握金黄色葡萄球菌的检验程序。14血平板18h24hBairdparker平板18h24h或者45h48h25g（ml)样品+225mL 75%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质Bairdparker平板，血平板涂片染色BHI肉汤和营养琼脂小斜面血浆凝固酶试验36118h24h361观察溶血报 告第三节志贺菌检验第三节志贺菌检验 学习目的与要求 1. 掌握志贺菌的主要生物学特性、 检验程序和检验方法。 2. 了解志贺菌的致病性。 3. 了解其他肠道杆菌。一、生物学特性一、生物学特性（一）培养特性： 需氧或

3、兼性厌氧菌，最适温度37，pH6.47.8，在普通琼脂培养基和SS平板上，形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、中等大小的菌落，半透明的光滑型菌落。宋氏致贺菌菌落较大，较不透明，粗燥而扁平，在SS平板上可迟缓发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 （三）、致病性致病性 致病物质：致病物质： 1. 1. 侵袭力：菌毛可粘附回肠和结肠粘膜上皮侵袭力：菌毛可粘附回肠和结肠粘膜上皮 细胞，细胞，并侵入细胞内生长繁殖，在粘膜固有层形成感染灶引起炎并侵入细胞内生长繁殖，在粘膜固有层形成感染灶引起炎症反应。症反应。 2. 2. 内毒素：内毒素： 作用于肠粘膜使其通透性增高，促作

4、用于肠粘膜使其通透性增高，促进内毒素吸收，形成内毒素血症（高热、意识障碍、中毒进内毒素吸收，形成内毒素血症（高热、意识障碍、中毒性休克）；性休克）；直接破坏肠粘膜。形成炎症溃疡、出血，呈直接破坏肠粘膜。形成炎症溃疡、出血，呈典型的脓血粘液便；典型的脓血粘液便；还可以作用于肠壁植物神经，使其还可以作用于肠壁植物神经，使其肠蠕动失调和痉挛（直肠括约肌最明显）出现腹痛、里急肠蠕动失调和痉挛（直肠括约肌最明显）出现腹痛、里急后重的症状。后重的症状。 3. 外毒素外毒素：此与霍乱弧菌、ETEC产生的毒素相同。 其作用有三：肠毒素性：引起早期的水样腹泻；细胞毒性，对Vero细胞、Hela细胞、血管内皮细胞

5、、肾小管内皮细胞、人肝细胞均有毒性；神经毒性或致死毒性：注入家兔可使其麻痹、死亡。 二、检验程序检样25g+GN 225mLHE琼脂或SS麦康凯或EMB挑取可疑菌落TSI，葡萄糖半固体TSI底层产酸，斜面产碱，H2S-，不产气，无动力血清学分型生化分群试验志贺氏菌属分群及分型结果进一步的生化试验葡萄糖铵试验、西蒙氏柠檬酸盐、赖氨酸、尿素、氰化钾（KCN）、水杨苷和七叶苷葡萄糖铵+或任何其他阳性结果非志贺菌非如左述的各种结果非志贺菌报告361,6h8h361,18h24h1、志贺菌属分几个群，各群有多少个血清型？2、志贺菌属在三糖铁尿素半固体琼脂斜面上的生化反应是什么？3、志贺菌四种多价血清指哪

6、几种？ 思考题思考题 注意事项注意事项1、三糖铁尿素半固体为三糖铁琼脂与尿素半固体两者合并的复合培养物，可以同时测定葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵、产酸、产气情况，并观察H2S的生成，尿素分解和动力；斜面上的菌苔可做玻片凝集试验。2、由于分解葡萄糖后产酸使PH降低，中层及斜面变黄。同时又因为细菌利用蛋白胨后产生的代谢物，在斜面微氧环境下产碱使斜面变红，而中层保持厌氧状态，不易氧化及挥发。仍为黄色。 3、尿素加热过高，过久可使尿素酶分解变红；如加热不足又可造成灭菌不彻底。因此关键问题是准确控制灭菌温度及其加热时间。 1. 掌握致泻大肠埃希氏菌的主要生物学特性。 2.掌握致泻大肠埃希氏菌的致病性。 3.

7、掌握致泻大肠埃希氏菌的检验程序。二、检验程序检样测大肠菌群MPN25g+营养肉汤225mL污染严重的检样均液麦康凯EMB肠道菌增菌肉汤乳糖发酵的阳性管乳糖发酵或不发酵的菌落3个5个，氧化酶-，革兰氏阴性杆菌TSI，靛基质，pH7.2，尿素，KCN-，赖氨酸，动力肠道侵袭性大肠埃希氏菌非如左述的各种结果TSI地层+，H2S，KCN-，尿素-血清学试验肠毒素+产肠毒素大肠埃希氏菌ETEC+EPEC+或EHEC+(0157)赖氨酸-，靛基质+动力-（0124动力+/-）非如左述的各种结果ETEC+肠道致病性大肠埃希氏菌或肠道出血性大肠埃希氏菌肠道侵袭性大肠埃希氏菌肠道侵袭性大肠埃希氏菌报告36118

8、h24h3616h1、志贺菌属分几个群，各群有多少个血清型？2、大肠埃希菌在SS、KI等培养基上的生长情况如何？3、简述大肠埃希菌的检验程序？ 思考题思考题 注意事项注意事项 克氏铁琼脂与三糖铁琼脂的主要区别在于后者加蔗糖可以排除一些发酵蔗糖的非致病性肠道杆菌科细菌，两者主要用于初步鉴别肠杆菌科的细菌。 1. 掌握肉毒梭状芽孢杆菌生物学特性。 2.掌握肉毒梭状芽孢杆菌及肉毒毒素的致病性。 3.掌握肉毒梭状芽孢杆菌及肉毒毒素检验的检验程序。一、生物学特性一、生物学特性（一）培养特性（一）培养特性最严格的厌氧菌最严格的厌氧菌 生长最适温度：生长最适温度：28 37 ：pH为为6.87.6，产毒的最

9、适，产毒的最适pH为为7.8 8.2。产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型型温度高些为宜，温度高些为宜，35 培养培养3d即可，而即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。型菌低温度长时间培养效果较好。对营养要求不高对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。：在普通培养基上都能生长。 肉毒梭状芽孢杆菌菌落肉毒梭状芽孢杆菌菌落 在固体培养基表面上，形成类圆形，在固体培养基表面上，形成类圆形，边缘不整齐，约边缘不整齐，约3毫米左右的菌落。菌落毫米左右的菌落。菌落半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒半透明，表面一般比较光滑也有

10、的呈颗粒状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状，状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状，常常扩散成菌苔。常常扩散成菌苔。u肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。的差异。（二）生化特性（二）生化特性1、生化特性很不规律；2、一般能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖产酸产气；3、对麦角、凝固血清、凝固蛋白有水解作用，并引起液化；4、不形成靛基质。能产生硫化氢。（三（三 ）致病性致病性 1、致病物质：肉毒毒素是已知最剧烈的神经外毒素（对人致死量为、致病物质：肉毒毒素是已知最剧烈的神经外毒素（对人致死量为0.1ug）。）。肉毒毒素经胃肠道吸收入血

11、后，作用于中枢神经系统的脑神经核和外周神经肌肉肉毒毒素经胃肠道吸收入血后，作用于中枢神经系统的脑神经核和外周神经肌肉神经接头处以及自主神经末梢，阻碍乙酰胆碱的释放，引起运动神经末梢功能失调，神经接头处以及自主神经末梢，阻碍乙酰胆碱的释放，引起运动神经末梢功能失调，导致肌肉麻痹。导致肌肉麻痹。 2、所致疾病：、所致疾病： （1）食物中毒：由于肉毒梭菌芽胞污染食品，未经彻底消毒，在厌氧条件下繁殖）食物中毒：由于肉毒梭菌芽胞污染食品，未经彻底消毒，在厌氧条件下繁殖产生毒素，食前又未加热烹调而发生食物中毒。临床表现胃肠道症状较少，在整个产生毒素，食前又未加热烹调而发生食物中毒。临床表现胃肠道症状较少，

12、在整个病程中病人神智清楚并不发热病程中病人神智清楚并不发热,。出现复视、斜视、眼睑下垂等眼肌麻痹症状；再。出现复视、斜视、眼睑下垂等眼肌麻痹症状；再是吞咽、咀嚼困难、口齿不清等咽部肌肉麻痹症状，进而膈肌麻痹、呼吸困难、直是吞咽、咀嚼困难、口齿不清等咽部肌肉麻痹症状，进而膈肌麻痹、呼吸困难、直至呼吸停止而导致死亡。至呼吸停止而导致死亡。 （2）创伤感染中毒）创伤感染中毒 （3）婴儿肉毒：）婴儿肉毒： 因食入被肉毒梭菌芽胞污染的食品（如蜂蜜）后发生中毒，早因食入被肉毒梭菌芽胞污染的食品（如蜂蜜）后发生中毒，早期症状为便闭，吸吮啼哭无力、眼睑下垂等。病死亡率不高。期症状为便闭，吸吮啼哭无力、眼睑下垂

13、等。病死亡率不高。二、检验程序检样毒素检测增菌产毒培养30，5d观察生长性状染色镜检毒素检测报告（二）分离培养观察菌落性状染色镜检毒素检测培养检查报告（三）报告（一）增菌产毒培养30，5d 1、肉毒梭状芽孢杆菌的培养特性是什么? 2、肉毒梭状芽孢杆菌的生化特性是什么? 思考题思考题 注意事项注意事项 为检出蜂蜜中存在的肉毒梭菌，蜂蜜检样需预温37（流质蜂蜜），或5253（晶质蜂蜜）充分搅并后立即称取20g溶于100mL灭菌燕馏水（37或5253），搅拌稀释，以8000r/min10000r/min，离心30min（20），沉淀，加灭菌蒸馏水1mL，充分摇匀等分各半，接种应肉培养基8ml10mL

14、各一支，分别在30及37下厌氧培养7d，按肉毒梭菌检出（增菌产毒培养试验）方法进行肉毒毒素检测。 1. 掌握副溶血性弧菌的生物学特性。 2.掌握副溶血性弧菌的致病性。 3.掌握副溶血性弧菌的检验程序。（一）（一）培养特性培养特性需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧嗜盐，嗜盐，在在2%NaCL培养基中生长最好，无盐或食培养基中生长最好，无盐或食盐盐10%不能生长。不能生长。最适温度最适温度36，pH7.57.8在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。光滑，较湿润，边缘不整齐。在血平板上可见溶血环。在血平板上可见溶血环。 一、生

15、物学特性一、生物学特性（二）、生化特性（二）、生化特性（三）、致病性（三）、致病性1、致病因素、致病因素脲酶脲酶产生溶血毒素：产生溶血毒素：耐热性溶血毒素耐热性溶血毒素(THD)和耐热性溶血毒素和耐热性溶血毒素相关的溶血毒素相关的溶血毒素(TRH)，此外有的可产生不耐热溶血毒素，此外有的可产生不耐热溶血毒素(TLH)。 2、所致疾病、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。 361 818h样品25g(25mL)+225 mL3氯化钠碱性蛋白陈水硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂或科玛嘉弧菌显色培养基划线分离361 1824h挑取可以菌落，接种于3氯化钠胰蛋

16、白胨大豆琼脂3氯化钠碱性蛋白陈水3管3个合适的稀释度如果进行定性检测，则不需要进行此步骤361 1824h 筛选试验氧化酶试验，革兰染色3氯化钠三糖铁琼脂，嗜盐性试验挑取可以菌落，接种于3氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生化试验或选用API20E生化鉴定试剂盒VITEK 结果报告 血清学试验，神奈川试验二、检验程序 1、简答副溶血性弧菌的生物学特性？ 2、简答副溶血性弧菌的自然生存环境和易受污染的食品类型？ 3、简答根据副溶血性弧菌的抵抗力特点，如何防止吃海产品副溶血性弧菌中毒发生？ 4、简答副溶血性弧菌的致病性？ 5、解释副溶血性弧菌的检验程序？ 思考题思考题 注意事项注意事项 1、此试验要求是用人或

17、兔的新鲜红血球制备高盐血平板，经37、24h培养，如在单个菌落周围呈现透明溶血环或在菌落下面有明显溶血者，为“神奈川现象”阳性，若不出现透明溶血环或无明显溶血者，为“神奈川现象”阴性。 2、有致病性的副溶血性弧菌，多数为神奈川现象阳性，但亦有少数为阴性。 1. 掌握溶血性链球菌的生物学特性。 2.掌握溶血链球菌的致病性。 3.掌握溶血链球菌的检验程序。（一）（一）培养特性培养特性需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸

18、等生长因子。、烟酸等生长因子。最适生长温度为最适生长温度为37，在，在20-42能生长，最适能生长，最适pH为为7.4-7.6。在血清肉。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株的细小菌落，不同菌株溶血不一。溶血不一。一、生物学特性一、生物学特性（二）、生化特性（二）、生化特性（三）、致病性（三）、致病性 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细