药物分析维生素类药物的分析

1、精选课件第九章维生素类药物的分析第九章维生素类药物的分析The Analysis of Vitamines概概 述述 维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。活性物质。 如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。乏症，而影响人体的正常生理机能。 例如例如: VA 缺乏缺乏夜盲症夜盲症 VB1缺乏缺乏脚气病脚气病脂溶性：脂溶性： VA、VD、VE、VK等等B族（族（VB1、VB2等）、等）、VC 、烟酸、烟酸、 叶酸、泛酸等叶酸、泛酸等按溶解性分类按溶解性分类精选课件9.19.

2、1 维生素维生素A的分析的分析一、结构与性质一、结构与性质VA含有共轭多烯醇侧链的环已稀含有共轭多烯醇侧链的环已稀(有多种异构体有多种异构体)CH2OR654321987654321R=H VA醇醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯醋酸酯R= COC15H31 VA棕榈酸酯棕榈酸酯VA为油状物为油状物,存在于鱼肝脏中存在于鱼肝脏中,称鱼肝油称鱼肝油,不溶于水不溶于水. 有人工合成的有人工合成的. 精选课件国际单位国际单位IU=0.344微克维生素醋酸酯；微克维生素醋酸酯；IU0.300微克维生素醇微克维生素醇换算：换算：1g维生素醋酸酯相当于：维生素醋酸酯相当于：61 1029070000.

3、344/gIUg IU1g维生素醇相当于：维生素醇相当于：61 1033300000.300/gIUg IU精选课件CH2OHCH2OR654321987654321CH2VA1:VA2:(去氢去氢VA)VA3:(去水去水VA)精选课件二、鉴别试验二、鉴别试验1、三氯化锑反应、三氯化锑反应 VA在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变成紫红色。（液中显蓝色，渐变成紫红色。（P245）注意注意:在水中三氯化锑水解在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行必须在绝对无水中进行!2、紫外吸收光谱、紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在的无水乙醇溶液在326nm有

4、最大吸收。有最大吸收。VA(5个共轭双键个共轭双键)在盐酸中加热在盐酸中加热,生成生成6个共轭双键的个共轭双键的去水去水VA VA在在326nm有一个吸收峰有一个吸收峰 去水去水VA在在350-390nm有三个吸收峰（有三个吸收峰（P247）精选课件3、TLC： 确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：例：VA和其标准品用环己烷溶解和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（80：20） 板：硅胶板：硅胶G 显色：磷钼酸为显色剂显色：磷钼酸为显色剂 Rf： VA 醇醇 0. VA 醋酸酯醋酸酯 0.4 VA棕榈酸酯棕榈酸酯 0.7精选课件三含量测

5、定三含量测定维生素中含有稀释用油和其它杂质，所测得的维生素中含有稀释用油和其它杂质，所测得的吸光度不是维生素独有的吸收对测定有影响。吸光度不是维生素独有的吸收对测定有影响。即在三个波长处测得吸光度，进行校正后再计算。即在三个波长处测得吸光度，进行校正后再计算。称为三点校正法称为三点校正法原理：吸光度是维生素原理：吸光度是维生素A和杂质吸收之和，测得和杂质吸收之和，测得A值需校正。（最大吸收为值需校正。（最大吸收为328nm)紫外分光光度法三点校正法紫外分光光度法三点校正法精选课件测定测定波长波长吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差计算计算值值规定规定值值300 0.555

6、316 0.907 (326) 328 1.000 (329) 340 0.811 360 0.299 精选课件方法方法:(1)分别测分别测300、316、328、340、360nm吸光度，吸光度，求出各波长吸光度与求出各波长吸光度与328nm吸光度比值，吸光度比值，各比值与各比值与P249表中数据对比；表中数据对比；(2)若比值不超过若比值不超过0.02可直接用测得可直接用测得A值；值；(3)若比值超出若比值超出0.02则则A需校正：需校正： A（校正）（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(4)计算：计算：1%1100cmAECLA:吸光度吸光度;C:浓度浓度(g/mL);L

7、:溶液厚度溶液厚度(cm);精选课件求效价：每求效价：每g供试吕中所含维生素供试吕中所含维生素A的国际单位的国际单位1%1/1900cmIU gE求百分含量：求百分含量：1900%100%100A D WWL标示量标示量A：吸光度（校正后的吸光度）：吸光度（校正后的吸光度）D：稀释倍数；：稀释倍数；1900：以环已烷为溶剂时的换算因子；：以环已烷为溶剂时的换算因子；L：比色池厚度；：比色池厚度；W：取样量；：取样量；精选课件9.29.2维生素维生素B1的分析的分析一、化学结构与性质一、化学结构与性质维生素维生素B1:氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接成的氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接成的季铵类

8、化合物季铵类化合物. 白色结晶白色结晶,溶于水溶于水,显酸性显酸性.学名学名: 氯化氯化4-甲基甲基-3-（2-甲基甲基-4-氨基氨基-5-嘧啶基）嘧啶基）甲基甲基-5-（2-羟乙基）噻唑的盐酸盐羟乙基）噻唑的盐酸盐 俗名俗名:盐酸硫胺盐酸硫胺精选课件二二. 鉴别试验鉴别试验1. 硫色素荧光反应：硫色素荧光反应： 维生素维生素B1在碱性溶液中，与铁氰化钾氧化成硫色在碱性溶液中，与铁氰化钾氧化成硫色素，在正丁醇中显蓝色荧光素，在正丁醇中显蓝色荧光VB1专属反应，用于鉴别和含量测定。专属反应，用于鉴别和含量测定。精选课件 2、沉淀反应、沉淀反应： 碘化汞钾碘化汞钾-淡黄色沉淀淡黄色沉淀 碘碘-红色

9、沉淀红色沉淀VB1 硅钨酸硅钨酸-白色沉淀白色沉淀 苦味酸苦味酸-扇形白色结晶扇形白色结晶 精选课件三三. 含量测定含量测定1、非水溶液滴定法、非水溶液滴定法：（：（Ch.P收录）收录） VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。溶剂：冰醋酸溶剂：冰醋酸 / 醋酸汞醋酸汞 指示剂：喹哪定红指示剂：喹哪定红- 亚甲蓝混合指示液亚甲蓝混合指示液 滴定剂：高氯酸（滴定剂：高氯酸（0.1mol/L) 终点：天蓝色终点：天蓝色 摩尔比：摩尔比：VB1：高氯酸：高氯酸=1：2 V

10、B1摩尔质量摩尔质量=337.27 滴定度滴定度T=0.1(1/2) 337.27=16.86mg/ml精选课件2、紫外、紫外UV（中国药典）（中国药典）VB1片：方法与片剂含量测定相同片：方法与片剂含量测定相同(246nm)VB1注射液：与液剂相同。（注射液：与液剂相同。（246nm)1%1100%100cmA D WEW标示量1%1%100%100cmA DEV标示量标示量精选课件9.39.3 维生素维生素C的分析的分析一、化学结构一、化学结构 OCOHHCH2OHOOHOH123456*1、 具有内酯结构。具有内酯结构。 碱性下可水解。碱性下可水解。2、 具有烯二醇基。具有烯二醇基。 还

11、原性，能够被氧化成去氢还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸。抗坏血酸。3、结构与糖类相似，具有糖性质。结构与糖类相似，具有糖性质。 溶于水，酸性，旋光性。溶于水，酸性，旋光性。精选课件OO HOH OHCC H2O HHO HOO HO HCHOO HC H2O HHOO HOH OHCC H2O HHH OOO HO HCHOC H2O HH OHD(-)-异抗坏血酸L(+)-异抗坏血酸L(+)-抗坏血酸D(-)-抗坏血酸4、具有、具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是种光学异构体。其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸抗坏血酸精选课件 二、鉴别试验二、鉴别试验 1、硝酸银反应（中国药典）、硝

12、酸银反应（中国药典） 烯二醇基具有还原性，可被硝酸银氧化成去烯二醇基具有还原性，可被硝酸银氧化成去氢抗血酸，同时生成黑色的银。氢抗血酸，同时生成黑色的银。OHOH OOO（黑色）AgAgNOVC32、与、与2，6-二氯靛酚（染料）反应二氯靛酚（染料）反应 VC被还原为无色的酚亚胺被还原为无色的酚亚胺精选课件3. 糖的性质糖的性质 VC的结构很象糖结构，具有糖的性质的结构很象糖结构，具有糖的性质VC + 三氯化醋酸或盐酸三氯化醋酸或盐酸-水解水解-脱羧脱羧-戊糖戊糖-失水失水-糠醛糠醛-（加吡咯，加热）（加吡咯，加热）-蓝色蓝色4、紫外分光光度法（英国药典）、紫外分光光度法（英国药典）VC在盐酸

13、溶液中，在盐酸溶液中，243nm最大吸收。最大吸收。精选课件OCOHHCH2OHOOHOHHI2OC OHHCH2OHOOOHI2三三含量测定含量测定 1. 碘量法（碘量法（Ch.P收录）收录）VC在醋酸条件下，被碘定量氧化。在醋酸条件下，被碘定量氧化。 加入淀粉指示剂，蓝色不褪为碘过量（加入淀粉指示剂，蓝色不褪为碘过量（30S内）。内）。由消耗碘量计算含量。由消耗碘量计算含量。精选课件 操作：（操作：（P265） 样品 新沸放冷的水，稀HAc 淀粉 0.1mol/L 碘 终点颜色：无色终点颜色：无色蓝色蓝色 1ml 0.1mol/L碘液，碘液，1ml 8.806mg C6H8O6加入新沸放冷

14、的水为了减少水中溶解氧的影响。加入新沸放冷的水为了减少水中溶解氧的影响。酸性：使酸性：使VC在空气中氧化速度减慢。在空气中氧化速度减慢。VC注射液中常加有亚硫酸盐如注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂作为抗氧剂.精选课件OCOHHCH2OHOOHOHO HC lC lNO HOC OHHCH2OHOOOO HC lC lN HO H终点的颜色是溶液由无色变为红色。终点的颜色是溶液由无色变为红色。氧化型（红色）氧化型（红色）还原型（无色）还原型（无色）+2、 2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 酸性下直接用酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定剂二氯靛酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化

15、指示终点，不需要另外的指示剂。自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。精选课件3、高效液相色谱法、高效液相色谱法 HPLC P276 精选课件9.4 9.4 维生素维生素D D VD VD是一类抗佝偻病维生素的总称是一类抗佝偻病维生素的总称, ,有片剂有片剂, ,注射剂注射剂, ,胶囊等胶囊等. .一、结构（一、结构（P268P268） 开环麦角甾烯醇，又称麦角骨化酸。开环麦角甾烯醇，又称麦角骨化酸。VD2VD2，VD3VD3 无色针状结晶，旋光性，不溶于水。无色针状结晶，旋光性，不溶于水。精选课件二、鉴别试验二、鉴别试验1、显色反应、显色反应 2、维生素、维生素D2和和D3的区分的区分精

16、选课件三、含量测定三、含量测定 高效液相色谱法，药典收录。高效液相色谱法，药典收录。精选课件OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458名称：消旋名称：消旋-生育酚醋酸酯（生育酚醋酸酯（ -异构体生理活性异构体生理活性最强）最强）母核：苯骈二氢吡喃衍生物，苯环上有一乙酰化的母核：苯骈二氢吡喃衍生物，苯环上有一乙酰化的酚羟基酚羟基侧链：脂肪烷烃侧链：脂肪烷烃性质：不溶于水，油状，微黄色液体。性质：不溶于水，油状，微黄色液体。9.5 维生素维生素E（称为生育酚）（称为生育酚）一、结构：苯并二氢吡喃醇衍生物，一、结构：苯并二氢吡喃醇衍生物，精选课件二、鉴别试验二、鉴别试验1

17、、硝酸反应：（药典收录）、硝酸反应：（药典收录）VE在硝酸条件下在硝酸条件下,水解生水解生成生育酚成生育酚.生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红. VE + HNO3 -水解生成生育酚水解生成生育酚-生育红（橙红色）生育红（橙红色）2、水解后氧化反应：、水解后氧化反应： VE在碱性条件下水解，得在碱性条件下水解，得生育酚，在联吡啶生育酚，在联吡啶和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。VE+KOH 生育酚（加入三氯化铁）生育酚（加入三氯化铁）-生育醌生育醌 + 铁配合物铁配合物 （血红色）精选课件3、UV吸收：吸

18、收：VE的的0.01%无水乙醇液：无水乙醇液： max=284nmmin=254nm4、红外光谱（中国药典）、红外光谱（中国药典）三、杂质检查三、杂质检查检查游离生育酚检查游离生育酚: ChP2005: ChP2005铈量法：用铈量法：用Ce(SOCe(SO4 4) )2 2(0.01mol/L)(0.01mol/L)滴定，滴定， 指示剂：二苯胺指示剂：二苯胺终点：亮黄终点：亮黄灰紫灰紫 消耗消耗Ce(SOCe(SO4 4) )2 2液不得超过液不得超过1.0ml1.0ml。精选课件 1、铈量法（中国药典）、铈量法（中国药典）原理：原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸用硫酸加热回流，

19、水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄终点：亮黄灰紫灰紫 ，需作空白试验。，需作空白试验。四、含量测定四、含量测定2、气相色谱法：、气相色谱法：Chp20053、高效液相色谱法、高效液相色谱法 日本药局方（日本药局方（JP13）精选课件练习题：维生素练习题：维生素AD胶丸中维生素胶丸中维生素A的含量测定的含量测定已知：平均胶丸重为已知：平均胶丸重为0.0815g维生素维生素A的标示量为的标示量为10000IU/丸丸取样：取样：ml25ml2ml100g1279. 0精选课件%1cm1E首先要求样品的首先要求样品的 。精选课件计算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）计算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）655. 0)534. 0584. 0652. 02(52. 3A328（校正）%5 .0100652.0652.0655.0由此可知，应该用测得的由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。处的吸收度计算。然后计算校正吸收度与未校正吸收度相差的百分数然后计算校正吸收度与