快速学会做药敏试验

1、快速学会做药敏试验一、药敏实验在临床诊断中应用意义：1、在畜牧产业中，各种细菌性疾病很容易给养殖业造成经 济损失，使用抗生素防治细菌性疾病成为经常性工作。但在 养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗生素，造成细菌产生耐 药性问题正变得越来越突出，使抗菌药的疗效降低，疗程延 长，还使死亡率升高和治疗费用增加，给养殖业带来巨大经 济损失。 2、耐药菌株还可能将耐药性基因由动物转移给人 类，对人类健康造成潜在威胁。如何防止滥用抗生素，药敏 试验在临床诊断中的应用就显得重要了。 3、药敏实验可以 相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临 床合理用药、灵活选药。可以在本地区容易买到的药品中选 出最

2、敏感的药物，既能缩短病程，又能防止盲目用药，减少 费用。 4、因为药敏实验在动物体外进行，操作相对简单， 本钱相对较低，既经济又快速有效，可以对流行病学调查进 行监控，控制和预防耐药菌株的流行，在生产中具有非常重 要现实意义。二、药敏试验的步骤： 1、琼脂平板制备按照 营养琼脂干粉说明来进行稀释，稀释后琼脂放在微波炉里进 行加热，加热后琼脂移至超净工作台中，静置待温度降至 50°C手指能接受的最高温度左右时，开始倒平板，内径 225px 平皿每个平皿倒入约 10ml 琼脂液，倒入后迅速混匀铺满平皿底部。2、药液制备：按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置 按 1g 需加多少毫升水或配

3、多少毫克饲料，就相当于配制药 液所加蒸馏水的毫升数。如 10g 药物可配 50kg 饲料，其换 算方法为： 1g 本品加 5000ml 蒸馏水。此溶液液即为用于做 药敏试验的药液。 3、药敏纸片制备：要用质量较好的定性 滤纸，用普通的打孔器打成直径 6mm 的圆形小纸片。取圆 纸片 50 片放入清洁枯燥的小瓶或小平皿中，以单层牛皮纸 扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置于 37 C温 箱或烘箱中一天，使完全枯燥。按每张纸片饱和吸水量为 0.01ml 计，在上述含有 50 片纸片的小瓶内参加药液 0.5ml ， 不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡 30 分钟即 可。同时在记录

4、药物名称，于 37C温箱过夜。在温箱或烘箱 中的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素 宜在低温下真空枯燥。枯燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干 燥处或家用冰箱中保存，有效期 4-6 个月。 4、病料接种取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁， 剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上，涂布整个琼脂 平板外表，反复涂布几次，保证涂布均匀。5、贴药敏纸片用无菌镊子将纸片放于固体培养基外表并轻压，使纸片与培 养基外表完全接触。为了能准确观察结果，要求药敏纸片均 匀分布于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于 24mm ，可在平皿中央贴一片， 外周等距离贴 7 9

5、片。记住每种药敏纸片的名称。6、温箱培养贴完药敏纸片的平皿倒放在 37C恒温箱中培养24 小时以上。三、药敏实验结果观察 四、药敏实验选药原那么 1、在选择高敏药物时还应考虑药物 的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给 畜禽用药时，必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效，所 以在给畜禽用药时，高敏药物一定要配适宜宜的给药方法， 并予以足够剂量、足够疗程，才会取得好的治疗效果。 2、 药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及 环境等因素影响，药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率 一般为 70 80%，所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现 疗效不显著应及时换药。 3、药敏试

6、验确定的首选药物不是 一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现， 细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此，定期进行药 敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。 4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素，一种抗生素 可到达治疗作用时，不要用两种药物联合应用。必须应用两 种抗生素时，应选择联合应用具有协同作用的药物。5、避开已经使用过的药物或其同类药物，发病期间已用过的药物 或同类药物一般不用。五、药敏片的制作药敏片一般可以由 厂家提供，也可以自己制作，制作药敏片直接选用各药厂的成品药来做。 制作药敏片设备和器皿： 需要恒温箱、 平皿直 径 90mm 或更大一点的都行 、烧

7、杯、蒸馏水、滤纸、打孔 器。具体的操作步骤： 1、将滤纸用打孔器打好适量直径为 6mm 的小圆纸片。 2、将所需培养皿或玻璃小瓶、玻璃棒、 微量吸管、镊子、滤纸、滤纸片等进行高压灭菌，一般121 C, 0.15帕斯卡，1520min。3、在烘干箱或恒温箱内 3760C, 放置1224小时直至烘干。4、将要选的药用蒸馏水按药品 使用治疗量的比例配制成药液， 按 5ml 药液 3040 个小圆纸 片浸泡。 5、将浸泡好的药敏片用镊子夹出，放到另一枯燥 平皿中， 注意药敏做的多时， 放湿药敏片不要完全重叠地放。 这样会使有的药敏片在枯燥过程中所沾的药量不一，影响您 对药的评价。因为有的药不溶，药厂会

8、加一些助溶剂，枯燥 过程中有的药会析出。这时药敏片叠放位置会影响所沾的药 量的。6、将盛湿药敏片的平皿放到恒温箱中，温度37C,放置 12 24 小时，不同的药干的时间也可能不一样，所以 自己需要视情况而定。在这个过程中要注意勤翻一下药敏 片，尽量不要让它们沾在一起。 7、药敏片的储藏：将烘干 的药敏片分装，标上药名和日期，储存要注意防潮。短期可 4C冷藏保存36个月，长期要-20C冷冻保存。六、培养 基的制备：兽医临床上一般用营养琼脂培养基。将成品营养 琼脂培养基粉按说明取适量，加蒸馏水溶解，放入高压灭菌 锅，121C灭菌1520min，冷却到50C左右，倾注到已灭 过菌的培养皿中，厚度约

9、56mm，冷却凝固后使用或放入 4C冰箱中备用。七、接种细菌：在对病死畜禽解剖时，切 取一小块肝、脾等器官，使用新鲜创面在培养基上涂满，操 作时就防止感染其他杂菌。八、粘贴药敏纸片：将镊子于酒 精灯火焰上灭菌后略停，取药敏片贴到培养基外表。为了使 药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻轻按压几下药敏纸 片。每个培养皿所用药敏纸片的数量和分布可根据培养皿的 大小确定，一般采用中央贴一片，周围等距离贴 5 至 6 片。 九、培养细菌：将贴上药敏纸片的培养基置于 37C恒温培养 箱中培养1218h，观察抑菌圈大小，判定结果。在涂有细 菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈 梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑 制，形成抑菌圈。按抑菌圈直径大小判定敏感度上下，一般 抑菌圈直径在 20mm 以上为极敏， 1520mm 为高敏， 10 15mm 为中敏， 10mm 以下为低敏，无抑菌圈为不敏。十、 指导用药：做药敏试验之后，应选择高敏药物进行治疗，也 可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。因为药液必须 通过机体吸收才能到达一定效果，所以选用高敏药物同时， 还应考虑药物的吸收途径，配适宜宜的给药方法，才能到达 更好的治疗效果。十一、考前须知：为了使试验结果平安可 靠，要注意以下几个影响药敏结果的因素：同一平板上