微生物的实验室培养知识小结

1、.课题1 微生物的实验室培养一、培养基一培养基的营养成分一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有些微生物需要添加特殊营养物质如培养乳酸杆菌时需添加生长因子：维生素高考警示钟：自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同1自养微生物所需的碳源来自含碳的无机物如CO2，而异养微生物需要的碳源来自含碳的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。2含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。二培养基的配制原那么 1目的明确。要根据微生物的种类、培养目的等选择原料、配制培养基。 2营养要协调。各种营养物质要保证适当的浓度和比例。营养物质

2、比例过低，不能满足微生物生长；浓度过高那么会抑制微生物的正常生长。 3pH要适当。不同微生物生长所需pH不同。如细菌为中性或微碱性6.57.5；霉菌等真菌为酸性5.06.0。三培养基的分类及作用： 1.物理性质：根据是否添加琼脂等凝固剂1液体培养基：不加凝固剂，常用于工业消费2固体培养基：加凝固剂，常用于微生物别离、鉴定、活菌计数2.用处或功能1选择培养基：培养基中参加或去除某种化学物质，允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长。常见例子：培养基中参加青霉素，挑选酵母茵或霉菌等真菌；培养基中参加高浓度食盐，挑选金黄色葡萄球菌；无氮培养基，挑选固氮微生物；无碳培养基，挑选自养微

3、生物；以石油为唯一碳源，选择能分解石油的微生物；以尿素为唯一氮源，挑选尿素分解菌；以纤维素为唯一碳源，通过是否产生透明圈挑选纤维素分解菌。将培养基放在高温环境中培养，别离耐高温的微生物。2鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中参加某种指示剂或化学药品,以鉴别不种类的微生物。伊红一美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌假设有，茵落呈深紫色，并带有金属光泽；培养基中参加酚红指示剂，鉴定尿素分解菌；培养基中参加刚果红CR，鉴定纤维素分解菌。注意：病毒为非细胞构造的生物体，专营活细胞寄生，目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动植物组织中才能增殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。参加培养基中的凝

4、固剂如琼脂，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。二、无菌技术一关键 获得纯洁培养物的关键是防止外来杂菌入侵。二消毒、灭菌:二者主要区别中：芽孢和孢子是否存活芽孢是微生物度过不良环境的体眠体，而孢子是微生物进展无性生殖时的繁殖体即无性生殖细胞。1.消毒:使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体外表或内部一部分对人体等有害的微生物不包括孢子和芽孢常用方法应用范围巴氏消毒法：7075水中煮30min或在80水中煮15min一些不耐高温的物体如牛奶煮沸消毒法：在100水浴中煮沸56 min一般物品化学药剂消毒法：用乙醇、氯气、漂白粉、KMnO4等药剂来杀死或抑制细菌生长或繁殖可用来对环境、双手和衣物

5、等消毒紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室、接种箱、超净工作台2.灭菌:使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法应用范围灼烧灭菌法：酒精灯火焰接种工具如接种环、接种针等干热灭菌法：在160170加热12h如玻璃器皿吸管、培养皿和金属用具高压蒸汽灭菌：压力为100 kPa，温度为12l的条件下，维持1530 min培养基及容器的灭菌注意：1酒精消毒用体积分数为70%的酒精效果最好，浓度过低。杀菌力弱，浓度过高，会使菌体外表蛋白凝固成一层保护膜，乙醇分子不能进入其中2关于高压蒸汽灭菌注意以下几点：压力为100 kPa，温度为12l的条件下，维持1530 min；

6、注意同时旋紧相对的两个螺旋，使螺栓松紧一致；到灭菌时间后，当压力表的压力降为零时，才能翻开排气阀，否那么灭菌锅的液体会冲出容器，造成污染。3灭菌消毒的原理，就是通过一定理化手段，使病原茵蛋白质变性，失去生命活性。4灼烧灭菌用的是酒精灯火焰的充分燃烧层。三、微生物的纯化培养技术一常用细菌培养基牛肉膏蛋白胨培养基配制流程：计算称量溶化灭菌注意：据配方计算配制一定体积培养基时各成分的用量注意：倒平板时，烧杯口要通过酒精灯火焰灭菌。平板冷凝后要将平板倒置，既可防止皿盖上凝结的水滴滴入培养基造成污染；又可使培养基表面的水分更好的挥发。（调PH）倒平板注意：牛肉膏较粘稠，应玻棒挑取，在称量纸上称量牛肉膏蛋

7、白胨易吸潮，动作要迅速注意：溶化琼脂时要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂；加热过程中部分水分蒸发，待琼脂完全溶化后应补加蒸馏水，以保持溶液的浓度注意：由于不同微生物适宜的pH不同，因此在熔化后，必须用NaOH或HCl来调节pH注意：用高压蒸汽灭菌法培养基先调PH再灭菌一般是培养基先灭菌再倒平板二纯化大肠杆菌1原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。2微生物接种方法：平板划线法只可纯化和稀释涂布平板法既可纯化又可计数 1平板划线法：固体培养上连续划线逐步稀释单个细胞繁殖而成的菌落 如图注意：a.用接种环取菌种之前、每次划线之前和划线完毕都要

8、进展灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再操作；烧灼时期目的取菌种前杀死接种环上原有微生物每次划线前杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线的菌种直接来自于上次划线末端，使每次划线菌种数目减少，到达别离菌株的目的接种完毕后杀死接种环上残存的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者b.划线时不要划破培养基，假如采用分段划线法操作从第二次操作应总在上一次划线末端开场，首尾区不能相连；c.操作必须始终在酒精灯火焰旁进展。2稀释涂布平板法：10倍系列稀释操作一系列梯度稀释 稀释度足够高的菌液分散成单个细胞单个菌落稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌，应特别注意：a.配制系列梯度稀释液时，必须用无菌水配制；b.涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰引燃。不要将过热的涂布器放入盛有酒精的烧杯中，一面引燃其中的酒精；c. 吸管头不要接触任何其他物体；吸管要在酒精灯火焰周围使用。3菌种的保存保存时间保存方法详细方法后续处理频繁使用临时保藏法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养，长成