PPARα激动剂非诺贝特对肺癌A549细胞生长和侵袭转移的影响及其机制

1、PPAR激动剂非诺贝特对肺癌A549 细胞生长和侵袭转移的影响及其机制目的 : 观察过氧化物酶体增殖因子激活受体 (PPAR) 激动剂非诺贝特对人肺癌 A549 细胞生长、侵袭转移的影响, 探讨 PPAR、基质金属蛋白酶 (MMPs)及其组织抑制剂 (TIMPs) 在非诺贝特抗肿瘤作用中的意义。方法: 体外培养人肺癌A549细胞 , 用不同浓度 (0 、 12.5 、 25、50、75、100 mol/L) 非诺贝特干预细胞后 , 四甲基偶氮唑蓝比色 (MTT)法检测不同药物浓度作用下肺癌 A549 细胞的生长抑制情况 ; 流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的分部情况 ;Hoechest 染色

2、法观察 A549 细胞的形态学改变 ; 细胞划痕实验观察 A549 细胞迁移运动能力的影响 ;Transwell 侵袭实验检测肺癌 A549细胞侵袭能力的变化 ; 提取 A549细胞总RNA及蛋白 ,RT-PCR检测细胞中 PPAR、 MMP-2、MMP-9、 TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达情况 ,Wertern blot检测细胞中 MMP-2与 MMP-9蛋白的表达水平 ; 酶谱法检测不同药物浓度作用下细胞培养液中MMP-2、MMP-9的酶活性。结果 :1. 细胞增殖抑制率 : 与对照组相比 , 非诺贝特组 A549 细胞增殖抑制率增大 (P<0.05),且呈时间

3、- 剂量效应。 2. 细胞凋亡检测 : 与对照组比较 , 非诺贝特能够诱导肺癌A549 细胞凋亡 , 且高浓度组诱导凋亡作用更加明显。3. 细胞周期的检测 : 与对照组比较 , 非诺贝特组 G0/G1期 A549 细胞数目减少 ,G2/M 期的细胞数目增加 , 细胞阻滞于 G2/M期, 非诺贝特对 a549 细胞周期阻滞作用有时间 - 剂量关系。4.hoechst33258 染色观察发现非诺贝特作用下肺癌 a549细胞体积缩小 , 部分细胞膜被裂解 , 核固缩 , 呈致密浓染 , 高浓度 (100 mol/l)组伴有凋亡小体出现。5. 细胞划痕实验显示 : 作用 48 小时后 , 阴性对照组细

4、胞划痕基本愈合, 随着非诺贝特浓度的增加 , 划痕宽度越大 , 各组细胞迁移率分别为 : 对照组 :(88.21 ±0.09)%,12.5 mol/l组 :(71.70 ± 0.47)%,25 mol/l组 :(48.23 ± 0.69)%,50 mol/l组:(30.45 ±0.53)%,75 mol/l组:(20.90 ±0.31)%,100 mol/l组 :(16.20 ± 0.29)%,(p<0.05) 。6.transwell 侵袭实验结果显示 : 阴性对照组有大量细胞穿过基底膜 , 药物组有不同数量的细胞穿越

5、基底膜 , 各非诺贝特药物组 (100 、75、50、25、12.5) 的侵袭抑制率分别为 :(65.78 ±0.58)%、(48.50 ± 0.23)%、(40.35± 0.19)%、(30.97±0.45)%、(23.10± 0.62)%,(p<0.05)。7.rt-pcr结果显示: 与对照组相比, 非诺贝特处理48 小时后 , 随着药物浓度的增加a549 细胞中ppar 、timp-1、timp-2mrna的表达增加, 而mmp-2与mmp-9mrna的表达下降。 8.werternblot实验显示 : 用非诺贝特干预a549 细胞48小时后细胞中mmp-2与mmp-9蛋白的表达水平均下降。9. 酶谱法检测进一步证实 : 非诺贝特干预肺癌 a549 细胞 , 能够抑制 mmp-2与mmp-9酶活性 , 且随着非诺贝特药物浓度的增加, 其抑制作用增强。结论:1. 非诺贝特能够抑制肺癌a549 细胞的生长、增殖 , 并诱导其凋亡。2. 非诺贝特能够抑制肺癌 a549 细胞的迁移、侵袭能力。 3. 非诺贝特抑制肺癌 A549细胞生长及侵袭转