植物叶绿素含量测定

1、植物叶绿素含量测定 无水乙醇提取法摘要：本文是主要是用无水乙醇提取法提取叶绿素以及用比色法测定叶绿素的含量实验的综述。关键词：叶绿素的提取、含量测定、无水乙醇、比色法前言：高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素 光合 色素吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素 组成。叶绿体色素的提取、 别离和测定是研究它们的特性以及在光合 中作用的第一步。 叶片叶绿素含量与光合作用密切相关， 是反眏叶片 生理状态的重要指标。 在植物光合生理、 发育生理和抗性生理研究中 经常需要测定叶绿素含量。 叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育 作物品种的重要指标。正文：一、原理 叶绿素不溶于水

2、，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、 乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液 中对特定波长的光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素 溶液的吸光度 也称为光密度 ，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数 即可计算叶绿素含量。利用分光光计测定叶绿素含量的依据是 Lambert-Beer 定律，即 当一束单色光通过溶液时， 溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的 乘积成正比。其数学表达式为：A=K*b*c式中：A为吸光度；K为 吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度；叶绿素a、b的丙酮溶 液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663、645nm处。叶绿素a 和b在66

3、3nm处的吸光系数当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g?L-1 时的吸光度分别为82.04和9.27 ;在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律，叶绿素溶液在 663nm和645nm处的吸光度A663和 A645与溶液中叶绿素a、b和总浓度a+bCa Cb、Ca十b,单位为g?L-1，的关系可分别用以下方程式 表示：A663=82.04Ca+9.27Cb 1A645=16.76Ca+45.60Cb 2解方程 1和 2得：Ca=12.7 A6632.59 A645 (3)Cb=22.9 A6454.67 A663 (4)Ca十 b = 20.3 A64

4、5 8.04 A663 (5)二、实验的材料、仪器、药品1 材料：植物绿色叶片。2仪器：分光光度计、比色皿、天平、研钵、滤纸、漏斗、滴管、 剪刀、 50ml 容量瓶。三、实验步骤1叶绿素的提取：用洗衣粉先将叶片外表的油迹和灰尘清洗干净, 晾干后,用电子天平准确称取紫背草叶子,剪碎后放入研钵中。向研钵中参加23ml 95临醇，再少许CaCO和石英砂，研磨成匀浆， 再参加10ml无水乙醇，继续研磨至组织变白，在暗处静止35mi n。取1张滤纸于漏斗中，用无水乙醇湿润，将研磨液沿玻璃板导入漏斗 中过滤，用无水乙醇冲洗研钵、研棒以及滤渣数次，滤液移至50mL容量瓶，最后用无水乙醇定容至 50mL即为提

5、取液。2. 吸光度的测定：取洁净比色皿，注意不要用手接触比色皿的光面， 先用少量色素提取液清洗23次，注意清洗时要使清洗液接触比色皿 内壁的所有局部，然后将色素提取液倒入比色皿中，液面高度约为比 色皿高度的4/5 ,将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉注意不能擦， 再用擦镜纸擦干擦净。将比色皿放入仪器的比色皿架上， 注意不要将 溶液撒入仪器内。第一个位置放盛有无水乙醇的比色皿， 做为空白对 照。将仪器波长分别调至 663、645nm处，以无水乙醇做为空白对照 调透光率100%分别测定溶液在上述三个波长下的吸光度。每个样 品重复测定3次。注意，每次在转换波长时，都要用无水乙醇调透光 率 100%四、

6、结果计算1. 结果计算：将663、645nm处测得的吸光度代入上述原理中的公式3、4、 5中计算叶绿素a、b浓度和总浓度。并将实验结 果记录如下：A645 吸光值A663 吸光值叶绿素a叶绿素b叶绿素总含量九里香稀释前稀释5倍后紫背叶五、结果分析与实验总结1.叶绿素提取液所使用的样品总质量不同， 所称取的九里香的样品质 量为1g导致测得其吸光度大于1,用该组数据计算会导致实验最终 结果误差较大，故现将该种九里香的叶绿素提取液先稀释五倍， 再测定，得到了正常的吸光度数值。2. 叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂如乙醇、丙酮或二甲基亚砜等研磨提取或者浸泡提群法提取叶绿素。本实验使用的分析纯是乙醇，相对于丙酮乙醇混合液来说，其效果相对较低。3