植物组织过氧化氢含量的测定_第1页
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文档简介

1、配制 100ml 、 100umol/L 的过氧化氢溶液需要多少 30%的过氧化氢原液?请写出计算过程。 答:首先计算其摩尔浓度:假设 30%为其质量百分数双氧水 30%浓度的试剂上海国药集团出品 ,室温时实 测密度为: 1,122 g/L ,所以, 1L 30%含量的双氧水中过氧化 氢含量为:1122g/L XLX30%=337g又H2O2的分子量为,那么1L 30%含量的双氧水中过氧化氢 浓度为: 337/34.0146=9.908 mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x VV=10-6L=1 ul假设 30%为体积分数100% H2

2、O2 密度是 1,440 g/L, 30 ml H 2O2 的质量为 1440 g/L X0 ml X0-3=43.2g,30%含量的双氧水中过氧化氢浓度 为: = mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x Vx 10-7 ul植物组织中过氧化氢含量测定植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害, 从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以去除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆

3、性密切相 关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测 定过氧化氢酶活性。【原理】H2O2与硫酸钛或氯化钛生成过氧化物一钛复合物黄色沉淀,可被H2 SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。【仪器和用具】研钵;移液管X 2支,5ml X 1支;容量瓶10ml X 7个,离心管5ml X 8支;离 心机;分光光度计。【试剂】100 mol/L H 2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57卩I,溶于100ml,再稀释100 倍;2mol/L硫酸;5%W/V丨硫酸钛;丙酮;浓氨水。【方法】1制作标准曲线:取10ml离心

4、管7支,顺序编号,并按表参加试剂。测定H2O2浓度标准曲线配置表试剂ml离心管号1234567100 g mol/L H 2O204'C下预冷丙酮05%硫酸钛浓氨水3000r/min 离心 10min,弃去上清夜,留沉淀2mol硫酸待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量屡次冲洗离心管, 将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。2样品提取和测定:1称取新鲜植物组织 2g,按材料与提取剂 1 : 1的比例加 入4 C下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。2用移液管吸取样品

5、提取液1ml,按表1参加5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后5000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤 35次,直到去除植物色素。3向洗涤后的沉淀中参加2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。3结果计算:C Vt植物组织中H2O2含量卩mol/g Fw= FW Vi式中 C标准曲线上查得样品中H2O2浓度卩mol;Vt样品提取液总体积ml;Vi测定时用样品提取液体积 ml; FW 植物组织鲜重g。4、实验结果:1234567H2O2浓度0吸光度A0615578得出标准曲线如以下图:过氧化氢与吸光值关系的标准曲线值光吸9876543210.20.40.60.81.2y = 0.7643xR2 = 0.9942100umol/L过氧化氢量体积ml测定所得样品的吸光度为,带入得,考虑到称取鲜重g代入公式含

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