植物组织过氧化氢含量的测定

1、配制 100ml 、 100umol/L 的过氧化氢溶液需要多少 30%的过氧化氢原液？请写出计算过程。 答：首先计算其摩尔浓度：假设 30%为其质量百分数双氧水 30%浓度的试剂上海国药集团出品 ，室温时实 测密度为： 1,122 g/L ，所以， 1L 30%含量的双氧水中过氧化 氢含量为：1122g/L XLX30%=337g又H2O2的分子量为，那么1L 30%含量的双氧水中过氧化氢 浓度为： 337/34.0146=9.908 mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x VV=10-6L=1 ul假设 30%为体积分数100% H2

2、O2 密度是 1,440 g/L, 30 ml H 2O2 的质量为 1440 g/L X0 ml X0-3=43.2g，30%含量的双氧水中过氧化氢浓度 为： = mol/L .100ml x 10-3 x 100 umol/L x 10-6 mol/L x Vx 10-7 ul植物组织中过氧化氢含量测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害， 从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以去除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆

3、性密切相 关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测 定过氧化氢酶活性。【原理】H2O2与硫酸钛或氯化钛生成过氧化物一钛复合物黄色沉淀，可被H2 SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。【仪器和用具】研钵；移液管X 2支，5ml X 1支；容量瓶10ml X 7个，离心管5ml X 8支；离 心机；分光光度计。【试剂】100 mol/L H 2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O2 57卩I,溶于100ml，再稀释100 倍；2mol/L硫酸；5%W/V丨硫酸钛；丙酮；浓氨水。【方法】1制作标准曲线：取10ml离心

4、管7支，顺序编号，并按表参加试剂。测定H2O2浓度标准曲线配置表试剂ml离心管号1234567100 g mol/L H 2O204'C下预冷丙酮05%硫酸钛浓氨水3000r/min 离心 10min，弃去上清夜，留沉淀2mol硫酸待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量屡次冲洗离心管， 将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。2样品提取和测定：1称取新鲜植物组织 2g，按材料与提取剂 1 : 1的比例加 入4 C下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。2用移液管吸取样品

5、提取液1ml，按表1参加5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后5000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤 35次，直到去除植物色素。3向洗涤后的沉淀中参加2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。3结果计算：C Vt植物组织中H2O2含量卩mol/g Fw= FW Vi式中 C标准曲线上查得样品中H2O2浓度卩mol;Vt样品提取液总体积ml；Vi测定时用样品提取液体积 ml； FW 植物组织鲜重g。4、实验结果：1234567H2O2浓度0吸光度A0615578得出标准曲线如以下图:过氧化氢与吸光值关系的标准曲线值光吸9876543210.20.40.60.81.2y = 0.7643xR2 = 0.9942100umol/L过氧化氢量体积ml测定所得样品的吸光度为，带入得，考虑到称取鲜重g代入公式含