细胞毒筛选方法

1、方MTTW1,原理：MTT被活细胞线粒体水解酶还原为不溶性FMZ,而死细胞没有这种能力。沉积在活细胞内的FMZ用DMSO溶解后，溶液颜色与活细胞数量成正比。妨2,方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80dL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20dL待测样品，继续培养1天后每孔加入5mg/mLMTT20L,在37°C培养4小时，每孔加入DMSO100L,15分钟后用酶标仪在595NM波长下测各孔OD值，计算得出样品浓度IC50以及发酵液稀释倍数ID50。辐MTT0.5g溶解在100mLPBS溶液，终浓度为5mg/mL蔗SRB芾1,原理：

2、SRB是一种蛋白质结合染料，能使使活细胞内的蛋白质染色。其颜色变化与活细胞蛋白质成正比。莆2,方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80dL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20dL待测样品。继续培养2天，终止培养，每孔加10%TCA（三氯乙酸）100L,4c条件固定lh。用蒸储水冲洗5遍，自然晾干后每孔加入4mg/mLSRB溶液，室温下染色15min,弃上清，用1%乙酸冲洗5遍以去除非特异性结合的染料。每孔加入100L10mMTris溶液，在492NM波长下测OD值,并计算抑制率。肄SRB溶解在1%乙酸，终浓度为4mg/mL蔓染料排斥法妍1,原

3、理：细胞在损伤或死亡时，某些染料能穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色。而活细胞能阻止此类染料进入细胞内。以此鉴别活细胞和死细胞。蝴2,方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80dL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20dL待测样品，继续培养2天后消化，用0.4%（w/v）台盼蓝染液（终浓度为0.04%）染色3min,滴在计数板上，人工计数200个肿瘤细胞和计算抑制率。螃抑制微管蛋白聚合的化合物筛选方法蔓1,原理：微管骨架蛋白有一个很重要的特性，即在温度37C,蛋白浓度大于10M,聿PH值为6.9左右，有Mg2+、GTP的情况下，微管蛋

4、白能够在体外自组装成丝状微管，此过程可导致体系的吸光度变化，用此指标可检测微管聚合是否受到抑制。菱2,方法：96孔板中加入5dl的待测样品和5“的10%DMSO为溶剂对照，50“的测试用缓冲液，37c孵育5min。350nm波长测定OD值，连续30分钟记录OD（每2分钟一次），实验重复3次，取3次实验的平均值作为实验结果。蒂试剂:PIPES;氯化镁；EGTA;丙三醇；GTP;高纯度微管蛋白；DMSO。测试用缓冲液：80mMPEPIS,2mMMgCl2,o.5mMEGTA,20%甘油，l科MGTP,l.5mg/ml99%微管蛋白，1%DMSO（pH为6.9）。4保存仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'etudeetlarechercheuniquementddesfinspersonnelles;pasddesfinscommerciales.tojibkoAJiajiiOAeakpTOpwenojib3y肛3i