中药黄芪对糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影响

1、中药黄黄对糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影响单位：【摘要】目的用探针药物研究黄黄对大鼠CYP450活性的影响.方法采用四氧喀咤诱发糖尿病大鼠,正常大鼠为对照组,给予黄黄水提物诱导,通过HPLC检测探针药物的代谢率来评价各组CYP4502E1活性.结果给药组动物血液中的氯嘤沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别P0.05o结论黄黄对大鼠CYP2E1活性无明显影响.【关键词】CYP450氯嚏沙宗探针药黄黄Abstract:ObjectiveToevaluatetheeffectofHuangqionCYP2E1activityofdiabeticratswithprobedrug.Meth

2、odsDiabeticratmodelwasinducedbyalloxan.TheratsweregiventheaqueousextractsofHuangqiorallyforsixdays.TheactivityofCYP2E1wasevaluatedbymeasuringchlorzoxazone,adrugprobeforCYP2E1,anditsmetabolitesweredetectedbyDOC格式论文,方便您的复制修改删减HPLC.ResultsHuangqihadnoeffectonplasmaconcentrationofcholrzoxazone,therewasn

3、osignificantdiffereneewhencomparedwithcontrolgroupanddiabetic-modelgroup(P>0.05).ConclusionHuangqihasnoeffectonCYP2E1activity.Keywords:CYP450;Chlorzoxazone;Probedrug;Huangqi黄黄作为一种常用中药,不管是组方配伍汤剂,还是提取物的注射剂,均已经在临床上广泛应用于糖尿病(中医“消渴)的治疗1,但黄黄对CYP450酶系的影响尚属空白,因此本实验研究了黄黄对细胞色素P450的影响.细胞色素P450(cytochromeP450

4、,CYP)酶系一般简称药酶,在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用2o本实验用探针药物法,通过体内实验来评价黄黄对CYP2E1活性的影响,CYP2E1底物为氯嚏沙宗(chlorzoxazone):3,41.1器材与方法1.1 药物黄黄(购自河南省药材公司,经河南中医学院中药鉴定学科鉴定为正品),粉碎并准确称量,经水煎浓缩,使其浓度相当于1g/ml的原药萃取液.冷藏备用.1.2 试剂四氧喀口定、氯嗖沙宗为Sigma公司试剂,氯仿、甲酸和2-丙醇为分析纯试剂,乙睛为色谱纯试剂.1.3 仪器高效液相色谱(美国Waters公司)；Millennium2021色谱工作站.1.4 动物SD大鼠

5、,雄性230±20g,二级,购自郑州大学医学院实验动物中央1.5 方法1.5.1 模型制作大鼠随机分为两组,实验组在空腹12h后按200mg/kg体重腹腔注射2%四氧喀咤,正常对照组大鼠腹腔注射相同体积的生理盐水.造模期间检测体重、血糖强生血糖仪.于第7天,禁食12h,眼内眦静脉丛取血测血糖.空腹血糖升高,体重下降,说明已制备2型糖尿病模型.因四氧喀咤对肝脏可能有潜在损伤,故监测谷丙转氨酶GPT.将已制备成2型糖尿病模型的大鼠且GPT无明显改变者随机分为模型组、给药组,每组5只.152给药方法给药组每天清晨空腹灌胃给予黄黄提取液1次,0.3ml/100g,空白对照组、模型组给予相同体

6、积的生理盐水,诱导时间为6d.黄黄诱导后的第6天在乙醴麻醉下,于大鼠的右侧颈静脉处做插管手术,次日给予探针药物氯嗖沙宗.氯口坐沙宗按20mg/kg的剂量参加少量聚山梨酯-80研磨,再参加生理盐水制成乳浊液静脉注入,并于给药后的0.17,0.5,0.83,1.17,1.5h由插管处取出约025ml血液,立即以4000r/min离心5min,准确取出100山血清,参加内标,混匀,再参加650山氯仿,混悬振荡2min,离心5000r/min,5min,取有机相氯仿500山,氮气下干燥,参加流动相100“溶解,取80山进样.1.6 数据处理和统计分析AUC0s8h用梯形法计算,Cmax和tmax可以从

7、药-时曲线直接读出.Ke和t1/2运用药代动力学专用软件PAS2.0计算.给药前后药代动力学参数的差异用SPSS10.0统计,显著性检验采用配对t检验.2结果从表1中可以看出在造模第5天,大鼠的体重平均值下降,血糖均值上升,造模前后体重和血糖的t检验说明,P0.01,均有极显著差异,说明用四氧喀咤成功地诱导了大鼠糖尿病的形成.表1体重、血糖和GPT略大鼠腹腔注射四氧喀咤后2d开始出现多饮'多尿及体重不增等典型糖尿病病症,于给药后1周,糖尿病组大鼠血糖较对照组血糖明显增加PV0.001o因四氧喀噬对肝脏可能有潜在损伤,故监测GPTo结果说明,给药前后GPT无显著差异.对氯嗖沙宗的对照品进

8、样量和峰面积数据进行线性回归,可以得到氯口坐沙宗的回归方程为Y=285.9865+7.684e+0.05X图1,两者的相关系数均为1,呈线性相关,说明可以从方程推算样品氯嘤沙宗的含量.运用药动学PAS1.0软件对氯嗖沙宗药动学数据进行处理,分别按单室、双室、二室模型以最小二乘法拟和后,氯口坐沙宗同单室模型相吻合,权重为1/CC.01.5h的药动学参数表2以及药时曲线图2可以看出：给药组动物血液中的氯口坐沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别P0.05.表2各组血浆中2种探针药物的药动学参数略3讨论药物在机体内的生物转化主要由肝细胞内滑面内质网上的肝药酶催化,其中的细胞色素P450CYP45

9、0同工酶是催化药物进行氧化、复原、水解等代谢作用的重要的酶系.CYP450不仅在药物的代谢、降解和排泄中起着重要作用,所以研究中药与CYP450酶系的关系意义重大.不但可以推知中药的体内代谢过程,而且可以为临床中西药物的合理搭配使用提供直接依据.本实验采用四氧喀咤诱导糖尿病大鼠模型,应用氯嗖沙宗作为CYP2E1的探针药物来观察比拟中药黄黄对肝药酶活性是否有影响.同时,由于四氧喀咤对肝脏有潜在损伤,所以测定GPT可以监测有无肝损伤.从实验结果来看,01.5h的药动学参数表2以及药时曲线图2可以看出：给药组动物血液中的氯嗖沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别P0.05o这说明黄黄很可能对CYP2E1没有作用,提示当黄黄和CYP2E1酶底物的药物合用时,很可能不会发生药物的相互作用.综上所述,研究中药对CYP450酶系的影响,可以为临床中西药物的合理配伍应用,中药与中药间的相互作用提供指导具体原贝人同时还可以为中药的药物代谢动力学提供研究思路和科学的研究数据.【参考文献】：1侯士良冲药八百种详解M,郑州：河南科学技术出版社,1999:830.2侯艳宁,程桂芳,朱秀媛.黄苓式对小鼠肝细胞色