专题2课题1微生物的实验室培养(导学案)

1、专题 2 微生物的培养与应用课题 1 微生物的实验室培养预习目标培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作；测定某种微生物的数量；研究培养基对微生物的选择作用预习重点微生物培养和无菌技术的操作预习难点无菌技术的操作一、教材导读一、培养基1 概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2 营养构成：各种培养基一般都含有、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH 调至、培养细菌时需将PH 调至、培养厌氧微生物则需提供条件。思考1从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【补

2、充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、 O、 N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：3 一 ） 获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：1 对实验操作的、操作者的和进行。2 将用于微生物培养的、和等器具进行。3 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。（ 二 ）消毒和灭菌1 消毒是指。常用的方法有、消毒法。2 灭菌是指。 常

3、用的方法有：、灭菌。分别适用于那些用具？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？思考3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？思考4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持min ；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止 二、疑问存档 请你将预习中未解决的问题和有疑问的问题写下来，等待课堂上与老师和同学共同探究解决。疑惑点疑惑内容三、预习自测1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的

4、牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至50左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约5 10 min 后，将平板倒过来放置2金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是()A对接种环进行灼烧处理B带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C带菌培养基必须经加热后才能倒掉D接种后双手必须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭3防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是()A实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌C在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时

5、一定要洗手，以防止被微生物感染D使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境4下列叙述错误的是()A右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近B倒平板整个过程应在火焰旁进行C打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖D为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置专题 2 微生物的培养与应用课题 1 微生物的实验室培养一、课堂互动实验操作 大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是，本实验可分成和两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：思考5 在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅

6、速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？思考6 牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？2 倒平板：待培养基冷却至左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿，左手；使锥形瓶的瓶口；左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板。思考7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考8倒平板的目的是什么？思考9若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？思考10配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1 平板划线法是的操作， 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基

7、的表面。其操作步骤是：将在酒精灯火焰上灼烧直至。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到的目的。将冷却的接种环伸入到。 将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。将平板培养。思考11取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在第 1 次划线后都从上次划线末端开始的目的是？2 稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度

8、稀释，然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：取盛有mL 水的无菌试管6 支，编号101、 102、 103、 104、 105、 106。用灼烧冷却的移液管吸取mL 菌液注入编号为101 试管中，并吹打3 次使之混匀。从 101 倍液中吸取mL 菌液注入到编号为102 试管内吹打均匀，获得 102倍液。 依此类推。思考12 系列稀释操作的注意事项是什么？思考13 涂布平板操作的步骤是什么？ 结果分析与评价1 培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2 在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3 培养 12h 和 24h 后的菌落大小？

9、；菌落分布位置？原因？思考14在某培养基上出现了3 种特征不同的菌落是什么原因？思考15频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？二、典例精析类型一 微生物的营养要素【例1】下列关于微生物营养的说法，正确的是( )A 同一种物质不可能既作碳源又作氮源B 凡是碳源都能提供能量c除水以外的无机物仅提供无机盐D 无机氮源也能提供能量解析：此题考查学生对微生物的营养和能源的理解。对异养微生物来说，含C、 H、 O、 N 的化合物既是碳源，又是氮源。CO2 是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和 N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化

10、细菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D类型二 无菌技术【例2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( )A 接种针、手、培养基B高压锅、手、接种针C培养基、手、接种针D接种针、手、高压锅解析： 此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工 具，如接种环。答案： C类型三制备培养基3】以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是A 操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人

11、烧杯C 待培养基冷却至50左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约5 10 min 后将平板倒过来放置解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A4】下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A. 防止杂菌污染B.消灭杂菌C. 培养基和发酵设备都必须灭菌D. 灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生

12、物(杂菌)，所以是正确的；B 是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B三、随堂训练1 有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是()A用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀B移液管需经过灭菌C试管口与移液管应在离火焰1 2 cm 处D涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀2以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是()A计算称量

13、倒平板溶化灭菌B计算称量溶化倒平板灭菌C计算称量溶化灭菌倒平板D计算称量灭菌溶化倒平板3为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法4有关平板划线操作的叙述，正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养参考答案基础知识：一、

14、1. 营养物质生长繁殖液体 固体2水 . 碳源 氮源 无机盐PH 特殊营养物质氧气3 维生素，酸性，中性或微碱性，无氧思考1 :C、 H、 O、 N、 P、 S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上。二 （一）杂菌1. 空间 衣着 手，清洁和消毒2. 器皿 接种用具，培养基，灭菌3. 酒精灯火焰 4. 周围的物品（二）1. 略 巴氏消酒精 2. 略 灼烧 干热 高压蒸气思考2 : 防止感染实验操作者。思考3避免妨碍热空气流通。思考4有利于锅内温度升高，100k Pa， 121 ，15 30，零，容器中的液体暴沸，实验操作：一 1 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板思考5：防止牛肉膏吸

15、收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。思考6糖维生素 和 有机氮2： 50，锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开一条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置思考7消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。思考8防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。思考9不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。思考10增大接种面积，保持通气并防止杂菌感染。答案。二、平板划线. 稀释涂布平板1 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，接种环，烧红。，消灭试管口杂菌。菌液中取出一环菌种。，伸入平板内划3 5 条平行线，第一区划线末端开始向第二区域内，第五区的划线与第一区划线，倒置放在培养箱中思考 11消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种；防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。2 不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，9mL，灭菌。，1。，1思考12操作中试管口和移液管应在离火焰1 2cm处。整个操作过程中使用了1 支移液管结果分析与评