直肠黏膜修复敷料生物学评价研究

1、直肠黏膜修复敷料生物学评价研究直肠黏膜修复敷料生物学评价研究 本文关键词：敷料，直肠，黏膜，生物学，修复 直肠黏膜修复敷料生物学评价研究 本文简介：内容提要：目的：考察直肠黏膜修复敷料的生物安全性。方法：按照医疗器械生物学评价标准中的迟发型超敏反应试验、体外细胞毒性试验、刺激性试验分别对三个厂家的直肠黏膜修复敷料进行安全性评价。结果：三批直肠黏膜修复敷料的安全性检查，结果均符合规定。结论：三批直肠黏膜修复敷料用于临床是安全的。关键词：直肠黏膜修 直肠黏膜修复敷料生物学评价研究 本文内容： 内容提要：目的：考察直肠黏膜修复敷料的生物安全性。方法：按照医疗器械生物学评价标准中的迟发型超敏反应试验、

2、体外细胞毒性试验、刺激性试验分别对三个厂家的直肠黏膜修复敷料进行安全性评价。结果：三批直肠黏膜修复敷料的安全性检查，结果均符合规定。结论：三批直肠黏膜修复敷料用于临床是安全的。 关键词：直肠黏膜修复敷料；医疗器械；生物安全性评价 自2014年6月1日起开始施行的医疗器械监督管理条例中明确提出国家对医疗器械按照风险程度实行分类管理。第一类是风险程度低，实行常规管理可以保证其安全、有效的医疗器械。第二类是具有中度风险，需要严格控制管理以保证其安全、有效的医疗器械。第三类是具有较高风险，需要采取特别措施严格控制管理以保证其安全、有效的医疗器械1。根据2017年8月颁布的医疗器械分类目录，直肠黏膜修复

3、敷料属于无源植入器械中的组织工程支架材料，属类器械2。按照GB/T系列标准3-6对直肠黏膜修复敷料进行了细胞毒性、迟发型过敏及刺激等生物学评价，以期为进一步的临床研究提供依据，现报道如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 供试品：直肠黏膜修复敷料，A、B、C三个厂家生产，共三批。材料、药品、试剂：高密度聚乙烯，批号：K0M357，美国药典委员会；氯化钠注射液，批号：1601303G，西安京西双鹤药业有限公司；优级胎牛血清，货号：TBD21HY，天津市灏洋生物制品科技有限责任公司；RPMI培养基，批号：AB10125297，HyClone；青链霉素混合液（100×），批号：201705

4、03，Solarbio；胰蛋白酶，批号：SLBP8607V，Sigma；苯酚，批号：20160317，国药集团化学试剂有限公司。细胞及动物：细胞株，L929细胞，武汉博士德生物工程有限公司。白化豚鼠、新西兰兔，由西安市迪乐普生物资源开发有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（陕）2014-001。饲养环境：温度2226C，相对湿度40%70%，实验动物使用许可证号：SYXK（陕）2013-00。仪器：电子天平，BS2202S，赛多利斯仪器有限公司；生化培养箱，BSP-250，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；低速台式离心机，KA-1000，上海安亭科学仪器厂；医用净化工作台，SW-CJ-2

5、F，苏州安泰空气技术有限公司司；CO2培养箱，HF151，上海力康医疗设备有限公司；倒置相差显微镜，XSZ-D2，重庆光学仪器厂。 1.2方法 1.2.1迟发型超敏反应封闭贴敷试验4诱导：试验前剔除豚鼠背部被毛。豚鼠30只作为试验组，5只作为对照组。取供试品用吸收性纱布浸透1mL，贴敷于如图1所示诱导部位，纱布覆盖，绷带固定，贴敷6h。1周中连续3d重复该操作，同法操作3周。对照组以氯化钠注射液同法操作。见图1。激发：最后一次诱导后14d，对所有豚鼠于图1中的激发部位进行激发，方法同，贴敷6h。24h后剔除激发部位及周围被毛，温水洗净擦干，脱毛后至少2h，按表1对试验部位评分，并于48h再次评

6、分。见表1。1.2.2体外细胞毒性试验（MTT法）3,5,6试验样品及试液的制备：供试液：无菌条件下将直肠黏膜修复敷料与含血清培养基按0.2g/mL的比例于37C浸提24h后2000r/min离心3min，取上清。阴性对照液：取高密度聚乙烯（厚度为1mm）36cm2，剪成5mm×25mm的小块，加12mL细胞生长培养液，37C浸提24h，过滤除菌。阳性对照液：5g/L苯酚溶液，过滤除菌，现用现配。空白对照液：同细胞生长培养液。方法：取6块96孔培养板，每板各设6孔，每孔接种100L处于对数生长期状态良好的L929细胞混悬液，密度为1×104个/mL。置5%CO2培养箱37C

7、培养24h后，弃去原生长培养液。1-3#板各加100L供试液，作为供试品组；4#板加100L空白对照液，作为空白对照组；5#板加100L的阳性对照液，作为阳性对照组，6#板加100L的阴性对照液，作为阴性对照组，置CO2培养箱继续培养72h。72h后，取出各板，置显微镜下观察细胞形态，每孔加入20L质量浓度为5g/L的MTT溶液，继续培养4h后弃去孔内液体，每孔加入150LDMSO，振荡10min，在酶标仪570nm和630nm波长下测定吸光度，按下式计算相对增值率（RGR）。RGR=A/A0×100%注：RGR相对增值率，%；A供试品组（阳性及阴性对照组）在570nm和630nm波

8、长下的吸光度的差值；A0空白对照组吸光度。根据RGR按表2判定毒性反应分级。见表2。1.2.3黏膜刺激试验4选取直肠无明显刺激症状、无缺陷和无损伤的家兔12只，供试品组及对照组各3只。供试品组将受试物原液1mL注入至直肠内，对照组以氯化钠注射液1mL同法处理。每隔24h连续重复上述操作，连续5d。观察记录会阴溢液、红斑及刺激情况。给药结束后解剖出直肠组织，观察黏膜上皮组织。于注射部位取材，常规石蜡包埋切片，HE染色，LEICA生物显微镜观察。按表3记录每只动物病理反应评分，按表4进行刺激反应程度分级。见表3、表4。 2.结果 2.1迟发型超敏反应试验结果 于激发后24h及48h观察，供试品组及

9、对照组中豚鼠的反应等级均为0，表明三批直肠黏膜修复敷料在本试验条件下对豚鼠皮肤无致敏反应，结果见表5。 2.2体外细胞毒性试验结果 结果表明在本实验室条件下，阳性对照组细胞毒性反应级别为4级，阴性对照组细胞毒性反应级别为0级，直肠黏膜修复敷料A和C的细胞毒性反应级别2级，B的细胞毒性反应级别1级，结果见表6。 2.3黏膜刺激性试验结果 病理检查结果显示：对照组黏膜层上皮结构完整，固有层可见轻到中度炎细胞浸润及极轻度水肿，未见明显血管充血，平均刺激指数为3.33；试验组黏膜层上皮结构完整，固有层可见重度炎细胞浸润，少数血管充血及极轻度水肿，平均刺激指数为试验组（A）5.33，试验组（B）6.67

10、，试验组（C）5.33。结果表明在本实验室条件下，三批直肠黏膜修复敷料均具轻度刺激，对照组具极轻度刺激。病理检查结果见图2，反应计分及程度见表7。 3.讨论 医疗器械的生物学评价是在器械应用于人体之前先模拟体内、体外生物学试验，再根据实际需要进行动物体内实验，经数据分析和信息汇总后进行安全性评估，最终对该器械应用于人体的风险性做出预判。其意义在于预测医疗器械在与人体接触使用过程中的潜在危害，将风险性减少到最低的程度，确保使用的安全性7。医疗器械的生物学评价是确保人体应用安全的重要前提，但其本质是一项预测性工作，由于体外与体内的情况不能完全等同，动物与人体也存在差异，因此用体外试验的结果来推测体

11、内的应用状况，用动物试验得来的结果去推测人体应用的安全与否，是有可能会出现某些偏差的8。正是由于医疗器械生物学评价的特殊性及局限性，所以不能简单地只以某一项试验结果就做出判断，而是应该建立在综合考虑分析的基础上去做整体评价。虽然现在业内已有了一系列的评价标准及方法，但是由于材料科学和医学科学的迅猛发展，各种类型的医用产品不断问世，现有的标准或方法还不足以完全适应安全性评价的需求，这将是当下医疗器械的安全性评价领域需要面对和思考的问题。本文综合了GB/T16886及GB/T14233的系列标准，对三批直肠黏膜修复敷料进行了生物安全性评价，结果均符合规定。初步认为三批直肠黏膜修复敷料用于临床是安全

12、的。 参考文献 1国务院.医疗器械监督管理条例Z.2014-03-07. 2国家食品药品监督管理条例.医疗器械分类规则Z.2015-07-14. 3中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局/中国国家标准化管理委员会.中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价第12部分:样品制备与参照样品S.2005:4-8. 4中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局/中国国家标准化管理委员会.中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验S.2005:14-16,25-30. 5中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局/中国国家标准化管理委员会.中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验S.2003:84-88. 6中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局/中国国家标准化管理委员会.中华人