肾功能衰竭透析并发淀粉样沉积内存有脂蛋白

1、肾功能衰竭透析并发淀粉样沉积内存有脂蛋白赵辉，刘金平，郑芳，崔秀凤，孙续国【摘要】目的：研究脂蛋白是不是与淀粉样沉积共存，探讨脂蛋白与透析相关淀粉样沉积形成的关系.方式：肾功能衰竭透析淀粉样沉积症（DRA汗术,思者15例，腕关节韧带和椎间盘组织进行刚果红染色结合偏振光诊断淀粉样沉积；SudanBlackB染色辨别是不是有脂质存在；抗人血清B2microglobulin（82MG抗体免疫组织化学染色辨别淀粉样沉积相关蛋白类型.结果：DRA患者椎间盘韧带组织内刚果红染色和偏振光阳性.持续组织切片病理形态学发觉淀粉样沉积阳性范围与脂肪染色阳性相同；而且与抗人血清（32MGK体、抗高密度脂蛋白（HDL

2、）抗体免疫组织化学反映与淀粉样沉积阳性部位范围重合.结论：DRA患者（32MG目关淀粉样沉积内存有HDL.【关键词】脂蛋白；淀粉样变；免疫组织化学；（32球蛋白AbstractAIM:ToexaminetheeffectoflipoproteinsonB2microglobulinrelatedamyloidogenesis.METHODSThelevelsof32microglobulinin15dialysisrelatedamyloidosis(DRA)patientsweredeterminedbyCongeredstainingandpolarizedlightdiagnosis.L

3、ipoproteinexpressionwasexaminedbySudanBlackBstaining.Theantihumanplasmahighdensitylipoprotein(HDL)antibodyandanti32MGantibodyimmunoreactionswerecomparedwithCongeredpositivereactioninamyloiddeposedtissueintheDRApatients.RESULTS:CongoredpositivereactionandantiHDLimmnoreactioncolocalizedintheDRApatient

4、s;theCongoredpositiveresultcolocalizedwithantiB2MGandantiHDLimmnoreactivation.CONCLUSION:TheHDLcolocalizeswithamyloiddepositsinDRApatientsandmaybeitisassociatedwithB2microglobulinamyloidogenesis.Keywordslipoprotein;32microglobulin;dialysisrelatedamyloidosis;immunohistochemistry。引言B2microglobulin(B2M

5、G是组织相融抗原四聚体的轻链，除成熟的红细胞和胎盘滋养层细胞之外，其他细胞均含有(32MG在免疫识别、免疫调剂等方面发挥生物学作用1-2.肾小球单位损害患者血液中(32MG1白浓度增加.随着血液透析时刻医治的延长，发觉淀粉样变沉积于椎间盘和关节韧带等组织，通过蛋白类型鉴定证明淀粉样沉积的蛋白纤维为（32MG.但免疫清除血浆中的B2MG蛋白，未能降低透析相关淀粉样沉积症（dialysisrelatedamyloidosis,DRA）勺发生率3.另外最近研究发觉ApolipoproteinA1能够形成淀粉样沉积蛋白纤维，ApoE4基因多态性与脑淀粉样沉积形成紧密相关4.咱们研究DRA患者椎间盘韧带

6、和腕关节韧带组织内淀粉样沉积病理形态学特点和脂蛋白沉积的特点，探讨脂蛋白在淀粉样沉积形成关系.1对象和方式对象临床病症及病理形态学检查诊断为肾功能衰竭透析5a以上患者15（男9,女6）例，年龄4568岁.所有患者均行血清、尿液检查、肾功能检查，采血液后当即分离血清，分析血清（32MGS白水平.所有DRA患者手术标本，均-80C和福尔马林两种方式保留.方式血清稀释后，取稀释液体100wL加入预先包被的测定（32MGS映板内，室温反映1h.PBS洗涤3次后，加入1:500稀释抗人血清B2MGK体（Dako,Glostrup,Denmar®100L,室温反映1h,用酶标记二抗，室温反映1h

7、,利用DAB显色，计算血清（32M凝白的浓度.另标准冰冻切片，用500mL/L甲醇溶液作用2min,重复2次.5g/LSudanBlackB（700mL/L甲醇）溶液，37c条件下作用1h.重蒸储水洗涤3次,核染色5min.标准冰冻切片与5g/L过碘酸钠PBSpH缓冲液反映8min,流水洗涤5min.抗人血浆HDL抗体（AssayPro,Winfiled,MO,USA）37c条件下反映1h,PBS洗涤3次.DABTrisHClpH缓冲液，H2O2昆合液（Dako,Glostrup,Denmark作用3min.持续病理切片利用显微影像系统分析刚果红染色与脂质染色程度的相关性.统计学处置：计量资料

8、用x士s表示，两组比较用t查验.2结果患者（n=15）血清82MG（士）mg/L比正常人（n=20）血清（32MGzk平士mg/L高（P<）.DRA患者椎间盘韧带或腕关节韧带组织经刚果红染色显红色，可见绿色偏振光，确信为淀粉样沉积阳性.持续组织切片SudanblackB染色范围与刚果红染色阳性范围完全重合（图1）.抗血浆HDLS体免疫化学反映范围与脂质染色、刚果红染色阳性，淀粉样沉积部位和脂肪沉积部位重合（图2）.以刚果红染色为基准，利用显微镜影像分析系统，将刚果红染色划分为4个品级，别离测定、计算与刚果红染色相同范围脂质染色和高密度脂蛋白（HDL）免疫组织化学染色程度，结果显示

9、在刚果红染色40%g度，脂质染色和HDL免疫组织化学反映相关性最强（图3）3讨论DRA患者透析1a以上开始显现淀粉样沉积.咱们搜集持续血液透析5a以上患者，并发有椎间盘损坏或腕关节综合征患者，手术医治取材分析软组织淀粉样沉积内存有HDL.所有DRA患者肾功能损害患者组B2MGW正常对照组相较明显增加.在15例DRA患者中，8例椎间盘韧带组织；7例腕关节韧带组织经刚果红染色均发觉染红色，而且偏振光阳性，不同患者的刚果红染色阳性程度不同.可是组织内均有淀粉样沉积形成（图1）.所有椎间盘韧带、腕关节韧带组织，持续病理切片SudanBlackB,在刚果红染色呈红色范围，脂质染色为蓝色，呈脂质沉积阳性，

10、脂肪染色阳性范围与刚果红染色重合（图2）.该实验结果说明组织淀粉样沉积内存有脂肪成份.依照刚果红染色程度，利用影像分析系统划分4个品级（A:25%B:40%;C:75%;D:100%）.分析15例DRAI者椎间盘韧带和腕关节韧带组织内刚果红染色和SudanBlackB染色阳性范围与其相对应，可见抗血浆HDLB体免疫化学阳性反映.相同和不同脏器组织内，淀粉样沉积阳性部位均存有HDL成份；相同组织和相同组织结构（椎间盘韧带、腕关节韧带）阴性对照部位，未见有抗血浆HDLB体免疫化学反映阳性.以上结果说明，DRA患者组织淀粉样沉积内存有血浆HDL成份或存有代谢转变的HDL可是含有血浆HDL的抗原成份.

11、总之，肾功能衰竭透析患者并发（32M凝白相关淀粉沉积内存有HDL.【参考文献】1DimaanoC,NguyenT,AhmedA,etal.Apointmutationinbeta2microglobulinresultsinlossofepitopeexpressionJ.TissueAntigens,2000,56:473-475.2 KingsburyDJ,MearJP,WitteDP,etal.Developmentofspontaneousarthritisinbeta2microglobulindeficientmicewithoutexpressionofHLAB27:Associ

12、ationwithdeficiencyofendogenousmajorhistocompatibilitycomplexclassIexpressionJ.ArthritisRheum,2000,43:2290-2296.3 MotomiyaY,AndoY,HaraokaK,etlevelofalpha2macroglobulinbeta2microglobulincomplexinhemodialysispatientsJ.KidneyInt,2003,64:2244-2252.4 HamidiAL,LiepnieksJJ,HamidiAK,etal.HereditaryamyloidcardiomyopathycausedbyavariantapolipoproteinA1J.AmJPathol,1999,154:221-227.5 AmeerGA,GrovenderEA,PloeghH,etal.Anovelimmunoadsorptiondeviceforremovingbeta2microglobulinfromwh