培养基配制liangrq2011217

1、MS 培养基的成分及配制方法表1：MS 培养基成分名称分子式分子量组成（mg/L）无机物·大量元素硝酸铵NH4NO31650硝酸钾KNO31900二水氯化钙CaCl2·2H2O440七水氯化镁MgCl2·7H2O370磷酸二氢钾KH2PO4170无机物·微量元素碘化钾KI0.83硼酸H3BO36.20四水硫酸锰MnSO4·4H2O22.30七水硫酸锌ZnSO4·7H2O8.60二水钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25五水硫酸铜CuSO4·5H2O0.025六水氯化钴CoCl2·6H2O0.025无机物&

2、#183;铁盐七水硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.80EDTA钠盐Na2·EDTA·2H2O37.3有机物肌醇100.00烟酸0.50盐酸吡哆醇VB60.50盐酸硫胺素VB10.10甘氨酸2.00蔗糖30gpH5.80目前广泛采用的配制方法是先配制一系列的浓缩贮备液（表2):：大量元素（浓缩20倍）；：微量元素（浓缩200倍）；：铁盐（浓缩200倍）；：有机物质（蔗糖除外，浓缩200 倍）注意1：容易吸水、氧化、失水的化学药品用前检查、用后拧紧。保留、盖紧小的内盖。必要时，再用封口膜密封一次。注意2：配制的贮备液要标明溶液名称、配制人、配制时间。注意3：在制备每

3、种贮备液的时候，应当使每种成分分别溶解，然后再把它们彼此混合。或者按先后顺序，一种成分充分溶解后，再溶解另一种。注意4：各种生长调节物质的贮备液应当分别配制，如果它们是不溶于水的，则应先把它们溶解在很少量的适当溶剂中，然后再加蒸馏水到最终体积。注意5：在制备贮备液和培养基的时候，应当使用蒸馏水或无离子水，以及高纯度的化学试剂。表2：贮备液的配制成分名称分子式数量（mg/L）贮备液（MS大量）20×硝酸铵NH4NO333,000硝酸钾KNO338,000二水氯化钙CaCl2·2H2O8,800七水氯化镁MgCl2·7H2O7,400磷酸二氢钾KH2PO4 3,400

4、注：如配制1L贮备液，将烧杯中加入900mL蒸馏水，依次称取上述药品，加入烧杯中（溶好一个后，再加下一个）。最后定容至1L，4冰箱保存备用。贮备液(MS微量)碘化钾KI166200×硼酸H3BO31,240四水硫酸锰MnSO4·4H2O4,460七水硫酸锌ZnSO4·7H2O1,720二水钼酸钠Na2MoO4·2H2O50五水硫酸铜CuSO4·5H2O5六水氯化钴CoCl2·6H2O5注1：如配制1L贮备液，将烧杯中加入900mL蒸馏水，依次称取上述药品，加入烧杯中（溶好一个后，再加下一个）。最后定容至1L，4冰箱保存备用。注2：Cu

5、SO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。分别称取CuSO4·5H2O 0.05g，CoCl2·6H2O 0.05g，各自配成100mL的调整液，然后取10mL即是0.005g（即5mg）的量。贮备液(铁盐)七水硫酸亚铁FeSO4·7H2O5,560200×EDTA钠盐Na2·EDTA·2H2O7,460配制过程：将FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于450mL蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解。

6、然后，趁热将前者缓慢倒入后者，边倒边搅拌，混合均匀后，调节pH值至5.5，加蒸馏水定容到1L。配好后冰箱冷藏，防止霉菌滋生，产生絮状沉淀。须先分别溶解。乙二胺四乙酸二钠可以加热助溶，硫酸亚铁溶解时不可加热，否则立即氧化成棕褐色三价铁。注意顺序，将硫酸亚铁溶液缓慢倒入乙二胺四乙酸二钠溶液，边倒边搅拌。贮备液（MS有机）肌醇20，000200×烟酸 100盐酸吡哆醇VB6 100盐酸硫胺素VB1 100甘氨酸 400注：如配制1L贮备液，将烧杯中加入900mL蒸馏水，依次称取上述药品，加入烧杯中（溶好一个后，再加下一个）。最后定容至1L，4冰箱保存备用。制备1×MS固体培养基的

7、步骤如下：1. 称出规定质量的蔗糖，加水直到培养基最终容积的7580%；2. 分别加入一定量的各种贮备液；（制备1L MS培养基取50mL贮备液、5mL贮备液、5mL贮备液、5mL贮备液）3. 按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。所以最好用微量可调移液器吸取，减少误差。*: 激素母液的配制: 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起。生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解。细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。 一般取100mg配成100ml母液。4. 充分混合后，用精密试纸或酸度计调整pH至5.7-5.8（有条件的话使用酸度计，比较精确）。用0.1 mol/L NaOH 和0.1 mol/L HCl调节培养基的pH； 1N HCL配制：用量筒量取8.3mL发烟浓盐酸，配成100ml溶液。 1N NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。5. 加入58g质量好的琼脂粉（agar）或植物凝胶，摇匀；6. 加蒸馏水直至培养基的最终容积。7. 把培养基分装到三角瓶（或玻璃瓶）中，用牛皮纸和橡皮圈封严瓶口；8. 用高压灭菌锅在120 （1.O6kg/cm2