药物代谢动力学实验讲义

1、实验一药酶诱导剂及抑制剂对戊巴比妥钠催眠作用的影响【目的】以戊巴比妥钠傕眠时间作为肝药酶体活性指标，观察苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠催眠作用的影响，从而了解它们对肝药酶的诱导及抑制作用。【原理】苯巴比妥为肝药酶诱导剂，可诱导肝药酶活性，使戊巴比妥钠在肝微粒体的氧化代加速，药物浓度降低，表现为戊巴比妥钠药理作用减弱，即催眠潜伏期延长，睡眠持续时间缩短。而氯霉素则为肝药酶抑制剂，能抑制肝药酶活性，导致戊巴比妥钠药理作用增强，即催眠潜伏期缩短，睡眠持续时间延长。【动物】小白鼠8只，1822g【药品】生理盐水、0.75%苯巴比妥钠溶液、0.5%氯霉素溶液、0.5%戊巴比妥钠溶液天平、鼠笼、秒表、注射器

2、1mix4、5号针头X4【方法与步骤】一、药前诱导剂对药物作用的影响1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。甲组小鼠腹腔注射0.75%苯巴比妥钠溶液0.1ml/lOg,乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g,每天1次，共2天。2、于第三天，给各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g,观察给药后小鼠的反应。记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠傕眠潜伏期及睡眠持续时间。二、药BS抑制剂对药物作用的影响1、取小鼠4只，随机分为甲、乙两组。甲组小鼠腹腔注射0.5%氯霉素溶液0.1ml/10g;乙组小鼠腹腔注射生理盐水0.】ml/1Og02、30分钟后，给各小鼠腹腔注射0

3、.5%戊巴比妥钠溶液01ml/10g,观察给药后小鼠的反应。记录给药时间、翻正反射消失和恢复的时间，计算戊巴比妥钠催眠潜伏期及睡眠持续时间。【统计与处理】以全班结果（睡眠持续时间，分）作分组t检验，检验用药组与对照组有无显著性差异。（参见“数理统计在药理学实验中的应用”）【注意事项】1、傕眠潜伏期为开始给药到动物翻正反射消失的间隔时间，睡眠持续时间为翻正反射消失至恢复的间隔时间。2、本实验过程中，室温不宜低于20。：,否则戊巴比妥钠代减慢，使动物不易醒。3、氯霉素溶液有结晶析出时可在水浴中加热溶解。4、吸取氯霉素溶液的注射器应预先干燥，否则易结晶堵塞针头。【思考题】1、何谓肝药酶诱导剂与抑制剂

4、？2、试从理论上解释苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠睡眠时间的影响。实验二家兔血浆中水酸钠浓度测定和药代动力学参数测定【实验目的】1 .以水酸钠为例了解血浆药物浓度随时间变化的时量关系。2 .了解药代动力学参数的临床意义。【实验材料】1 .动物：家兔1只，雌雄不限，体重(2.5+0.5)kg。2 .器材：试管5支、离心管3支、试管架、小玻棒、10ml吸管、注射器(1mk5ml、10ml)、手术器械、动脉插管、动脉夹、721分光光度计、离心机3 .试剂和药品：25%氨基甲酸乙酯、10%及0.02%水酸钠溶液、10%三氯醋酸溶液、10%三氧化铁溶液。【实验步骤】1 .实验准备：取离心管3支及试管5支，

5、编号备用，麻醉(乌拉坦4ml/Kg),13号离心管及4、5号试管中分别加入10%三氯醋酸7ml2 .手术：颈动脉取血2ml,放入1号离心管3 .给药：耳缘静脉注入10%水酸钠，150mg/Kg,取血(5,35min分别取血2ml放入2、3号离心管，4、5试管分别加入蒸镭水及0.02%水酸钠2mI)4 .离心:2000（7分，5min,取上清液6ml,加入10%三氧化铁（12滴），比色（5min后，波长510nm）,计算结果。【注意事项】1 .注意颈总动脉插管术。2 .取血时，要先用0.1%肝素润湿注射器和针头，取血后用肝素封管，避免血液凝固，每次取出血第1ml弃去不用，再吸取2ml置于离心管。

6、3 .给药时间及给药后取血时间要记清。4 .取上清夜时，要先将上清液倒入编号相对应的试管中，再吸取所需的ml数,以免吸入沉淀影响比色，注意吸管要对号使用。5 .计算Vd,CL时注意单位换算。【实验结果】管号光密度（X）水酸钠浓度（丫）g/100ml标准管（5号）X0.02给药后5min（2号）X.G给药后35min（3号）x2c.*计算:K=y/xC1=kx,C2=kx2(单位:g/100ml)（单位：min）0.3011/2"(logCl-logC2)/Ar注:k为清除速率常数，y为0.02g/100ml,x为标准管即5号管的光密度值;C1,C2分别为给药后5、35分钟取血时的血药

7、浓度;/Xt为两次取血的时间差。2、表观分布容积（Vd）:00=0,xlgd（0.301x*/%2）（单位：g/100ml）Vd=D0/C0（单位：L/Kg）注：D。为用药初始剂量（150mg/Kg）,tl为用药后到第一次取血的时间间隔3、清除率（CL）:CL=0.693/t1/2xVd（单位：ml/min.Kg）实验三氨茶碱的血药浓度测定及药动学研究【实验目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及

8、参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。【实验原理】1 .氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成。在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶碱，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出。测量入274和入298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度,A298为本底的吸光度），AA=A274-A298。东超级“女龙曲戏2 .氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型。3 .房室模型是抽象的数学模型，它的划分与解剖学部位或生理学功能无关。药物转运速率相同或相近的部位可划分为同一房室。房室模型可以分为一室模

9、型、二室模型、多室模型。大多数药物在体的转运和分布符合二室模型。即药物静脉注射入血后，首先快速进入血流量大的组织，如心、肝、肾、肺、脑等，然后缓慢地向血流量小的组织，如脂肪组织、静止的肌肉组织等转移。【实验材料】1、动物家兔1只，雌雄不限，体重（2.5t0kg2、药品氨茶碱标准液3、试剂O.lmol/LHCIO.lmol/LNaOH异丙醇：氯仿抽提液（5:95）。4、仪器.wd.754型紫外分光光度计液体涡旋混和器数学坐标纸一半对数坐标纸一。【实验方法】1动物实验部分1.1 取健康家兔1只，称重，将家兔置于兔台。1.2 在家兔一耳缘注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩后，以左手拇指与食指压住静脉

10、耳根端，使静脉充盈，给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml,7号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。对其静脉注射氨茶碱15mg/kg。1.3 另一耳用锐利刀片切割取血。分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、180、300、420min取血。1.4 分离血清，各管均取血清0.5ml于15ml试管中,力口0.1mol/L盐酸0.2ml、抽提液5mI,振摇混合,2500抽min离心lOmin。2血药浓度测定（紫外分光光度法）1 吸取下层氯仿液4ml直另一试管中，加入O.lmol/LNoOH溶液4ml,振摇混匀，2500r/min离心10mino1 吸取上层碱液，以0.1

11、mol/LNaOH溶液4ml作参比，振摇混匀，2500r/min离心10mino测定其在入274和入298处的吸收度（A274和A298）,计算aA。3制作茶碱标准曲线：取5支试管，依次加入茶碱标准液20、40、60、80U00pl,各加入0.1mol/LNaOH溶液4mI,终浓度依次为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5Rg/ml,测定各管的A274和A298,计算A。以茶碱浓度为横坐标，4A为纵坐标描点绘图，用Excel软件求直线回归方程，即为茶碱标准曲线的直线方程（图示）。1 测得血清样品的4A代入标准曲线的方程，求得相应的C,CX10即为茶碱的血药浓度。以时间为横坐标，浓度对数为纵坐

12、标，用CAPP软件描点做图，判断氨茶碱在体代的房室模型。时间（min）AAC（pg/ml）血药浓度（pg/ml）510203060120240480【注意事项】.紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。.振摇混匀药液时防止溅出并准确加样。.样品离心前需配平。.测量时若更换波长，必须重新调节0和100%。【讨论】.氨茶碱的时量曲线呈几房室模型？为什么？.为何要测两个波长下茶碱的吸光度并取其差值？.试述药动学参数VI、Vd、tl/2。、tl/2|3sK10、K12、K2RCkAUC的含义。实验四体液pH对水酸钠排泄的影响【实验目的】.学习尿液中水酸的检测方法，掌握体液pH对药物排泄的影响及

13、其临床意义。.熟悉大鼠代笼的使用，巩固大鼠的各种给药方法。【实验原理】水酸钠经肾脏排泄物为水酸，尿液pH对水酸排泄影响非常大，当尿液呈酸性时仅排泄5%而尿液呈碱性时则排泄大约85%。尿液中的水酸遇到三氧化铁后可生成紫色络合物，根据反应后溶液紫色深浅可以定性分析水酸钠排泄量的多少。【实验材料】.动物大白鼠，雌雄不限，200300g。.器材大白鼠代笼两个，天平一个，棉手套一只，大鼠灌胃器两个，5毫升注射器两个，6号针头两个，30ml量筒1个，50ml注射器2个。.药品5%碳酸氢钠溶液，15%氯化氨溶液，（单盲法配制并编号为A、B）,2%水酸钠溶液，1%三氧化铁溶液，5%葡萄糖生理盐水，蒸僧水，苦味

14、酸，1%速尿。【实验方法】.取大白鼠两只称重并编号。.给其中一只按0.5ml/100g灌胃A药液，给另一只以同样剂量灌胃B药液。.30分钟后给两只大鼠灌胃5%葡萄糖生理盐水2ml/100g。.30分钟后，分别给两只大鼠腹腔注射2%水酸钠溶液lml/100g及1%速尿0.2ml/100g。.收集各鼠30分钟尿液，将收集的尿液分别用蒸僧水稀释到30ml,加1%三氯化铁5ml,比较紫色深浅。【实验结果】表2-1体液pH值对水酸钠排泄的影响鼠号体重(g)药物尿液反应后颜色结果分析AB【注意事项】.实验步骤进行到4后，再将集尿笼插入代笼中，以免收集尿液前将集尿笼污染。.实验用烧杯、量筒、注射器、集尿笼应

15、清洗干净，否则影响反应pH,导致实验结果不准确。【思考题】.药物的排泄途径有哪些？影响药物排泄的因素有哪些？.体液pH还对药物的哪些体过程有影响？有何临床意义？.实验中给予碳酸氢钠、氯化氨、葡萄糖生理盐水、速尿等药物的目的各是什么？.根据反应后溶液紫色深浅为什么可以定性分析水酸钠排泄量的多少？写出水酸与三氯化铁的反应式。实验五酚磺酸药代动力学参数的测定【实验目的】测定PSP在家兔体药代动力学参数。【实验原理】酚磺欧(Phenolsulfonphthalein,PSP),又名酚红。静脉注射后，不在体代，主要经肾近曲小管分泌排泄，属于一室模型一级动力学消除。PSP在碱性环境中变为红色，可用可见分光

16、光度计于波长560nm处进行定量测定。【实验材料】1、动物家兔1只，2.53.0kg,雌雄不限2、药品0.6%PSP溶液、PSP标准溶液(0.5、1、2pmol/L)x3%戊巴比妥溶液、稀释液(0.9%NaCI29ml+1mol/LNaOH1ml)3、器材兔台、手术剪刀x2、止血钳x2、眼科银子x2、注射器(5mlxK2mlxl)、抗凝试管x5、试管架、离心机、分光光度计、比色杯(0.5mix5)、加液器(1mlxl,250口*1)、烧杯、酒精棉球、干棉球、绳X4、线【实验步骤】1、家兔称重，用3%戊巴比妥(1ml/kg)耳缘静脉麻醉，仰卧，固定于兔板上，切开颈部皮肤，暴露颈浅静脉，从其下缘穿

17、一线，备取血时用。2、用1ml干燥注射器从颈浅静脉取血约1ml,然后由耳缘静脉注射0.6%PSP溶液,按0.4ml/kg给药，注射后分别在5、10、15、25分钟各取血约1ml,置于备好的抗凝试管，离心(2000转/分)10分钟。3、PSP标准液的平均吸收系数K的测定：取PSP标准液0.5、1、2pmol/L及蒸用水各1.55ml,再各加入1mol/LNaOH0.05ml,于波长560nm处比色，测得吸收度(A),并计算出平均吸收系数(K)值。KA4、取血浆样品0.1ml,放入0.5cm的比色杯，加入稀释液1.5ml摇匀(稀释了16倍)，于560nm处比色，记录其吸收度。5、PSP血浆浓度计算：APSPlIli浆浓度/L)=-rxl6xO.354xlO招及匕(PSP的分子量为354,比色时取血浆0.1ml,稀释了16倍)6、药代动力学参数计算：(1)计算5、10、15及25分钟时PSP的血浆浓度(Cf)(2)以时间(/)与血浆浓度(C7)进行