蛋白质印迹缓冲液和母液

1、蛋白质印迹缓冲液与母液RIPA缓冲液RIPA缓冲液含有离子去垢剂脱氧胆酸钠作为活性成分，特别适用于破坏核膜提取细胞核内物质。RIPA缓冲液产生得背景低，但可使激酶变性。它还能破坏蛋白质与蛋白质得相互作用，因此可能会给免疫沉淀分析与pull-down实验带来一些问题。50mMTrisHCl,pH8、0150mMNaCl1%NP-400、5%脱氧胆酸钠0、1%SDS10%脱氧胆酸钠母液（5g脱氧胆酸钠溶于50mL溶液中）避光保存。NP-40缓冲液20mMTrisHCl,pH8、0137mMNaCl10%甘油1%NP-402mMEDTA细胞骨架结合蛋白提取缓冲液10mMTris,pH7、4100mM

2、NaCl1 mMEDTA2 mMEGTA3 mMNaF20mMNa4P2O74 mMNa3Vo41%TritonX-10010%甘油0、1%SDS0、5%脱氧胆酸盐可溶蛋白缓冲液20mMTris-HCl,pH7、51 mMEGTA（Ca2+螯合剂）制备原乳酸钠所有流程必须在通风橱中进行。1、 用双蒸水制备100mM原钮酸钠溶液2、 用HCl将pH调节至9、03、 煮沸至无色4、 冷却至室温5、 再次将pH调节至9、06、 再次煮沸至无色7、 重复以上循环，直到煮沸并冷却溶液之后得pH保才I9、08、 用水补至初始体积9、 分装之后彳存于-20C10、 如果样品变黄，丢弃样品避免煮沸期间体积变化

3、过大，可用盖子稍微盖住容器上方，减少蒸发。TBS10x（浓缩Tris缓冲盐溶液）1L溶液：24gTris碱（式量：121、1g）88gNaCl（式量：58、4g）溶于900mL蒸储水中用12NHCl将pH调节至7、6加入蒸储水至终体积为1L要制备1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸储水混合，并再次将pH调节至7、6。1X溶液得最终摩尔浓度为20mMTris与150mMNaCl。Tris缓冲液得替代配方同时含有Tris碱与Tris-HCl。这可避免大量使用具有潜在危险性得盐酸来中与单独得Tris碱。TBS10x替代配方（浓缩Tris缓冲盐溶液）1 L溶液：24gTris-HCl（式量：157、6g

4、）5、6gTris碱（式量：121、1g）88gNaCl（式量：58、4g）溶于900mL蒸储水中1、 在室温下将溶液pH调节至约7、6。如果溶液过碱，用浓HCl将pH调节至7、6;如果溶液过酸，用浓NaOH将pH调节至7、6。2、 加入蒸储水至终体积为1L。3、 要制备1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸储水混合，并再次将pH调节至7、6。4、 1X溶液得最终摩尔浓度为20mMTris与150mMNaCl。TBST（Tris缓冲盐溶液，0、1%Tween20）1L溶液：100mLTBS10X900mL蒸储水1mLTween20中强膜再生液15g甘氨酸1gSDS10mLTween201、 用超纯

5、水将体积调节至800mL。2、 将pH调节至2、2。3、 加蒸储水至1L。高强膜再生液需要在通风橱中进行。100mL溶液:20mLSDS10%12、5mLTrisHCl,pH6、8,0、5M67、5mL蒸储水在通风橱中加入0、8mL3-疏基乙醇细胞核分离实验方案试剂缓冲液A10mMHEPES1、5mMMgCl210mMKCl0、5DTT0、05%NP-40（或0、05%Igepal或Tergitol）,pH7、9要制备250mL缓冲液A得母液：HEPES:1M=238、3g/L,因此10mM=0、59g/250mLMgCl2：1M=203、3g/L,因此1、5mM=0、076g/250mLKC

6、l:1M=74、5g/L,因此10mM=0、187g/250mLDTT:1M=154、2g/L,因此0、5mM=0、019g/250mLNP-40:0、05%细胞核分离实验方案试剂缓冲液B5mMHEPES1、5mMMgCl20、2mMEDTA0、5mMDTT26%甘油（v/v）,pH7、9要制备250mL缓冲液B得母液：HEPES:1M=238、3g/L,因此5mM=0、295g/250mLMgCl2:1M=203、3g/L,因此1、5mM=0、076g/250mLEDTA:1M=372、2g/L,因此0、2mM=0、0186g/250mLDTT:1M=154、2g/L,因此0、5mM=0、0

7、19g/250mL26%甘油（v/v）=65mLTBS0、025%TritonX-1001L溶液：250LTritonX-1001LTBS,pH7、6781、6%H2O2（过氧化氢）得TBS溶液400mL溶液：6、4mLH2O2（GPR=30%w/w）393、6mLTBS,pH7、678一抗得TBS溶液（含1%BSA）以使用稀释度为1:10得一抗为例。1mL溶液：100L一抗10mgBSA900LTBS,pH7、678生物素化二抗得TBS溶液（含1%BSA）以使用稀释度为1:200得生物素化二抗为例。1mL溶液：5L生物素化二抗995LTBS,pH7、678ABC（抗生物素-生物素复合物）得TBS溶液以每种组分得使用稀释度为1:100得ABC为例。1mL溶液：10L链霉亲与素10LHRP（或AP）-生物素980LTBS,p