SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度

1、SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118”的种子纯度SSR分子标记鉴定两系杂交水稻“荃两优2118的种子纯度 1.2.2 DNA指纹鉴定。PCR扩增引物接受SN/T3402-2021两系杂交水稻与亲本真实性及品种纯度鉴定DNA分析法中用于纯度鉴定的48对SSR多态性引物5。PCR扩增体系总体积10 L：10×Buffer 1.0 L，10 mmol/L dNTP 0.2 L，50 ng/mL的上下游引物各0.2 L，Tag酶0.6 L，按上述方法制备DNA模板2.0 L，ddH2O 5.8 L。PCR扩增程序：95 下预变性2 min，进行32次扩增反应循环：94 下变性45

2、s，55 下退火45 s，72下延长1 min。然后72 下延长8 min，至最终10 恒温。将PCR产物用非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳及染色检测，观看胶片并记录结果6。1.2.3田间种植鉴定。每个批次在海南田间种植1个小区，每个小区种植400株，单苗移栽，并设亲本对比。在整个生长阶段检查小区的种植状况，观看品种的特征特性，留意削减化肥、除草剂的使用，以免影响植株的特征特性。在抽穗前及齐穗后根据GB/T 3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定进行田间纯度鉴定，依据品种特征特性鉴定并记录下杂株类型和数量7。2结果与分析2.1“荃两优2118F1种子特异性引物的筛选试验参照行

3、业标准SN/T 3402-2021两系水稻品种真实性与纯度鉴定 DNA分析法，对48对引物进行筛选，最终选择RM7120和RM8277作为“荃两优2118F1种子纯度SSR鉴定引物。引物RM7120的上游为5-TGCCCAAAATATATGAAACC-3，下游为5-TTTTCTTGTTGAATGGGAAC-3;引物RM8277的上游为5-AGCACAAGTAGGTGCATTTC-3，下游为5-ATTTGCCTGTGATGTAATAGC-3。2.2DNA指纹鉴定与田间种植鉴定结果的比较利用引物RM7120和RM8277对6批“荃两优2118各96棵幼苗进行SSR分子标记鉴定，田间鉴定种植400株

4、，结果见表1。从表1可以看出，SSR分子标记与田间鉴定结果比较接近，差值最大为2.05%，差值最小为0.23%。图1为利用引物RM7120进行SSR鉴定的电泳结果，M1、M2双亲的带型为单一带型，杂交种1、2、3、4、5、7、8为杂合带型并具有双亲的带型，自交牢固的不育系6的带型与不育系M2一致。3结论与商量DNA分子标记技术直接分析遗传物质的多态性，其中SSR标记由于具有数量丰富、多态性高、遗传上的共显性、试验操作简洁、结果稳定等优点，已成为杂交水稻种子纯度鉴定的一种理想分子标记8。相比较而言，田间种植鉴定是目前公认的杂交水稻种子纯度鉴定中比较可靠、精确的鉴定方法，也是国家标准规定的、目前鉴

5、定杂交水稻种子纯度应用最广泛的方法之一9。试验结果显示，SSR鉴定与田间鉴定所得杂交水稻种子纯度存在差异，并且差异的改变无规律可寻。这一方面是因为SSR标记可精确区分不育系和恢复系，但对于窜粉混杂和变异株较难区分，此外SSR鉴定的精确性也受到DNA提取质量、电泳操作和引物的影响;另一方面是因为田间种植鉴定的结果精确性受到鉴定者的阅历、栽培治理、环境条件等因素干扰6。但总体来看，SSR鉴定与田间种植鉴定的结果十分接近。对于企业而言，种子入库后到播种之前开始包装销售，而海南加代种植鉴定需要在次年4月份才能得到鉴定结果。为了给包装销售提供可靠的质量根据，就需要在室内先进行纯度鉴定。在实际操作中，应接受以室内鉴定为辅，田间鉴定为主的理念指导