培养基配方及配制方法

1、培养基配方1 斜面菌种保存培养基培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取 200g 马铃薯，洗净去皮切碎，加水 1000ml 煮沸，纱布过滤，滤液补足 1000ml，再加 15g 葡萄糖和 15-20g 琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约 5-10ml （视试管大小而定），121灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率， 过细影响过滤速度），按麦芽重量的 34 倍加水，搅拌均匀后， 37左右浸泡 1 小时，然后缓缓加温至 5563（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀） ，保温 46 小

2、时（用摩尔 / 升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加 %琼脂，分装试管，每试管约 5-10ml （视试管大小而定），121灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。2 基菌落总数检测平板计数琼脂培养基将 ?胰蛋白胨 5.0g 、酵母浸膏 2.5g 、葡萄糖 1.0g 、琼脂 15.0g加入蒸馏水 1000ml 中，煮沸溶解后，调 pH，然后在 121下灭菌 15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。3 志贺氏菌检测GN增菌液成分：胰蛋白胨： 20g，葡萄糖： 1g，甘露醇： 2g，柠檬酸钠： 5g，去氧胆酸钠 0.5g ，磷

3、酸二氢钾 4g，磷酸氢二钾 1.5g ，氯化钠 5g，蒸馏水 1000ml。制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH 为，分装，在 115高压灭菌 15min。HE 琼脂成分：胨： 12g，牛肉膏 3g，乳糖 12g，蔗糖 12g，水杨素 2g，胆碱20g，氯化钠 5g，琼脂 1820g，蒸馏水 1000ml0，%溴麝香草酚蓝溶液 16ml，Andrade 指示剂 20ml. ，甲液 20ml，乙液 20ml。制法：将上述前七种成分加入 400ml 蒸馏水中作为基础液， 将琼脂加入到 600ml 蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至

4、5055，倾注浇平板。注 1：此培养基不能高温灭菌。注 2：甲液的配置：硫代硫酸钠： 34g，柠檬酸铁钠： 4g，蒸馏水： 100ml。注 3：乙液的配置：去氧胆酸钠： 10g，蒸馏水： 100ml。注 4：Andrade 指示剂的配置：酸性复红： 0.5g ，1mol/l 的氢氧化钠溶液： 16ml，蒸馏水： 100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中， 加入氢氧化钠溶液， 数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液12ml。SS 琼脂基础培养基：成分：牛肉膏： 5g，胨： 5g，三号胆盐： 3.5g ，琼脂： 17g，蒸馏水：1000ml。制法：将牛肉膏蛋白胨，三号胆盐加入到400ml 蒸馏水中，

5、将琼脂加入到 600ml 蒸馏水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121下灭菌15min，保存备用。完全培养基成分：基础培养基： 1000ml，乳糖： 10g，柠檬酸钠： 8.5g ，硫代硫酸钠：8.5g ，10%柠檬酸铁溶液： 10ml，1%中性红溶液：，%煌绿溶液：。制法：加热融化基础培养基，按比例加入处染料以外的所有成分，搅拌均匀，调，加入中性红溶液和煌绿溶液，混合均匀后浇平板。注 1：配制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱 48h 内使用。注 2：煌绿溶液配好后，应在 10 日内使用。注 3：可以购买 SS琼脂的干燥培养基。麦康凯琼脂成分：蛋白胨： 17g，胨： 3g，猪胆盐（牛、羊胆盐

6、） ：5g，氯化钠：5g，琼脂：17g，蒸馏水：1000ml，乳糖：10g，%结晶紫水溶液： 10ml，%中性红水溶液： 5ml。制法：将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml 蒸馏水中，调，将琼脂加入到 600ml 蒸馏水中加热溶解，将两液混合均匀，于121下灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖，等冷却到 5055时，加入结晶紫和中性红水溶液，搅拌均匀后浇平板。注：结晶紫和中性红水溶液配好后，须经高压灭菌。伊红美蓝琼脂（ EMB）成分：蛋白胨： 10g，乳糖： 10g，磷酸氢二钾： 2g，琼脂 17g，2%伊红 Y 溶液： 20ml，%美蓝溶液： 10ml，蒸馏水 1

7、000ml，。制法：将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中，调 pH，于 121下灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，并加入乳糖，冷却至 5055时加入伊红和美蓝溶液，混合均匀后浇平板。三精铁琼脂成分：蛋白胨： 20g，牛肉膏： 5g，乳糖： 10g，蔗糖： 10g，葡萄糖：1g，氯化钠： 5g，六水硫酸亚铁铵： 0.2g ，硫代硫酸钠： 0.2g ，琼脂：12g，酚红： 0.025g ，蒸馏水： 1000ml，。制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，调pH，然后加入琼脂，加热溶解，加入%酚红水溶液，摇匀，分装时量多一点，于 121下灭菌 15min，搁高层斜面备用。葡萄糖半

8、固体发酵管成分：蛋白胨： 1g，牛肉膏： 0.3g ，氯化钠： 0.5g ，%溴甲酚紫酒精溶液：，葡萄糖： 1g，琼脂： 0.3g ，蒸馏水： 100ml，。制法：将蛋白胨，牛肉膏，氯化钠加入水中，调pH 后，加入琼脂，煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于 121下灭菌 15min，备用。半固体管成分：蛋白胨： 1g，牛肉膏： 0.3g ，氯化钠： 0.5g ，琼脂： 0.4g ，蒸馏水： 100ml，。制法：将上述成分溶于水中， 加热煮沸，并调 pH后分装小试管， 121 高压灭菌 15min，直立凝固备用。尿素琼脂成分：蛋白胨： 1g，氯化钠： 5g，葡萄糖 1g，磷酸二氢钾： 2g，

9、%酚红溶液： 3ml，琼脂： 20g，蒸馏水： 1000ml，20%尿素： 100ml，±。制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调 pH，加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶， 121高压灭菌 15min，冷却至 5055后，加入经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为 2%，最终的 pH应为±。分装于灭菌试管内，搁斜面备用。西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分：氯化钠： 5g，七水硫酸镁： 0.2g ，磷酸二氢铵： 1g，磷酸氢二甲：1g，柠檬酸钠： 5g，琼脂： 20g，蒸馏水： 1000ml，%溴麝香草酚蓝溶液： 40ml，。制法：先将盐类溶解于水中，调 pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入

10、指示剂，混合均匀后分装试管， 121下灭菌 15min，搁成斜面。实验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于 36± 1培养 4 天，每天观察结果，阳性者斜面上有菌落生长。培养基由绿色转为蓝色。氰化钾（ KCN）培养基成分：蛋白胨： 10g，氯化钠： 5g，磷酸二氢钾： 0.225g ，磷酸氢二钠： 5.64g ，蒸馏水： 1000ml，%氰化钾溶液： 20ml，。制法：将除氰化钾以外的成分配好分装，121灭菌15min，放在冰箱内使其充分冷却，每100ml 培养基加入 %氰化钾溶液（最后浓度为1:10000 ），分装于 12mm×100mm灭菌试管，每管约4ml，立刻用橡皮塞塞

11、紧，放在 4冰箱内，至少可保存两个月，同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装备用。试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液，挑取 1 环接种于氰化钾培养基，另外挑取 1 环接种于对照培养基，在 36±1下培养 12 天，观察结果，如有细菌生长，则为阳性，经 2 天后不生长则为阴性。注：氰化钾是剧毒物质，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行， 实验失败的主要原因是封口不严， 氰化钾逐渐分解，变成氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，造成假阳性现象。氨基酸脱羧酶实验培养基成分：蛋白胨： 5g，酵母浸膏： 3g，葡萄糖： 1g，蒸馏水： 1

12、000ml，%溴甲酚紫乙醇溶液： 1ml，L- 氨基酸或 DL-氨基酸：0.5g 或 1g/100ml ，。制法：除氨基酸以外的所有成分加热溶解后，分装每瓶 100ml，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。 L- 氨基酸按 %加入，DL-氨基酸按 1%加入。再调，对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管，上面滴加一层液体石蜡。115高压灭菌 10min。实验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于 36± 1下培养1824h，观察结果，氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱， 培养基应呈紫色。阴性者因为碱性物质产生， 但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色， 对照管应为黄色。蛋白胨水（靛基

13、质试验用）成分：蛋白胨或胰蛋白胨： 20g，氯化钠： 5g，蒸馏水： 1000ml，制法：将上述成飞混合均匀，分装小管， 121灭菌 15min。靛基质试剂：柯凡克试剂：将 5g 对二氨基甲醛溶于 75ml 戊醇中，然后慢慢加入浓盐酸 25ml。欧- 波试剂：将 1g 对二氨基苯甲醛溶于 90ml95%的乙醇内，然后慢慢加入浓盐酸 20ml。实验方法：挑取少量接种物接种，在 36± 1下培养 12 天，必要时可培养 45 天，加入柯凡克试剂约，轻摇试管，阳性者试剂层呈深红色，或加入欧 - 波试剂，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者接触面上呈玫瑰红色。注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸， 每批蛋白胨买来后应用已知菌种实验。糖发酵管成分：牛肉膏： 5g，蛋白胨： 10g，氯化钠： 3g，十二水磷酸氢二钠：2g，%溴麝香草酚蓝溶液： 12ml，蒸馏水： 1000ml，。葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内， 121灭菌 15min。其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml，121灭菌 15min，另将各种糖类配好 10%溶液，一同灭菌，将 5ml 糖溶液加入到 100ml 液体培养基中，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。实验方法：从琼脂斜面上挑取小量