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文档简介

1、大肠杆菌转化实验（热击法）之欧侯瑞魂创作大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA&子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。1原理：质粒DNA粘附在细菌细胞概况，经过42C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。2器材：旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Am。，超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。3资料

2、和试剂：质粒DNA重组DNA培养基（不加抗菌素），LB培养基（加抗菌素），无菌ddH2QIPTG,X-gal。4实验准备：无菌ddH2Q1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V%2%X-gal（M/V,用N,N-二甲基甲酰胺配）。5操纵步调：（1）事先将恒温水浴的温度调到42Co从-70C超低温冰柜中取出一管(100p1)感受态菌，立即用手指加温融化后拔出冰上，冰浴510min。(2) 加入101连接产品(一般是全部连接产品)(DN焰量不超出100ng)，轻轻震荡后放置冰上20min。(3) 轻轻摇匀后拔出42C水浴中90秒进行热休克，然

3、后迅速放回冰中，静置35min。在超净工作台中向上述各管中分别加入900V1LB培养基(不含抗菌素)轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37C震荡30min到50min在超净工作台中取上述转化混合液100300p1,分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀(注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂)。如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40V12%X-gal,8120%IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。在涂好的培养皿上做上标识表记标帜，先放置在37C恒温培养箱中30-60min直到概况的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37C恒温培养箱过夜。(4) 在被细菌污染的桌面上喷洒700

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