泡桐丛枝病植原体保存体系建立技术规程

1、泡桐丛枝病植原体保存体系建立技术规 程 编制说明1、任务来源泡桐丛枝病植原体保存体系建立技术规程 ，由河南省 质量技术监督局 下达 2016 年第二批河南省地方标准制修订 计划的通知（豫质监标发 2016 122 号文），列入 2016 年 第二批河南省地方标准制修订计划，计划项目序号是110 。2、工作简况泡桐丛枝病植原体保存体系建立技术规程 ，委托单位： 河南省林业厅科技处， 承担单位： 河南农业大学， 河南省林业 科学研究院。 主要起草人： 范国强、 翟晓巧、 赵振利、 邓敏捷、 董焱鹏、曹喜兵、李永生；参加起草人：马向阳、张变莉、马 永亮、赵利新、牛苏燕、刘玟杉。范国强全面负责技术规程

2、任 务的落实及关键技术问题的解决， 翟晓巧和赵振利负责技术规 程的泡桐丛枝病植原体的培养和规程的撰写。 邓敏捷、董焱鹏、 曹喜兵、 李永生负责泡桐丛枝病植原体的鉴定。 马向阳、 张变 莉、马永亮、 赵利新主要参与泡桐丛枝病植原体的培养。 牛苏 燕、刘玟杉主要参与泡桐丛枝病植原体的保存工作。 主要实施 地点：河南农业大学泡桐研究所。泡桐是我国重要的速生用材树种之一， 在改善我国生态环 境和提高人民生活水平等方面具有重要的作用。 然而， 由植原 体感染引起的泡桐丛枝病 ,能导致泡桐幼树过早死亡，大树生 长缓慢、 蓄积量降低。 目前该病几乎发生在我国所有的泡桐栽 培区。据报道， 由于泡桐丛枝病的危害

3、， 每年造成的直接经济 损失超过亿元。 该病害不仅造成了巨大经济损失， 而且也严重 影响人们种植泡桐的积极性。自土居养二（ 1967 ）发现泡桐丛枝病的病原菌 植原体 以来，国内外科技工作者虽然对泡桐丛枝病发病的机制及防治 方法进行了大量的研究工作， 并初步明确了引起该病病原菌的 传播方式、发生途径和发病过程中的生理生化变化及防治方 法，但由于泡桐植原体无法体外培养， 严重制约了泡桐丛枝病 的研究。 克服植原体不能体外培养的研究瓶颈， 打破常规， 创 新思路， 另辟蹊径才有可能有实效的推动泡桐丛枝病研究。河南农业大学泡桐研究团队自 1994 年以来一直致力于泡桐丛枝 病的研究。在研究中发现由于

4、大田里患丛枝病泡桐树体高大且 生长状态一致性差， 在患病机制和药物防治研究中带来很多不 变，影响实验的开展。 在探索研究中发现建立泡桐丛枝病植株 的无菌快速培养体系， 通过植原体检测， 确保培养的是含有泡 桐丛枝病植原体的组织培养苗。 利用培养生长状态一致的泡桐 丛枝病组织培养苗开展各种研究， 取得的成效显著， 研究成果 曾获得 2010 年国家科技进步二等奖。 随着现代分子技术的进 一步发展，在泡桐 miRNA 、LncRNA 、CircRNA 、蛋白质和次 生代谢物，并对相关基因进行了克隆及功能验证中也正在发挥 重要的作用。植原体病害已经在 1000 多种植物上被发现，将 泡桐丛枝病植原体

5、保存技术进行规范话总结， 为泡桐丛枝病研 究和其他植原体病害研究都具有指导意义。3、编制原则本标准是根据我省泡桐丛枝病生产上发生严重和开展泡桐 丛枝病研究的实际需要制定的。 其规范了泡桐丛枝病保存过程 中的技术操作， 在丛枝病植原体研究中具有很强的规范指导和 借鉴意义，有利于推动危害我省的植原体病害在抗病机理和防 治药物方面的进一步深入研究。 本标准仅就泡桐植原体保存过 程中培养技术和鉴定技术提出了规定。 标准适用于河南省泡桐 丛枝病植原体的保存和研究。4、标准的主要内容本标准制定了泡桐丛枝病植原体苗组培快繁技术的术语和 定义、 泡桐丛枝病植原体的培养、 鉴定、 保存和档案管理等内 容。包括泡

6、桐丛枝病苗芽的诱导、根的诱导，继代培养，植原 体的鉴定和档案管理。泡桐丛枝病植原体的培养中芽的诱导与根的诱导程序是泡 桐研究团队经过反复筛选和验证建立的高效组织培养繁殖体 系，经过近十年的应用， 该方法在泡桐丛枝病研究中发挥了重 要的作用。研究成果发表在多家国内外研究期刊上。泡桐丛枝病苗植原体的鉴定采用的 16S rRNA 巢式 PCR 检测检测，该方法是当前泡桐丛枝病植原体检测最常用的方法，运用该方法开展的研究成果，得到国内外同行的认可。 泡桐丛枝病植原体的保存中泡桐丛枝病植原体苗的继代培养 和鉴定方法也是经过多年反复验证的，结果稳定。5、采用国内、国际标准情况目前泡桐丛枝病植原体保存还没有明确的国际和国内标 准。在泡桐植原体鉴定中采用了国内外植原体研究中鉴定方 法。6、与有关现行法律、法规和强制性国家标准、行业标准的关 系本标准符合现行国家法律、法规之规定。目前还没有强制 性国家标准和行业标准。7、重大分歧意