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文档简介

1、流式细胞仪原理及操作步骡流或细胞仪（FCM）是八十年代臬单克隆抗体.熒光化学*激光.计算机等鳶技术发展趁 来的一科先扯仪黑,己广汪应用于免疫举生杨化哮，生物学，肿痛学以及血液学等方面的研 克和临床常规工作。其中检测人自细胞表面标志可对自血病、淋巴痫作用辿速正确的诊新，对 淋巴细胞群和亚群进行赫确分类，还能分禽純化某一群或亚群细胞。活细胞免疫吳光技忒 是用 于FCM检测的标本准备染色后也能農變光显微镜下遗行观寨，在禁些婆唸条件下2活细胞免疫炎光染色后的特畀性和软感性要优于痛片圍定的常规间揍免疫炎光的结果。活细胞表面保翱有较完整的抗原或受体,先用将畀性亂嫄性单充隆抗体与细胞表面相底抗原结合，再用熒

2、光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应 抗原 的密嵐和分布。（二）操作步骤制备活性需的细胞悬液（培养细胞糸外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均 可用于本法？1用10% FCSRPMI1640调 整細胞滾度为5x10 6 1 x 10 7 Z ml取40卩1细胞悬液加入预先有特畀性Me Ab （5：50卩1的小玻璃管或塑料离養管,再加50卩11 : 20 （用DPBS 稀释）天箔正常兔血淸30mirj用洗涤液洗涤2决，每次加洗涤液2ml左右1000rpmx5min春上请卩加入50pl工作浓度的羊抗亂或免抗亂）荧光标记賜，龙分振揺4 4乜30min用洗济液冼涤2次，每次

3、如液2ml，左右1000rpmx5min加适董固老液如为FCM制务标本,般如入1mlg走液,如制片后在炭光显微铳下观癱,视细胞冰度加入100500plJFCM檢测或制片后灸光显微铳下观案（标本农试管中C三）述利和爰材1 各种特畀性单克隆抗体。2. 吳光标记的羊抗亀或兔抗亂第二抗体，夭话正常兔血请。3.10% FCS RPMI1640, DPBS .洗涤毅定液4. 玻璃管塑料管厲离心机，熒光显微镜等。（b）注憲爭项1 整个操作強4C下进行孑诜涤浚中加有比带规防崗利量需10信的N aN3,上逍卖验 : * : *条件是馬止一抗结合细胞膜抗原后发生灵朕.脱第&2. 洗涤要尢分，红外碳硫仪以避免游再抗体封冈二抗与细胞膜上一扰相结合，出现假m 性3. 加适量正常兔血请可封闻某些细胞表面免痩球餐令Fc受体，睁低和防止非精畀性 染 色。4. 细胞活性要好，公则易发生非特界性茨光爭色。itT 1. DPBS C x10$ 眶存液）NaCI 80gKCI 2g蒸锦水加至1000mlNa2 HPO4 1L5g临用时用熬镭水1 ；J0解猝KH2 PO4 2g2. 洗涤液DPBS 900mlFCS 50inL 终垠度 5% ?4% NaN 3 50ml （终戒度 0.2 %）走液DPBS1000ml葡萄瘡20g （终浓度甲醴10mlNaN 30.2g （终

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