试论瘦肉精的检测方法

1、试论瘦肉精的检测方法    【摘 要】“瘦肉精”是-肾上腺受体激动剂类化合物的俗称，包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。-激动剂类化合物大多是医学临床普遍使用的平喘类药物。它们另一个共同特征是，可大大减少食用动物的脂肪、增加瘦肉，缩短动物的生长期。但是如果大量摄入瘦肉精，这些物质很难通过动物的代谢排出体外，而是会聚集于肌肉、内脏等各部位。当通过食物链进入人体，且累计摄入量超过一定值，就会产生毒副作用。在众多-肾上腺受体激动剂类化合物中，盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CL）和莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）因药效显著、价

2、格低廉，成为此类药物在畜禽养殖中应用最为普遍的。虽然世界各国纷纷制定法规严禁盐酸克伦特罗和莱克多巴胺用于畜禽养殖，但因利润驱使，其非法使用的报道还在不断出现。如何高效快速地检测出瘦肉精成分，成为其有效监管的重要环节。 【关键词】瘦肉精；检测方法；进展 1.色谱检测法 目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS） 、毛细管电泳法（CE）等。中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将 GC-MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁，GB/T22147-2008“

3、饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法”规定了同步测定饲料中-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。而对于动物性食品，GB/T 5009.192-2003“动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。 除了国标方法以外，国内外许多学者也通过研究建立了检测瘦肉精的色谱法。 毛细管电泳免疫化学发光检测尿液中盐酸克伦特罗的方法，检测限1.2nmol/L。对于尿液样本的检测结果表明，本方法回收率90%108%，相对标准偏差小于8%。 通过场放大进样同步检测西马特罗、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇的

4、毛细管电泳法。在该系统的最佳条件下，上述物质检测限低于2.0ng/ml，与传统的电迁移进样相比，因更加敏感而更适于尿液中上述指标的测定，在尿液中平均回收率高于95.6%和95.3%，相对标准偏差低于 3.5%。 激光诱导荧光毛细管免疫电泳技术（CEIA-LIF）检测盐酸克伦特罗的方法0.7ng/ml。在最优条件下，自由和异硫氰酸荧光素（FITC）标记的盐酸克伦特罗可在8min内分离，迁移时间相对标准偏差为 0.72%，峰面积相对标准偏差为 2.8%。此法具有良好的选择性，高分离效率和灵敏度。与其他免疫方法比较相比，CEIA-LIF的优势在于缩短分析时间，减少试剂消耗，通过消除洗涤步骤简化检测方

5、法。适用于尿液和其他生物液体中CLB的检测。He等（2007）建立了简单，灵敏度高，重现性好的气相色谱-质谱联用的方法检测饲料中的莱克多巴胺和盐酸克伦特罗，检测限分别为4g/kg和2g/kg。 快速测定饲料及肉类产品中盐酸克伦特罗和沙丁胺醇的微型毛细管电泳法，在最优条件下，二者可以60s内分离，盐酸克伦特罗的检测限为12mol/L，而沙丁胺醇的检测限为0.65nmol/L。盐酸克伦特罗的平均回收率和相对标准偏差分别为84.2%和1.3%，而沙丁胺醇的平均回收率和相对标准偏差分别为81.2%和1.7%。 通过将解吸电喷雾电离法与串联质谱法相结合建立快速检测尿液中盐酸克伦特罗的方法，检测限2.0n

6、g/ml，对不同的尿样测定的回收率均在100%±20%，分析一个加标尿样时间在4min以内可以完成。除了分析速度快，串联质谱法还能提供结构信息以对盐酸克伦特罗确认。 快速分析克伦特罗，沙丁胺醇，丙卡特罗和非诺特罗的毛细管电泳法，检测时间约1min，检测限0.52.0mg/L，线性范围2.030mg/L，相关系数>0.996。准确性、特异性高无疑是色谱法检测瘦肉精的显著优势，但是由于仪器较为昂贵，其在基层检测部门推广应用还存在一定难度，因此，许多学者开展了基于免疫分析法检测瘦肉精的研究。 2.免疫分析法 在检测瘦肉精的免疫法中，酶联免疫吸附技术（ELISA）较为成熟，国内外许多公

7、司都开发了基于ELISA 法检测瘦肉精的试剂盒，与 HPLC法相比，更为敏感、快速和经济，但重现性与特异性较HPLC法差，因此适用于大批量样品的快速初筛。 检测猪组织中莱克多巴胺时间分辨荧光免疫分析法，当莱克多巴胺浓度为110gkg-1时，加标试验猪肌肉和肝脏中莱克多巴胺的回收率分别为88.2%110.6%以及102.3%118.5%。变异系数分别为7.1%16.4% 以及14.3%20.5%。同时，通过使用液相色谱串联质谱法同步检测样品，证实了时间分辨荧光免疫分析法分析样品的可行性。 然而，前述方法还存在样品前处理时间较长、过程较繁琐的问题，因此，通过制备盐酸克伦特罗分子印迹聚合物检测盐酸克

8、伦特罗的方法，利用分子印迹技术（Molecularly imprinted technology， MIT）制备了对 CLB具有高特异性、高选择性的 MIPs，进而建立了MISPE 程序，并与 ELISA技术结合，建立了动物组织样品中CLB的联用快速检测方法，显著提高了对动物组织类样品的前处理效率和检测灵敏度（0.5g/kg）。更重要的是，这对于食品安全领域中其它违禁药物等小分子物质 MIPs的制备和应用提供了一种有益的尝试和参考。 通过分子印迹聚合物（MIP）的使用检测动物组织中的痕量莱克多巴胺，该方法对猪肌肉组织和肝脏中莱克多巴胺的检测限为0.200.90mg/L，回收率分别为85.2%1

9、10.2%及83.8%115.2%。纳米材料是非常敏感的化学和生物传感器，固定有能选择性结合靶分子的生物探针的纳米传感器称为纳米生物传感器。它们能和生物芯片、免疫技术、标记技术等技术手段结合，从而使检测更加高效、简便。 3.展望 当前，造成盐酸克伦特罗屡禁不止的原因之一就是国内外检测 CLB的方法、手段还不完善，还没有建立宰前（毛、尿液）监测体系和准确、迅速、方便、精确的检测方法，从成本现场检测设备简便基层同步筛选法检测（试纸条法、试剂盒法）优点是操作简单、时间短、成本低，适合在现场进行大量样品的快速筛查，但结果受环境、温度等因素影响大，容易出现“假阳性”，因此试纸条法和试剂盒法检测结果不能直接作为执法依据。确证法检测采用液相色谱-质谱