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文档简介

1、医学细胞生物学实验医学细胞生物学实验徐志浩徐志浩遗传与基因工程教研室遗传与基因工程教研室院系楼西侧一楼院系楼西侧一楼2016年年1.1.掌握细胞冻存与复苏的原理。掌握细胞冻存与复苏的原理。2.2.熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。3.3.掌握细胞计数的一般方法。掌握细胞计数的一般方法。医学细胞生物学实验实验目的实验目的细胞冻存的必要性细胞冻存的必要性冻存温度冻存温度冻存操作对细胞的损伤：冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤冰晶损伤、溶液损伤冻存保护剂冻存保护剂冻存复苏的原则：冻存复苏的原则：慢冻速融慢冻速融实验原理实验原理1 1、细胞冻存、细胞冻存医学细胞生物

2、学实验1ml鸡血鸡血+1ml生理盐水生理盐水1500rpm离心离心5min(配配平平)弃上清弃上清加加2ml冻存液冻存液混匀混匀 (空气吹打法空气吹打法) 分装至分装至1ml的冻存管的冻存管标记标记液氮罐口（液氮罐口（-60-70 ）10min 液氮中冻存液氮中冻存10min （-196 ）。）。无菌操作无菌操作; ;保护剂；保护剂；细胞浓度；细胞浓度；梯度降温（慢冻）；梯度降温（慢冻）；防止冻伤；防止冻伤；防爆；防爆；冻存管做好标记。冻存管做好标记。2 2、细胞复苏与计数、细胞复苏与计数医学细胞生物学实验取出冻存管取出冻存管 37水浴水浴1min融化融化转入离心管转入离心管加至加至5ml培养

3、液培养液混匀混匀 1500rpm离心离心5min弃弃上清上清加加1ml培养液培养液混匀混匀取取0.5ml 加入等体加入等体积台盼蓝积台盼蓝染色染色1min 计数计数 计算细胞活力和计算细胞活力和细胞浓度。细胞浓度。如何区别死细胞和活细胞？如何区别死细胞和活细胞？细胞活力（率）：活细胞所占的比率。细胞活力（率）：活细胞所占的比率。3 3、细胞计数板的使用、细胞计数板的使用医学细胞生物学实验计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计数方法。数方法。使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。先盖盖玻片，再滴细胞悬液。先盖盖玻片，再滴细胞悬液。压

4、线细胞：计上不计下、计左不计右。压线细胞：计上不计下、计左不计右。计数方向：按一定顺序。计数方向：按一定顺序。1mm1mm1mm1mm0.1mm0.1mm0.1mm0.1mm3 31010-4-4mlml7.5cm7.5cm3.5cm3.5cm医学细胞生物学实验细胞活力细胞活力( (率率)=)=四大格活细胞数四大格活细胞数100%100%四大格总细胞数四大格总细胞数细胞浓度细胞浓度( (个个/ml)=/ml)=四大格总细胞数四大格总细胞数10104 4 N(N(稀释倍数稀释倍数) )4 4冻存复苏操作。冻存复苏操作。染色时间。染色时间。计数时间。计数时间。复苏细胞活力影响因素复苏细胞活力影响因素作业作业1. 列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。列出细胞冻存与复苏的主要操作

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