真核细胞DNA的制备与定量

1、基因的概念从遗传学角度：从遗传学角度：基因是生物的遗传物质，是遗传的基因是生物的遗传物质，是遗传的基本单位基本单位突变单位、重组单位和功能单位突变单位、重组单位和功能单位从分子生物学角度：从分子生物学角度：基因是负载特定遗传信息的基因是负载特定遗传信息的DNA分子片段，或者说是编码蛋白质多肽链或分子片段，或者说是编码蛋白质多肽链或RNA分子所必需的全部核酸序列分子所必需的全部核酸序列1. 结构基因（结构基因（structural gene）是指某些能决定是指某些能决定某种多肽链（蛋白质）结构的基因。结构基因的突某种多肽链（蛋白质）结构的基因。结构基因的突变可导致特定蛋白质一级结构的改变或影响蛋

2、白质变可导致特定蛋白质一级结构的改变或影响蛋白质量的改变。量的改变。2. 调控基因（调控基因（regulator and control gene）是是指某些可调节控制结构基因表达的基因。调控基因指某些可调节控制结构基因表达的基因。调控基因的突变可以影响一个或多个结构基因的功能，或导的突变可以影响一个或多个结构基因的功能，或导致一个或多个蛋白质的改变。致一个或多个蛋白质的改变。 rRNA基因，基因，tRNA基因基因基因家族和基因簇基因家族和基因簇真核基因组中有许多来源相同、结构相似、功能相关真核基因组中有许多来源相同、结构相似、功能相关的基因，这组基因称为基因家族的基因，这组基因称为基因家族假

3、基因假基因 在基因家族中的某些成员并不产生有功能的基因产物在基因家族中的某些成员并不产生有功能的基因产物 移动基因移动基因 移动基因是一种可以从染色体基因组的一个位置移动移动基因是一种可以从染色体基因组的一个位置移动到另一个位置的基因，甚至可以在不同的染色体之间到另一个位置的基因，甚至可以在不同的染色体之间跳跃跳跃 是指某种生物所包含的全套基因，即某物种单倍体的是指某种生物所包含的全套基因，即某物种单倍体的总总DNA，对于二倍体高等生物其配子的，对于二倍体高等生物其配子的DNA总和即总和即为二个基因组。为二个基因组。千碱基对千碱基对/染色体染色体长度长度(cm）染色体数染色体数(单倍体）单倍体

4、）形形 状状原核生物原核生物病毒病毒SV405.20.000171环状环状噬菌体噬菌体X1745.40.000181线状单链线状单链噬菌体噬菌体460.00151线状线状细菌大肠杆菌细菌大肠杆菌40000.131环状环状真核生物真核生物酵母酵母10000.03317果蝇果蝇410001.44人人1250004.1231.真核生物基因组真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基因组是双份的（即双倍体因组是双份的（即双倍体,diploid），即有两份同源），即有两份同源的基因组

5、。的基因组。2.真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经过转录和翻译生成一个过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。分子和一条多肽链。3.存在重复序列，重复次数可达百万次以上。存在重复序列，重复次数可达百万次以上。4.基因组中不编码的区域多于编码区域。基因组中不编码的区域多于编码区域。5.大部分基因含有内含子，基因是不连续的。大部分基因含有内含子，基因是不连续的。6.基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起点，而每个复制子的长度较小。点，而每个复制子的长度较小。 1995年首先完成一种

6、微生物年首先完成一种微生物的全部基因组排序工作，紧的全部基因组排序工作，紧接着，他又瞄向人类基因组接着，他又瞄向人类基因组的排序，于的排序，于1998年建立年建立“塞塞雷拉雷拉(celera)公司公司”。仅过。仅过了了2年，他就宣称塞雷拉公年，他就宣称塞雷拉公司将采用射枪方法和大量排司将采用射枪方法和大量排序机，来解开人类全部基因序机，来解开人类全部基因的密码。他的这一宣布促使的密码。他的这一宣布促使“人类基因组计划人类基因组计划”大大加大大加快排序的步伐。最后文特和快排序的步伐。最后文特和“人类基因组计划人类基因组计划”同时在同时在科学期刊上发表其排序的结科学期刊上发表其排序的结果。果。 克

7、雷格克雷格文特文特 二二000000年六月二十六日克林顿宣布年六月二十六日克林顿宣布人类基因组草图绘制完成人类基因组草图绘制完成 基因结构和功能的研究基因结构和功能的研究 基因组信息与疾病易感性的研究基因组信息与疾病易感性的研究 基因组与癌症研究基因组与癌症研究 疾病的遗传学背景疾病的遗传学背景 药物基因组学药物基因组学 防止和抑制DNase对DNA的降解 尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏 材料处理 培养细胞新鲜或冷冻组织剪碎，加入TE，匀浆转移到1.5ml离心管中20%SDS，蛋白酶K，601-2h将细胞悬浮后，用TBS洗涤离心，去上清裂解液（SDS，蛋白酶K）55， 1-2h 加入等体积的饱和酚，温和、充分混匀3min 离心5000g10min，取上层水相至另一离心管 加等体积的酚/氯仿，轻