HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量

1、HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量第17卷第1期2000年1月沈阳药科大学JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity一一HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量里圭2?摘要用HPLC法测定了黄芪甲苷含量.样品从东北黄芪中提取,用色谱纯甲醇溶解并稀释,采好的线性关系.关词唧Lc;蝴盘鲢黄芪为常用中药,素有"补药之长"之称,具有益气固表,利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高,临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下,乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一,其化学结构如图1所示,它具有降压,抗炎,稳定红细胞膜,提高血浆cAMP含量,促进小鼠再生肝

2、DNA合成和增强免疫功能等多种作用u】.因此在研究黄芪过程中,我们对其成分黄芪甲苷进层扫描法和香草醛.硫酸比色法,前者操作繁围在0.010.2mg?mL之间与峰面积呈线性,该苷的含量.H收稿日期:19990ll6,1仪器与方法仪器:Warers高效液相色谱仪,510型泵,490E紫外检测仪.对照品黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所.样品黄芪饮片(生品),购自沈阳京盛药店,本校许春泉教授鉴定为东北黄芪.试剂乙腈(色谱纯,天津四友生物医学公司),甲醇(色谱纯,天津四友),正丁醇(分析纯),乙醚(分析纯),水,重蒸馏水,去离子水,中性氧化铝(层析用),轻质氧化镁(AR).2方法与结果色谱柱:YWCn

3、,柱2504.6mm11l止,大连依利特科学仪器;流动相:甲醇(色谱纯);流速:0.8ml/min;检测波长:205nln;灵敏度:0.1AUFS.精密称取l0.03mg黄芪甲苷标准品,置于别精密吸取0.5,1.5,2.5,5,10mL用甲醇稀释谴,进样20LI按上述色谱条件测定.在tu=3.375左右有唯一吸收峰.以峰面积为纵坐标,进A=0.1717C+0.4657,r=0.9996,线性范围0.010.2mg/mL一1,如表1所示.沈阳药科大学第17卷pkC/(g-mL一)×10Peakarea/xt06溶解并定容于1OmL容量瓶中,精密吸取2OL进样.连续5次,测定峰面积,其R

4、SD为2.14%.取5g已测定黄芪甲苷含量的生药提取水煎液平均分成10份.取5份,再分别准确加入1,447mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液0.5mL,按"样品测定"项下方法操作,结果见表2.Tab-2Theruilaofrecovery=96.1%.RSD=2.15%样品溶液在室温下放置.每隔3h测定1次,12h内共测5次.含量分别是1.350,1.347,1.352,1.349mg/g.RSD为2.45%,证明黄芪甲苷含量至少12h内稳定.将黄芪水提取液50mL(相当于含生药5O)蒸发器回收甲醇至干,残渣加少量H2O制成水溶液,用100mL乙醚振摇萃取脱脂3次,取水层加水饱

5、和正丁醇的上层液萃取数次,合并正丁醇液,减压旋转蒸发正丁醇至干,残渣加少量95%乙醇溶解,然后均匀滩洒在装有干燥03:MgO(36g:9g)混合物的漏斗中,并用75%洗脱3h,洗脱液回收乙醇后得残渣用95%乙醇溶解.得乙醇液加大量乙醚.抽滤,弃去滤液,滤渣附于滤纸上使其自然挥干乙醚,将滤纸浸于甲醇中使滤渣充分溶解.弃去滤纸.定容至50mL,备用,精密吸取1mL置5OmL容量瓶中,用色谱纯甲醇定容至刻度,振摇,过微孔滤膜,进样20L,按上述色谱条件测定,并由回收方程计算含量,得图谱(图2,3),结果如表3.FIg.2TheehromatagrmofthesMapleFIg.3Theehromat

6、ogramofeawolTab.3ThemeMuremeatalrellsofthemplecontentn=5,RSD=0.694%,Ai=0.511682x106.Ci=0.027nag?mL一第1期田丰等:HPLC法掼l定黄芪中的黄芪甲苷含量则50g药中黄苠甲苷为67.5mg,相当于每克生药中含黄芪甲苷1.35mg.3讨论蛋白质,乙醚除脂类物质,过A1203:MgO滤层除黄酮,最后制得甲醇浸液的工艺,结果表明,此方法提取完全,损失少,分离度良好.h.日本的原田正敏I报道了用乙腈一水(1:2)作为流动相测定黄芪皂苷(即黄苠甲苷),我们经实验发现在此流动相下出现倒峰,峰形不好,且受流动相影响

7、大,不易把握保留时间,我们也考察了(甲醇:水)不同比例作为流动相的实验结果,最终选择甲醇为流动相能得到最佳效果.c.鉴于黄芪皂苷种类较多,结构相近,紫外扫描只在200nm有末端吸收1.原田正敏因此定在200nm处检测4.我们实验表明,波长越长,噪音越小,但灵敏度越低;越靠近200nm,灵敏度越高,但噪音越大.综合考察这两个因素,本实验选择205Fu-12为测定波长.d.黄苠中甲苷的含量很低,而且受产地,生长时间,采收季节等因素影响,具体差异有待于进一步研究.参考文献杂志.1993,8(3):1631662鲁静,壬宝琴.黄芪甲苷的薄层扫描法测定中成药,1992.14(6):34-35定.中药通报

8、,1986,11(9):38-39药分册.1990,5(5):201-202High-performanceLiquidChromatographicDeter-minationofAstragalosideinAstragalusmem-branaceus(Fisch.)Bunge.TianFeng,DengYingjieDepartmentofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110015AbstractAsensitivemethodwasdevdopedtodetermineastragalosidebyhigh-per

9、formanceliquidchro205nm.TKsassaydemonstratedthatastraalosidehadadequatesensitivityandselectivitytomeasuretheconcentrationsofastragalosideinAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge.Keywordshighp口0皿aI1celiquidchromatography;astragalosideAstragalusritleTJq.branoAT$(Fisch.)Btmge.书讯沈阳药科大学中药系顾茂书工程师与原山西中药厂厂长杨巨奎主任药师,四平市卫生学校讲师魏冉,沈阳陆军总院高成副主任药师等人合编中药专业系列专着,为中医药教学,科研,中药制药,药检和中医I临床用药等方面提供了重要参考书籍.中国中药炮制技术汇编,山西科学技术出版社,25.00元;传统中药材别名录,天津科学技术出版社,