志贺氏菌检验

1、动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验 知识目标：知识目标： 理解志贺氏菌的生物学特性。理解志贺氏菌的生物学特性。 了解志贺氏菌的致病性。了解志贺氏菌的致病性。 掌握志贺氏菌标准检验方法。掌握志贺氏菌标准检验方法。 能力目标：能力目标： 会制备志贺氏菌检验用培养基。会制备志贺氏菌检验用培养基。 会对志贺氏菌进行检验。会对志贺氏菌进行检验。 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 志贺氏菌属（志贺氏菌属（ShigellaShigella）的细菌（通称痢疾杆菌）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌，是细菌性痢疾的病原菌人类对痢疾杆菌有很高的人类对痢疾杆菌有

2、很高的易感性。在幼儿可引起急易感性。在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚性中毒性菌痢，死亡率甚高。高。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n A A群：也称志贺氏菌群，有群：也称志贺氏菌群，有1010个血清型。不发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶个血清型。不发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶，与其他各群细菌无血清学联系。，与其他各群细菌无血清学联系。n B B群：也称福氏菌群，已有群：也称福氏菌群，已有1313个血清型（包括亚型和变种）。最近又发现个血清型（包括亚型和变种）。最近又发现3 3个亚型（个亚型（1c1c、4c4c、5b5b）。发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。抗原结构较复杂）。发酵甘露

3、醇，无鸟氨酸脱羧酶。抗原结构较复杂，各型间有交叉凝集。每一福氏菌型具有二种抗原，即型特异性抗原和群，各型间有交叉凝集。每一福氏菌型具有二种抗原，即型特异性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌株中，后者有许多种，存在于福氏各菌型中。抗原，前者只存在于同型菌株中，后者有许多种，存在于福氏各菌型中。例如福氏例如福氏1b1b型除含有型除含有1 1型特异性抗原外，尚含有型特异性抗原外，尚含有4 4、6 6群抗原。群抗原。n C C群：也称鲍氏菌群，有群：也称鲍氏菌群，有1515个血清型，分解甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。各个血清型，分解甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。各型内无交叉凝集。型内无交叉凝集。n D D群：也称宋

4、内氏菌群，仅有一个血清型。分解甘露醇，有鸟氨酸脱羧酶群：也称宋内氏菌群，仅有一个血清型。分解甘露醇，有鸟氨酸脱羧酶，迟缓发酵乳糖。有，迟缓发酵乳糖。有、相之分。相之分。志贺氏菌属的亚群志贺氏菌属的亚群动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 形态与染色特性：形态与染色特性：本属细菌本属细菌为两侧平行，末端钝圆的短为两侧平行，末端钝圆的短杆菌，长约杆菌，长约2-3m ,2-3m ,宽宽0.5-0.5-0.7m0.7m。不形成芽胞，无荚。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，革兰氏阴性，膜，无鞭毛，革兰氏阴性，个别菌带有菌毛。个别菌带有菌毛。一、生物学特性一、生物学特性动物检疫检验技术专业教

5、学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 培养特性：培养特性：需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为为3737，最适，最适pHpH为为6.4-7.86.4-7.8。3737培养培养18-2418-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径、边缘整齐，直径2 23mm3mm。宋内氏菌易出现两种不同的菌落，即宋内氏菌易出现两种不同的菌落，即1 1相相和和2 2相菌落，相菌落，1 1相菌落与其它痢疾杆菌的光滑型菌落无任何区别。相菌落与其它痢疾杆菌的光滑型

6、菌落无任何区别。2 2相相菌落多在传代培养物中出现，菌落较大、较不透明、表面如玻璃珠状菌落多在传代培养物中出现，菌落较大、较不透明、表面如玻璃珠状，边缘不整齐或折皱。，边缘不整齐或折皱。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 生化特性：生化特性： 本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。大多不发酵乳糖本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。大多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。靛基质产生不定，甲基红，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。靛基质产生不定，甲基红阳性，阳性，VPVP试验阴性，不分解尿素，不产生试验阴性，

7、不分解尿素，不产生H2SH2S。根据生。根据生化反应可进行初步分类。化反应可进行初步分类。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验志贺氏菌属的细菌对甘露醇分解能力不同，可分为二大组。志贺氏菌属的细菌对甘露醇分解能力不同，可分为二大组。 不分解甘露醇组：不分解甘露醇组：主要为志贺氏菌。又根据能否产生靛基质，进一步分主要为志贺氏菌。又根据能否产生靛基质，进一步分靛基质阳性（靛基质阳性（1 1、3 3、4 4、5 5、6 6、9 9、1010型）和靛基质阴性（型）和靛基质阴性（2 2、7 7、8 8型）型）的志贺氏痢疾菌。的志贺氏痢疾菌。分解甘露醇组：分解甘露醇组：包括福氏、鲍氏、宋内

8、氏菌。再按乳糖分解情况，分为包括福氏、鲍氏、宋内氏菌。再按乳糖分解情况，分为迟缓分解乳糖的宋内氏和不分解乳糖的福氏和鲍氏菌。后者进一步再根迟缓分解乳糖的宋内氏和不分解乳糖的福氏和鲍氏菌。后者进一步再根据靛基质产生与否，分靛基质阳性（福氏菌据靛基质产生与否，分靛基质阳性（福氏菌1 1、2 2、3 3、4 4、5 5型和鲍氏菌型和鲍氏菌5 5、7 7、9 9、1111、1313、1515型）和靛基质阴性（福氏菌型）和靛基质阴性（福氏菌6 6型和鲍氏菌型和鲍氏菌1 1、2 2、3 3、4 4、6 6、8 8、1010、1212、1414）二类。）二类。 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺

9、氏菌检验n 血清学特性：血清学特性： 志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O O）及表面抗原）及表面抗原（K K）组成。）组成。 主要抗原有三种：型特异性抗原、群特异性抗原、表面抗主要抗原有三种：型特异性抗原、群特异性抗原、表面抗原（原（K K抗原）。抗原）。 根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分为四个群、为四个群、3939个血清型（包括亚型）。个血清型（包括亚型）。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 抵抗力：抵抗力： 志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏志贺

10、氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。菌次之，志贺氏菌最弱。 一般在潮湿土壤中能存活一般在潮湿土壤中能存活3434天，天，3737水中存活水中存活2020天，在粪天，在粪便内（室温）存活便内（室温）存活1111天。日光直接照射天。日光直接照射3030分钟，分钟，56-56-60106010分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%1%石炭石炭酸中酸中15-3015-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。感，但易产生耐药性。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检

11、验志贺氏菌检验n 侵袭力：侵袭力：志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用粘附于大肠粘膜志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用粘附于大肠粘膜的上皮细胞上，继而进入上皮细胞并在内繁殖，扩散至邻近细胞的上皮细胞上，继而进入上皮细胞并在内繁殖，扩散至邻近细胞及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细吸管血栓形成以至坏死、脱落，形成溃疡。志贺氏菌一般有毛细吸管血栓形成以至坏死、脱落，形成溃疡。志贺氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。目前认为不论是产生外毒不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。目前认为不论是产生外毒素的还是只有内毒素的志

12、贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病。因此素的还是只有内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病。因此，对粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。，对粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。二、致病性二、致病性动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 内毒素：内毒素：志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素，作用于肠壁，使通志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素，作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收。继而作用于中枢神经系统及心血管透性增高，从而促进毒素的吸收。继而作用于中枢神经系统及心血管系统，引起临床上一系列毒血症症状，如发热、神志障碍，甚至中毒系统，引起临床上一系列毒血症症状，如发热、神

13、志障碍，甚至中毒性休克。毒素破坏粘膜，形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血便。性休克。毒素破坏粘膜，形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血便。毒素作用于肠壁植物神经，使肠道功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛毒素作用于肠壁植物神经，使肠道功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急后重等症状。，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急后重等症状。n 外毒素：外毒素：志贺氏菌志贺氏菌1 1型及部分型及部分2 2型（斯密兹痢疾杆菌）菌株能产生强烈型（斯密兹痢疾杆菌）菌株能产生强烈的外毒素。为蛋白质，不耐热，的外毒素。为蛋白质，不耐热，75-80175-801小时即可破坏。其作用是使

14、小时即可破坏。其作用是使肠粘膜通透性增加，并导致血管内皮细胞损害。外毒素经甲醛或紫外肠粘膜通透性增加，并导致血管内皮细胞损害。外毒素经甲醛或紫外线处理可脱毒成类毒素，能刺激机体产生相应的抗毒素。一般认为具线处理可脱毒成类毒素，能刺激机体产生相应的抗毒素。一般认为具有外毒素的志贺氏菌引起的痢疾比较严重。有外毒素的志贺氏菌引起的痢疾比较严重。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验三、检验方法三、检验方法 n 以以食品安全国家标准食品安全国家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验志贺氏志贺氏菌检验方法菌检验方法 GB 4789.5-2012GB 4789.5-2012 进行。进行。动

15、物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验检验程序检验程序分离培养初步生化试验增菌培养结果报告生化试生化试验及附验及附加生化加生化试验试验血清学试验动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 以无菌操作取检样以无菌操作取检样25g25g（mLmL），加入装有灭菌），加入装有灭菌225mL225mL志贺氏志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8 000 8 000 r/minr/min10 000 r/min10 000 r/min均质；或加入装有均质；或加入装有225mL225mL志贺氏菌增志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍

16、击式均质器连续均质菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1 min1 min2 2 minmin，液体样品振荡混匀即可。于，液体样品振荡混匀即可。于41.5 41.5 ，厌氧培，厌氧培养养16 h16 h20 h20 h。1 1增菌培养增菌培养动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验用接种环取增菌液用接种环取增菌液1 1环，划线接种于环，划线接种于n 一个一个XLDXLD琼脂平板。琼脂平板。 培养：培养：363611，20h20h24h24h。n 一个一个MACMAC琼脂平板。琼脂平板。 培养：培养：363611，20h20h24h24h。n 观察各个平板上生长的菌落特征。观察

17、各个平板上生长的菌落特征。2 2分离培养分离培养动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 典型菌落：典型菌落：粉红色至无粉红色至无色，半透明、光滑、湿色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或润、圆形、边缘整齐或不整齐。不整齐。志贺氏菌在志贺氏菌在XLDXLD平板菌落特征平板菌落特征动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验志贺氏菌在志贺氏菌在MACMAC平板菌落特征平板菌落特征n 典型菌落：无色至浅粉典型菌落：无色至浅粉红色，半透明、光滑、红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐湿润、圆形、边缘整齐或不整齐。或不整齐。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏

18、菌检验n 挑取平板上的可疑菌落：挑取平板上的可疑菌落： 接种三糖铁琼脂接种三糖铁琼脂 半固体半固体 营养琼脂小斜面营养琼脂小斜面n 培养：培养：363611，181824h24h。n 观察结果观察结果3 3初步生化试验初步生化试验动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 斜红和底黄，不产气。斜红和底黄，不产气。n 不产生硫化氢，不变黑不产生硫化氢，不变黑，阴性。，阴性。志贺氏菌三糖铁结果志贺氏菌三糖铁结果志贺氏菌志贺氏菌动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验3.3.初步生化试验初步生化试验- -半固体半固体n 试验原理：试验原理：有鞭毛的细菌可以运动。有鞭毛的细

19、菌可以运动。 n 试验方法：试验方法：n 自鉴别平板上直接挑取数个菌落穿刺自鉴别平板上直接挑取数个菌落穿刺与半固体培养基，与半固体培养基，363611培养培养2424。n 观察结果：有鞭毛的细菌呈倒立松树观察结果：有鞭毛的细菌呈倒立松树状，无鞭毛的细菌只沿刺线生长。状，无鞭毛的细菌只沿刺线生长。n 结果：结果：无动力。无动力。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6 6型可产生少量气体）、不产硫化氢、

20、半固体管中无型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取已培养的营养琼脂斜面上生长的动力的菌株，挑取已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。菌苔，进行生化试验和血清学分型。 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 生化试验生化试验 - -半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌型的鸟氨酸阳性志贺氏菌型的鸟氨酸阳性; ;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1 1型，型，鲍氏志贺

21、氏菌鲍氏志贺氏菌1313型的型的-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。4.4.生化试验及附加生化试验生化试验及附加生化试验 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 生化试验生化试验 由于福氏志贺氏菌由于福氏志贺氏菌6 6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化

22、酶阴性的革兰氏阴性杆菌。为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。4.4.生化试验及附加生化试验生化试验及附加生化试验 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验 生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 生化试验生化试验 由于福氏志贺氏菌由于福氏志贺氏菌6 6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇

23、、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。4.4.生化试验及附加生化试验生化试验及附加生化试验 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 生化试验生化试验 由于福氏志贺氏菌由于福氏志贺氏菌6 6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化

24、酶阴性的革兰氏阴性杆菌。为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。4.4.生化试验及附加生化试验生化试验及附加生化试验 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验n 附加生化试验附加生化试验 某些不活泼的大肠埃希氏菌（某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.colianaerogenic E.coli）、A-DA-D（Alkalescens-D isparbiotypesAlkalescens-D isparbiotypes碱性碱性- -异型）菌的异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生

25、化实验符合志贺氏菌属生化特血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验盐试验(36(36培养培养24h24h48h)48h)。4.4.生化试验及附加生化试验生化试验及附加生化试验 动物检疫检验技术专业教学资源库志贺氏菌检验志贺氏菌检验 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据初步判断结果，用已培养的营养琼脂斜面上生长的菌根据初步判断结果，用已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。行鉴定。动物检疫检验技术专业教