[医药卫生]药物分析ppt课件

1、第九章 维生素类药物的分析 维生素维生素是维持人体正常代谢是维持人体正常代谢功能所必需的功能所必需的 活性物质，活性物质， 不能不能在人体内合成。在人体内合成。脂溶性脂溶性 VitA、D、 E、K 等等 水溶性水溶性 VitC、VitB族（族（B1、B2、B6、B12）、烟酰胺、泛酸钙、）、烟酰胺、泛酸钙、叶酸、烟酸等叶酸、烟酸等分类：分类：第一节 维生素A的分析 一、结构与性质一、结构与性质CH3CH3CH3CH2ORCH3CH3（一）结构 1. 维生素A的结构为具有共轭多烯醇侧链的环己烯R=H 维生素A醇R=COCH3 维生素A醋酸酯 CH3CH3CH3CH2ORCH3CH32. 维生素A

2、为全反式结构（二）性质 1. 具紫外吸收 最大吸收在325328nm 2. 不稳定性 易氧化变质，密封、凉暗处保存，充氮或加抗氧剂 3. 能与三氯化锑反应呈色 4. 溶解性 易溶于三氯甲烷、乙醚等 二、鉴别二、鉴别维生素A + 三氯化锑 不稳定的蓝色紫红色反应条件：无水无醇（一）三氯化锑反应（CarrPrice反应）维生素维生素A Ch.P（2005）【鉴别鉴别】取本品取本品1滴，加三氯甲滴，加三氯甲烷烷10ml振摇使溶解；取出振摇使溶解；取出2滴，加滴，加三氯甲烷三氯甲烷2ml与与25%三氯化锑的三三氯化锑的三氯甲烷溶液氯甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐，即显蓝色，渐变成紫红色。变成紫红色。

3、（二）紫外吸收光谱法（二）紫外吸收光谱法 BP（2000）去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitAUSP（24） 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 BP（2000） 杂质对照品法杂质对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑（三）（三）TLC三、含量测定 （一）紫外分光光度法（三点校正法） 药典附录1. 生物效价、换算因数 维生素A的含量是用生物效价国际单位（IU/g）表示。2907000/344. 0/101/6IUggggIU）效价（190015302907000)(/max%cm1EgIU）效价（换算因数 第一法测

4、定维生素第一法测定维生素A醋酸酯时，醋酸酯时，换算因素为换算因素为1900 第二法测定维生素第二法测定维生素A醇时，醇时，换算因素为换算因素为1830 本法是在三个波长处测得吸光度，根据校正公式计算吸光度A校正值后，再计算含量，故本法亦称“三点校正法”。其原理主要基于以下两点： 2. 原理 （1）杂质的无关吸收在310340nm波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸光度下降。 （2）物质对光的吸收具有加和性。即在某一样品的吸收曲线上，各波长的吸光度是维生素A与杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收曲线的叠加。3三点波长的选择法（1）第1点：选择维生素A的最大吸收波长（即1）。（2）第

5、2点和第3点：在最大吸收波长的两侧各选一点（ 2和3）。 等波长差法等波长差法：在1的左右各选一点为2和3，使3 1 1一2。 中国药典第一法测定维生素中国药典第一法测定维生素A醋酸醋酸酯时，规定酯时，规定1328 nm，2316 nm，3340 nm。等吸光度法：在1的左右各选一点为2和3，使 13276AAA 中国药典第二法测定维生素中国药典第二法测定维生素A醇醇时，时，规定1325 nm， 2310 nm， 3334nm。4测定法 药典附录药典附录（1）第一法（适用于维生素A醋酸酯） 选择最大吸收波长：取供试品适量，精密称定，加环己烷环己烷溶解溶解制成每1ml中含915单位的溶液。照紫外

6、-可见分光光度法（附录A），测定其吸收峰的波长，并在300、316、328、340、360nm五个波长处分别测定吸光值。如果最大吸收波长如果最大吸收波长不在不在326329nm之间，则应采用第二法之间，则应采用第二法（皂化法）测定含量。（皂化法）测定含量。 如果最大吸收波长在326329nm之间，则计算各波长下的吸光度与328nm波长下的吸光度的比值（即 ）。将计算得到的五个吸光度比值分别与中国药典规定的吸光度比值相减，即得到五个差值。判断每个差值是否超过规定的0.02。 328AAi判断判断 max 是否在是否在326329nm之间之间改用第二法改用第二法求算求算Ai/A328， 并并与规定

7、值比较与规定值比较是是否否 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300 规定值规定值 差值差值328iA/A判断法选择A值 a. 如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在326329nm之间，并计算得到的五个波长下的差值，之间，并计算得到的五个波长下的差值，均不超过均不超过0.02时，时，则不用校正公式计算吸光度，而直接用在直接用在328nm波长处测波长处测得的吸收度得的吸收度A328代入公式中求出代入公式中求出 %1cm1Eb. 如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在326329nm之间，但计算得到的波长下的

8、差值，之间，但计算得到的波长下的差值，有一个或几个超过有一个或几个超过0.02，这时应计算A328（校正），并计算f，并按下法判断： 校正公式： A328(校正)=3.52(2A328A316A340) %100328328)(328AAAf校正 判断差值是否超过规定值的判断差值是否超过规定值的02. 0 有一个以上有一个以上超过超过02. 0 未超过未超过02. 0 计算计算 A328（校正）（校正） 用用A328计算计算若若 所得的所得的数值在数值在3，则仍不用校正公式计算吸收度，而直接用直接用A328代入公式中代入公式中求出求出 %100328328328AAA（校正）%1cm1E若若

9、所得的所得的数值在数值在-15-3之间，则需用校正之间，则需用校正公式计算吸收度，即用公式计算吸收度，即用A328（校正）（校正）代入代入公式中求出公式中求出 %100328328328AAA（校正）1%1cmE若若 所得的所得的数值小于数值小于 15或大于或大于+3，则不能，则不能用本法测定而应采用第二法（皂化用本法测定而应采用第二法（皂化法）测定含量。法）测定含量。 %100328328328AAA（校正）03%15%3% 校校正正328A328A第二法第二法第二法第二法-15% -3% 0 3%A328A328（校正）（校正）皂化皂化皂化皂化 亦称皂化法（适用于维生素A醇） 溶剂：异丙醇

10、 （2）第二法 等吸光度法测吸光度，测吸光度，并测定吸收峰的波长并测定吸收峰的波长 判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品取未皂化样品采用色谱法纯采用色谱法纯化后再测定化后再测定 计算计算325300AA是是否否 判断判断 A300 /A325 是否大于是否大于0.73否否是是取未皂化样品取未皂化样品采用色谱法纯采用色谱法纯化后再测定化后再测定 计算计算A325(校正校正)，并，并计算计算f%100325325)(325AAAf校正 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正03%3% 校校正正325A325A 校校正正325A5. 计算

11、（1）判断法选择）判断法选择A%cm1CLAcm%1（2）求）求（3）求效价）求效价换算因数）效价（%11/cmEgIU（4）求标示量）求标示量标示量标示量平均丸重平均丸重100g/IU 标示量丸标示量100/IU6. 注意事项注意事项（1）勿强烈振摇，避免乳化）勿强烈振摇，避免乳化（2）仪器波长的校正）仪器波长的校正（3）半暗室中快速测定，防止）半暗室中快速测定，防止VitA被被氧化氧化（二）三氯化锑比色法（二）三氯化锑比色法兰色兰色维生素维生素三氯甲烷三氯甲烷 3SbClA第二节第二节 维生素维生素B1 的分析的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+ Cl HCl- 一、结构与性

12、质一、结构与性质（一）结构氨基嘧啶环噻唑环1. 维生素B1（盐酸硫胺）是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+ Cl HCl- 氨基嘧啶环噻唑环亚甲基2. 噻唑环上季铵及嘧啶环上的氨基为两个碱性基团，可与酸成盐 NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+ Cl HCl- 季铵氨基（二）性质 1. 溶解性 2. 具有紫外吸收 3. 硫色素反应 4. 分子中含两个氮杂环，可与生物碱沉淀试剂反应生成组成恒定的沉淀 5. 氯化物的反应二、鉴别试验二、鉴别试验 维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇等）中，

13、显蓝色荧光。 1. 硫色素反应荧光消失H+OH-兰色荧光正丁醇 OH-维生素B1 + K3Fe(CN)6 硫色素维生素维生素B1 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】2. 氯化物的反应 Ch.P（2005） 4. 硝酸铅反应 3. 沉淀反应 )(PbS)NO(PbSNaSNaNaOHB维生素23221色三、含量测定三、含量测定 （一）非水碱量法 原料 滴定前须加入醋酸汞试液，反应摩尔比为 1 2。维生素维生素B1 Ch.P（2005）取本品约取本品约0.15g，精密称定，置，精密称定，置100ml具塞具塞锥形瓶中，加冰醋酸锥形瓶中，加冰醋酸20ml，微热溶解后，微热溶解后，密塞，放冷至室温，加密塞

14、，放冷至室温，加醋酸汞醋酸汞试液试液5ml，喹喹那啶红那啶红-亚甲蓝混合指示液亚甲蓝混合指示液2滴，用高氯酸滴滴，用高氯酸滴定液（定液（0.1mol/L）滴定至溶液显天蓝色，振）滴定至溶液显天蓝色，振摇摇30秒不褪色，并将滴定的结果用空白试秒不褪色，并将滴定的结果用空白试验校正。每验校正。每1ml高氯酸滴定液（高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于相当于16.86mg的的C12H17ClOSHCl。（二）硅钨酸重量法（二）硅钨酸重量法1. 原理原理 维生素维生素B1在酸性溶液中与硅钨酸作用在酸性溶液中与硅钨酸作用生成组成恒定的沉淀，根据沉淀及供生成组成恒定的沉淀，根据沉淀及供试品重量即可计算含

15、量。试品重量即可计算含量。2C12H17ClN4OSHCl+SiO212WO326H2O (C12H17ClN4OS)2SiO212WO34H2O2molVitB1 1mol1939. 022.347927.3372换算因数2. 测定方法测定方法 Ch.P（1990） 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水50ml溶解后，加溶解后，加盐酸盐酸2ml，煮沸煮沸，立即，立即滴加硅滴加硅钨酸试钨酸试液液4ml，继续煮沸继续煮沸2分钟，用分钟，用80恒恒重的垂熔玻璃坩埚滤过重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用，沉淀先用煮沸的煮沸的盐酸溶液盐酸溶液（12）20ml分次洗涤，再用分次洗涤，再用

16、水水10ml洗涤洗涤1次，最后用次，最后用丙酮丙酮洗涤洗涤2次，每次次，每次5ml，在，在80干燥至恒重干燥至恒重，精密称定，所，精密称定，所得重量与得重量与0.1939相乘，即得。相乘，即得。3. 测定条件测定条件（1）取样量宜在）取样量宜在50mg左右左右（2）在盐酸酸性下沉淀，颗粒较大）在盐酸酸性下沉淀，颗粒较大（3）加热煮沸、搅拌下缓慢加入沉淀）加热煮沸、搅拌下缓慢加入沉淀剂，得到易于过滤的沉淀剂，得到易于过滤的沉淀（4）硅钨酸与维生素）硅钨酸与维生素B1用量用量8:1（5）沉淀的洗涤：热盐酸）沉淀的洗涤：热盐酸水水丙酮丙酮（6）沉淀）沉淀80干燥至恒重、沉淀含干燥至恒重、沉淀含4个结

17、晶水、换算因素为个结晶水、换算因素为0.19394. 特点特点优点：优点：经典的重量分析法，专属性经典的重量分析法，专属性 强，结果准确，不需特殊仪强，结果准确，不需特殊仪 器和基准物质器和基准物质缺点：缺点：操作繁锁、费时操作繁锁、费时（三）紫外分光光度法 维生素B1片及注射液 吸收系数法定量维生素维生素B1的紫外吸收随溶液的的紫外吸收随溶液的pH变化而变化变化而变化可用差示分光光度法来消除背可用差示分光光度法来消除背景及辅料的干扰景及辅料的干扰1. 原理原理 激发波长激发波长365nm，发射波长，发射波长435nm，对照法定量对照法定量（四）硫色素荧光法（四）硫色素荧光法异丁醇层兰色荧光硫

18、色素铁氰化钾维生素异丁醇 NaOH1B+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇SdAb对照液对照液供试液供试液2. 方法及计算方法及计算dSbACCRx52 . 051dSbAVdSbACVCgBmlRx数的供试品溶液中维生素3. 特点特点第三节第三节 维生素维生素C 一、结构与性质一、结构与性质OOHHOO C OHHCH2OH123456 维生素C是一种不饱和的多羟基内酯化合物。内酯OOHHOO C OHHCH2OH1234561. 结构与糖类相似，具糖的性质2. 分

19、子中的二烯醇结构具极强的还原性，极易被氧化，常用作其他制剂的抗氧剂 二烯醇3. 一元有机弱酸，C3OH酸性较强（pKa=4.17）OOHHOO C OHHCH2OH1234564分子中有两个手性碳原子（C4、C5），具旋光性，中、英、美、日四国药典收载的均为L（+）抗坏血酸，其活性最强OOHHOO C OHHCH2OH123456手性碳5具紫外吸收6. 水解（内酯环）水解（内酯环）OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OH二、鉴别二、鉴别 1. 与硝酸银的反应 Ch.P（2005）维生素C+AgNO3 Ag（黑色） 2.

20、与二氯靛酚钠试液的反应 Ch.P（2005） 二氯靛酚的氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色。 维生素C + 二氯靛酚 颜色消失3. 与其它氧化剂反应与其它氧化剂反应4. 糖类的反应糖类的反应5. UV6. IR Ch.P（2005）三、杂质检查三、杂质检查1.溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色2.2. 铁、铜离子的检查铁、铜离子的检查3. 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法三、含量测定三、含量测定 1. 原理 维生素维生素C具有还原性，在具有还原性，在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化，醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化，根据消耗碘滴定液的体积，即可计算根据消耗碘滴定液的体积，即可计算

21、维生素维生素C的含量。反应摩尔比为的含量。反应摩尔比为1 1（一）碘量法维生素维生素C Ch.P（2005）取本品约取本品约0.2g，精密称定，加，精密称定，加新沸过新沸过的冷水的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶解，加使溶解，加淀粉指示液淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并）滴定，至溶液显蓝色并在在30秒种内不褪。每秒种内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于8.806mg的的C6H8O6。2. 讨论（1）在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化作用减慢，因此操作中加入稀醋酸10ml，但仍需立即滴定。 （2

22、）加新沸过的冷水也是为了减少水中溶解氧对测定的影响。 测定时加丙酮2 ml作掩蔽剂，以消除抗氧剂亚硫酸氢钠的干扰。亚硫酸氢钠可和丙酮发生加成反应而被消除。 （3） 维生素C注射液的含量测定注射液，直接滴定法定量：注射液，直接滴定法定量： %100%标示量标示量SVTVF（二）（二）2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法)()(62H无色酚亚胺玫瑰红色二氯靛酚，维生素C（三）（三）HPLC复合维生素制剂复合维生素制剂的含量测定的含量测定 离子对反相离子对反相HPLC法，离子对试剂法，离子对试剂采用甲醇和水都能溶解的樟脑磺酸，采用甲醇和水都能溶解的樟脑磺酸，溶解样品时，加入二巯基丙烷磺酸溶解样品时，

23、加入二巯基丙烷磺酸钠（钠（DMPS）作抗氧剂，保证样品）作抗氧剂，保证样品的稳定。的稳定。第四节第四节 维生素维生素D的分析的分析CH2HCH3HHHOHCH3CH3CH3HCH3维生素维生素D2（骨化醇、麦角骨化醇）（骨化醇、麦角骨化醇）CH2HCH3HHHOHCH3CH3CH3维生素维生素D3（胆骨化醇）（胆骨化醇）1. 溶解性溶解性 脂溶性脂溶性2. 不稳定性不稳定性 含多个双健易被氧化，含多个双健易被氧化， 对酸不稳定对酸不稳定3. 旋光性旋光性 性状项下比旋度性状项下比旋度一、结构与性质一、结构与性质4. 显色反应显色反应5. 紫外吸收特征紫外吸收特征 性状项下吸收系数性状项下吸收系

24、数二、鉴别试验二、鉴别试验（一）显色反应（一）显色反应1. 与醋酐与醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应 Ch.P（2005）维生素维生素D2 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.5mg，加三，加三氯甲烷氯甲烷5ml溶解后，加醋酐溶解后，加醋酐0.3ml与硫与硫酸酸0.1ml，振摇，初显黄色，渐变红色，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。迅即变为紫色，最后成绿色。维生素维生素D3 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.5mg，加三氯，加三氯甲烷甲烷5ml溶解后，加醋酐溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸与硫酸0.1ml振摇，初显黄色，渐变红色，迅振

25、摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。2. 与三氯化锑反应与三氯化锑反应 BP3. 其他显色反应其他显色反应维生素D + 三氯化锑 橙红色粉红色（二）（二）IR Ch.P（2005）维生素维生素D2 Ch.P（2005）【鉴别鉴别】（2）本品的红外光吸收图）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集谱应与对照的图谱（光谱集452图）图）一致。一致。（三）维生素（三）维生素D2、D3的区别反应的区别反应 维生素D 与乙醇+硫酸反应维生素 D2显红色，max在570nm维生素 D3显黄色，max在495nm三、维生素三、维生素D2中麦角甾醇的

26、检查中麦角甾醇的检查灵敏度法灵敏度法维生素维生素D2 Ch.P（2005）【检查检查】麦角甾醇麦角甾醇 取本品取本品10mg，加，加90%乙醇乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷洋地黄皂苷20mg，加，加90%乙醇乙醇2ml，加，加热溶解制成）热溶解制成）2ml，混合，放置，混合，放置18小时，小时，不得发生浑浊或沉淀。不得发生浑浊或沉淀。四、含量测定四、含量测定HPLC 药典附录药典附录维生素维生素D测定法测定法 共有三法共有三法第一法第一法 适用于无维生素适用于无维生素A醇及其它醇及其它杂质干扰时杂质干扰时 正相色谱、内标法正相色谱、内标法1. 色谱

27、条件色谱条件 色谱柱色谱柱 硅胶硅胶 流动相流动相 正己烷正己烷 正戊醇（正戊醇（997:3） 内内 标标 邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯 2. 系统适应性试验系统适应性试验维生素维生素D3对照品对照品维生素维生素D3前维生素前维生素D3反式维生素反式维生素D3速甾醇速甾醇D3光照光照目的目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰，获得待测成分及各种干扰成分色谱峰， 检查分离度是否符合规定检查分离度是否符合规定3. 计算校正因子（对照品为维生素计算校正因子（对照品为维生素D3）1f进进样样对对照照内内标标（1）维生素）维生素D校正因子（校正因子（f1）rrssmAmAf/1 （2）前维生素）前维生素D折算成维生素折算成维生素D的校的校正因子（正因子（f2）srrsrsmAAmfmAf 2112进样冷至室温二叔丁基对甲酚，对照品内标物、，排空气、密塞通hN5 . 1902624. 计算含量计算含量维生素维生素D及前维生素及前维生素D折算成维折算成维生素生素D的总量（的总量（mi）ssiiiAmAfAfm/)(2211 单位单位 = 0.025 g 第二法第二法 适用于有维生素适用于有维生素A醇及其它杂醇及其它杂 质干扰时质干扰时分离净化分离净化皂化提取皂化提取反相色谱系统反相色谱系统按第一法按第一法第三法第三法 适用于按第二法处理后前维适用于按