微生物检验 第十章 G+需氧杆菌

1、12345二、二、 微生物特性微生物特性 革兰染色 10006培养特性：需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温度3035普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、 无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边 缘呈卷发状789 菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热、耐腐败，特异性不高。 荚膜多肽抗原：与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细菌生长和扩散。荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义 芽胞抗原：血清学诊断价值 炭疽毒素：保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分。单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性具有抗吞噬和免疫原性。 1011-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化 剂较敏感，常用以

2、下方法杀菌： 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感12三、微生物学检验三、微生物学检验1314无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振 荡1015min 、静置10min，取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤 剂振荡1015min ，离心取沉淀物增菌和分离培养 15生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等

3、血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验16痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌374h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色 G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告171819青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h生长受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片青霉素1 U片纸片贴于平板，3712h，低倍镜下观察，可见纸片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青霉素浓度低,菌

4、体细胞壁受抑而成为串珠。20 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验： 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板， 10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接种21植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断22232425培养特性：培养特性：需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度3035普通琼脂平板：菌落较大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽2627生化反应：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精，产酸不产气能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂 酶（+）

5、多次传代后生化特性常可改变 28抵抗力：耐热，肉汤中细菌需10020min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药293031检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种 普通琼脂平板、BAP 、卵黄平板3718-24h纯培养动物试验（肠毒素测定）生化反应血清凝集（分型）报告结果直接涂片染色镜检32检验方法：直接镜检分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测33343536 2025形成周鞭毛

6、，有动力；37时鞭毛 很少或无 细菌接种半固体培养基，置室温，由于动力 强，细菌自穿刺线向四周弥漫生长，在离琼 脂表面数毫米处出现一个倒伞形的生长，是 本菌特征之一37383940414243鉴定：形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出 鉴定 可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多价抗 血清做玻片凝集试验进行鉴定与其他G+菌鉴别44 触酶 动力 马尿酸盐水解产单核李斯 + + -B群链球菌 - - +本菌有耐碱耐盐的特点，可用?试验与 肠球菌鉴别4546红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌 革兰染色革兰染色 100047培养特性:厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生长，最适温度30-35

7、。在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛BAP：3524h可形成两种菌落光滑型：菌落细小、透明突起、发亮、边缘整 齐、质软易于悬于液体中，毒力较强粗糙型：菌落较大，颗粒状、扁平、边缘不齐 可呈卷发状，无毒力48BAP上新分离的菌株有轻微的溶血，培养时间延长溶血现象明显，传代后溶血特性常消失含碲盐的培养基黑色菌落 49 葡萄糖肉汤：培养24h后，呈轻微混 浊，不 形成菌膜，室温静置23天后，管底有少量 灰色沉淀；粗糙型沉淀较多。 S-R变异同时毒力、抗原性也发生变异，但 遗传学上不稳定，常出现互变。 5051鉴定依据： G+、H2S +、无动力、触酶 -、吲哚 -、VP -与产单核细胞李斯特菌鉴别（表1

8、1-2）新霉素敏感试验：红斑丹毒丝菌R 产单核李斯特菌S 动物毒力试验：对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致病性，0.2ml的24天培养物注入小鼠腹腔，4-5天后，败血症而死，心血培养（+）52属于加特纳菌属属于加特纳菌属,此菌属只有本菌一个种此菌属只有本菌一个种535455生化反应：氧化酶 -、触酶 -、尿素酶 -发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等产酸不产气水解马尿酸钠和淀粉，吲哚 -、明胶液化 -、甘露醇分解 -抵抗力：对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素、甲硝哒唑敏感，对萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐药。5657涂片染色镜检：观察线索细胞，了解阴道菌群状况，常见大量小的G-和染色

9、不定的杆菌和球杆菌，而无大的G+杆菌（乳酸杆菌）pH测定：pH4.5，提示细菌性阴道病胺试验：滴加10%KOH即发出鱼腥嗅为“+”58分离培养： 5%人血琼脂平板、35、5%CO2环境48h鉴定： 菌落、涂片染色、氧化酶 -、触酶 -、 糖发酵及其他生化反应 59分泌物（阴道、宫颈）新鲜湿片（找线索细胞）涂片染色镜检分离培养（5%人血平板）溶血菌落纯培养（5%人血平板）触酶（-）氧化酶（-）GV的主要鉴定试验初步报告最后报告 棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌，菌体形态特征是在其一端或两端常呈棒状膨大，故名，归属放线菌科。 棒状杆菌属种类繁多，主要有：白喉棒状杆菌（C.diphtheriae）假

10、白喉棒状杆菌（C.pseudodiphtheriticum）干燥棒状杆菌（C.xerosis）化脓棒状杆菌（C.pyogenes）溃疡棒状杆菌（C.ulcerans）假结核棒状杆菌（C.pseudotuberculosis）溶血棒状杆菌（C.haemolyticum）J-K群棒状杆菌（C.jeikeium-CDC group JK）（二）索状因子（二）索状因子细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化（三）K抗原-细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白-抗吞噬-有利于细菌在黏膜表面的定植免疫性：白喉棒状杆菌异染颗粒白喉棒状杆菌异染颗粒 1000 BAP中菌落中菌落BAP：菌落灰白色、

11、光滑型、 直径12mm、有狭窄 溶血环（轻型）多次传代后菌体变为球 型亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基黑色菌落鉴别依据不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色 菌落根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为： 重型、中间型、轻型白喉棒状杆菌在亚碲酸钾BAP中菌落液体培养基：生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同 2、标本直接检查，初步报告 3、分离培养 4、鉴定 5、毒力试验琼脂平板毒力试验-Elek平板对流免疫电泳鉴定流程防治原则：-人工主动免疫白喉类毒素DPT混合疫苗：白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素-人工被动免疫白喉抗毒素+白喉类毒素-治疗：抗毒素+抗生素早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在与细

12、胞结合以前被抗毒素中和 类白喉棒状杆菌类白喉棒状杆菌（二）结膜干燥棒状杆菌（二）结膜干燥棒状杆菌（C. xerosis）（三）化脓棒状杆菌（三）化脓棒状杆菌（C. pyogenes）（四）溃疡棒状杆菌（四）溃疡棒状杆菌(C. ulcerans)（五）假结核棒状杆菌（五）假结核棒状杆菌（C. pseudotuberculosis）（六）溶血棒状杆菌（六）溶血棒状杆菌（C. haemolyticum）（七）杰克群棒状杆菌（七）杰克群棒状杆菌（C. jeikeium-CDC group JK）（一）假白喉棒状杆菌（一）假白喉棒状杆菌（C. pseudodiphtheriticum）-大多不产生外毒素-菌体较粗短，着色较均匀，很少有异染颗粒-大多寄生在