厦门大学有机化学实验 实验十一亚甲基蓝与荧光黄的分离ppt课件

1、实验十一实验十一 柱色谱柱色谱 亚甲基蓝与荧光黄的分亚甲基蓝与荧光黄的分离离厦门大学化学化工学院厦门大学化学化工学院基础化学实验二基础化学实验二1 1、掌握色谱法的原理及其应用、掌握色谱法的原理及其应用2 2、掌握柱色谱的实验操作技能、掌握柱色谱的实验操作技能一一 实验目的实验目的二二 实验原理实验原理 色谱法亦称色层法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机色谱法亦称色层法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能即分配的不同，或其他亲和作用性能的差

2、异，附或溶解性能即分配的不同，或其他亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。从而将各组分分开。叶绿素的石油叶绿素的石油醚溶液醚溶液石油醚石油醚1903年年 俄国植物学家俄国植物学家 M.G. 茨维特茨维特 CaCO3 色谱法最初源色谱法最初源于对有色物质的分于对有色物质的分离，后来随着各种离，后来随着各种显色、鉴定技术的显色、鉴定技术的发展，其应用范围发展，其应用范围早已扩展到无色物早已扩展到无色物质。质。二二 实验原理实验原理气相色谱气相色谱液相色谱液相色谱柱色谱柱色谱薄层色谱薄层色谱固

3、定相：液体、固体固定相：液体、固体纸色谱纸色谱流动相：气体、液体、超临界流体流动相：气体、液体、超临界流体色谱分离法的分类色谱分离法的分类（按操作条件的不同）（按操作条件的不同）吸附色谱吸附色谱排阻色谱排阻色谱（凝胶色谱）（凝胶色谱）分配色谱分配色谱离子交换色谱离子交换色谱吸附能力的差异吸附能力的差异分子尺寸的大小不同分子尺寸的大小不同两相中分配系数的不同两相中分配系数的不同亲和力的差异亲和力的差异Adsorption chromatographyExclusion chromatography Gel-permeation chromatographyPartition chromatogr

4、aphyIon-exchange chromatography亲和色谱亲和色谱特异性亲和力特异性亲和力Affinity chromatography 色谱分离法的分类（按组分在固定相中的作用原理不同） 色谱法具有样品用量少、分离效能好、分析速度快、色谱法具有样品用量少、分离效能好、分析速度快、检测灵敏度高、适用范围广和操作简便等特点。在有机化检测灵敏度高、适用范围广和操作简便等特点。在有机化学中的应用主要包括以下几个方面：学中的应用主要包括以下几个方面：1 1、分离混合物、分离混合物2 2、精致提纯化合物、精致提纯化合物3 3、利用比移值、利用比移值RfRf鉴定化合物鉴定化合物4 4、跟踪反应

5、进程、跟踪反应进程色谱法的应用色谱法的应用 由于不同化合物吸附能由于不同化合物吸附能力不同，因而在洗脱时以不力不同，因而在洗脱时以不同的速度沿柱向下流动，吸同的速度沿柱向下流动，吸附能力弱的组分随溶剂首先附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化别收集，从而达到分离纯化的目的。的目的。柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱1 1 吸附剂吸附剂 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。碳酸钙，活性炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或选择

6、吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应。展开剂发生化学反应。 吸附能力与以下几点有关：吸附能力与以下几点有关： （1 1吸附剂颗粒大小吸附剂颗粒大小100100150150目）目） （2 2吸附剂含水量吸附剂含水量6 61010，IIIIIIIIII级）级）柱色谱柱色谱2 2 溶剂溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱梯度

7、洗脱）。同化合物依次洗脱梯度洗脱）。石油醚石油醚 环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳 甲苯甲苯 苯苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯氯仿仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水 乙酸乙酸常用洗脱剂的极性：常用洗脱剂的极性：1 1、取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注、取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注 意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂。意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂。2 2、将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量、将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量70%70%乙醇乙醇 溶液，打开活塞，赶走气泡！溶液，打开活塞，赶走气泡

8、！3 3、再向柱中倒入适量、再向柱中倒入适量70%70%乙醇溶液，打开活塞，控制滴速乙醇溶液，打开活塞，控制滴速 为为1 1滴秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入滴秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入5g Al2O35g Al2O3，使其逐渐沉入底部。使其逐渐沉入底部。三三 实验步骤及注意事项实验步骤及注意事项4 4、加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小滤、加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小滤纸。纸。5 5、当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移、当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管加入液管加入1mL1mL亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混

9、合液，尽量避免待分亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混合液，尽量避免待分离混合液粘附在柱的内壁上。离混合液粘附在柱的内壁上。 6 6、打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二、打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入通活塞，向柱内加入70%70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。乙醇，打开二通活塞进行洗脱。三、实验步骤及注意事项三、实验步骤及注意事项7 7、用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。【洗脱时切勿使溶剂、用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。【洗脱时切勿使溶剂流干】流干】8 8、当蓝色溶液收集完后，等柱内的、当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%70%乙醇溶液恰好流到滤纸乙醇溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适量面时，关闭二通活塞，加入适量2%2%氨水作为洗脱剂。打开二通氨水作为洗脱剂。打开二通活塞收集黄绿色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。活塞收集黄绿色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。三、实验步骤及注意事项三、实验步骤及注意事项三三 实验步骤及注意事项实验步骤及注意事项9 9、用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体、用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体积积 后，倒入指定的回收瓶中。后，倒入指定的回收瓶中。1010