第十八章高效液相色谱法

1、第十八章高效液相色谱法15.外标法测定黄芩颗粒剂中黄芩苷含量：色谱柱为Zirchrom C8 柱（20cmX4.6mm, 5un）；流动相为乙腈-甲醇-水（含 0.5%三乙胺，磷酸调 pH3.0）（ 28: 18: 54） ;以黄芩苷对照品配成浓度范围为10.3144.2ug/ml 的对照品溶液。进样，测得黄芩苷峰面积，以峰面积和对照品浓度求得回归方程为：A=1.168X105c-1.574X103, r=0.9998.精密称取黄芩颗粒 0.1255g ,置于 50ml 量瓶中，用 70%甲醇溶解 并定容至刻度，摇匀，精密量取1ml 于 10ml 量瓶中，30%甲醇定容到刻度，摇匀即得供试品溶

2、液。平行测定供试品溶液和对照品溶液（61.8ug/ml ），得峰面积分别为 4250701，5997670.16.校正因子法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量：ODS色谱柱；甲醇-水（60:40）流动相；检测器UV280nm对硝基甲苯为内标物。（1） 校正因子的测定：取对硝基甲苯（内标物）、炔诺酮和炔雌醇对照品适量，用甲醇制成10ml溶液，进样10ul，记录色谱图。重复三次。测得含0.0733mg/ml内标物、0.600mg/ml炔诺酮和0.035mg/ml炔雌醇的对照品溶液平均峰面积列于表18-6。炔诺酮炔雌醇内标物对照品溶液1.981X10651.043X1056.587X10供试品溶液2.4

3、42X1061.387X1056.841X105w%50c样10“0.1255100% = 17.4%0.035況10心.043 05) =3020.0733 10/(6.587 105)解:c样/10425070161.8 - 5997670（2） 试样测定：取本品20片，精密称定，求出平均片重（60.3mg/片）。研细后称取732.8mg（约 相当于炔诺酮7.2mg），用甲醇配制成10ml供试品溶液（含内标物0.0733mg/ml）。测得峰面积列于表18-6。表18-6复方炔诺酮片中各成分及内标物平均峰面积（uvs）解:m醇/ A醇f卄而 H每片含炔雌醇的量：0 44960.3 = (0.

4、0369mg/片)732.817.测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量，称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品各 0.2000g 配成混合溶液。测得峰面积分别为3.60, 3.43 和 4.04cm2称取0.2400g 内标物和试样 0.8560g 同法配制成溶液后，在相同色谱条件下测得峰面积为 4.16, 3.71 和 4.54cm2。计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。18.计算在反相色谱中甲醇一乙腈一水(60:10:30)的强度因子。如果改用四氢呋喃一甲醇一水,水的含量不变，为了保持相同的洗脱强度，甲醇的比例是多少？解：S混=S甲甲+S乙乙+S水水=3.0 0.60+3.2 0.10+0 0.30 = 2.12设改换溶剂后，甲醇的比例为x,则x = 0.687 = 68.7%/ 419 .用 15cm 长的 ODS 柱分离两个组分。柱效n=2.84X10 m ;测得t0=1.31min ;组分的tR1=4.10mi n;tR2=4.45min。(1)求 k、k?、a、R值。若增加柱长至 30cm,分离度R可否达 1.5?解:&遵=逬牛3由用二，则10!5R2L2R20.30试样含炔雌醇的量:A醇m醇=f醇ms -As= 3.02