实验二DNA与RNA的化学显色反应ppt课件

1、实验三实验三核酸核酸(DNA和和RNA)的细胞核的细胞核定位察看定位察看 p220作业：作业：1、阐明、阐明DNA和和RNA的亚细胞定位在哪里的亚细胞定位在哪里?为什么？为什么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用实验原理实验原理Unna染色法染色法 主要成分：甲基绿主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料碱性染派洛宁混合染料碱性染料料 原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是亲和力，但是DNA和和 RNA对甲基绿对甲基绿-派洛宁派洛宁混合染料的

2、亲和力不同，而使这两种染料对混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成被甲基绿染成绿色，绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来细胞中两种核酸分布显示出来“样品的固定样品的固定 王金发王金发 书书 p37目的：目的： 迅速杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在迅速杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处置、切片时不被破坏。后面的处置、切片时不被破坏。 固定使得细胞大分子交联而坚持在一定位置上，固定使得细胞大分子交联而坚持在一定位置上，不至于在后面的染色等处置过程中移位或丧失而产不至

3、于在后面的染色等处置过程中移位或丧失而产生人工假象。生人工假象。 常用的固定液：常用的固定液：(醛类：甲醛、戊二醛醛类：甲醛、戊二醛)Unna染色法实验步骤撕取洋葱内表皮撕取洋葱内表皮 小离心管小离心管CarnoyCarnoy固定剂固定剂 15 min 15 min95%95%酒精复水酒精复水5 min5 min 70%70%酒精复水酒精复水5 min5 min H2O 5min H2O 5min 小离心管小离心管 外表皿中实验组外表皿中实验组 对照组对照组 5% 5% 三氯乙酸三氯乙酸TCATCA 90 90保温保温,15min,15min H2O 5min H2O 5min Unna Un

4、na 染液染液 20min( 20min(室温室温) ) H2O H2O漂洗几秒后漂洗几秒后 丙酮丙酮 分色分色6-10Sec6-10Sec H2O H2O洗片刻洗片刻 水压片分别镜检察看水压片分别镜检察看Unna 法法背景知识背景知识n核酸是一种线形多聚核苷酸，它的根本单位是核苷核酸是一种线形多聚核苷酸，它的根本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：酸。细胞核内存在有两种核酸：DNA和和RNA，它们，它们具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷酸组成，可表示如下酸组成，可表示如下:n 磷酸磷酸 核糖核糖RNAn核酸核酸 核苷酸核苷酸 戊糖戊糖n

5、 脱氧核糖脱氧核糖DNAn 核苷核苷 A、G、C、U (RNA)n 碱基嘌呤碱基嘌呤/嘧啶嘧啶n A、G、C、TDNAnDNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋构造。螺旋构造。nRNA是单链线形，主要有三种类型是单链线形，主要有三种类型:n 核糖体核糖体RNA (rRNA)n 转运转运RNAtRNA)n 信使信使RNAmRNA)n rRNA含量大，占细胞含量大，占细胞RNA总量的总量的80左左右，是核糖体的重要组成部分，而右，是核糖体的重要组成部分，而rRNA的的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进展的。仁中进

6、展的。ntRNA约占全部约占全部RNA的的15，它在蛋白质，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。nmRNA的含量最少，只占的含量最少，只占5左右，它是以左右，它是以DNA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。板。 rRNA基因的转录基因的转录 快速生长的哺乳动物细胞中快速生长的哺乳动物细胞中(培育的培育的Hela细胞细胞), 转录生成的转录生成的RNA总量的总量的80%-rRNA; 15%-tRNA; 编码蛋白质的编码蛋白质的mRNA量少量少 处于生长中的高等真核细胞普通需处于生长中的高等真核细胞普通需107核糖体

7、以确保蛋白质的合成核糖体以确保蛋白质的合成, so真核细胞中真核细胞中有关编码核糖体基因有关编码核糖体基因(ribosomal gene)会在会在染色体的核仁区以染色体的核仁区以100-5000个反复个反复copy串串联成中度反复序列联成中度反复序列, 成簇分布在少数特定染成簇分布在少数特定染色体的核仁区。色体的核仁区。The general structure of ribosomes in prokaryotes and eukaryotesrNTs: number of ribonucleotides The macromolecular composition of a mammali

8、an ribosomeStructure of T. thermophilus 70S ribosome as determined by x-ray crystallographySmall ribosomal proteins, dark gray;Large ribosomal proteins, light gray Light micrograph of an isolated nucleus from a Xenopus ootyte stained to reveal the hundreds of nucleoli.核仁核仁纤维中心纤维中心(FC)：位于：位于核仁中央，低电子密度、核仁中央，低电子密度、染色浅，染色浅， rRNA基因的基因的储存位点。储存位点。稠密区稠密区(DFC)：电子：电子密度最高，由致密的纤密度最高，由致密的纤维构成，普通见不到颗维构成，普通见不到颗粒；含正在转录的粒；含正在转录的RNA分子。分子。颗粒区颗粒区(GC)：位于周边，直径为位于周边，直径为15-20nm的核糖核蛋白颗的核糖核蛋白颗粒粒(RNP)-代表已合成的代表已合成的核糖体亚单位前体颗粒。核糖体亚单位前体颗粒。A section of part of a nucleus with a nucleolus 核仁核仁 (nucleolus) 重要功能重要功能 rRNA合成加工合