过氧化氢酶活性的测定ppt课件

1、 过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶活性的测定 碘量法碘量法实实 验验 三三学时：学时：3 3生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是去除体内自在基：去除体内自在基：POD：过氧化物酶：过氧化物酶SOD：超氧化物歧化酶：超氧化物歧化酶CAT：过氧化氢酶：过氧化氢酶 1、掌握碘量法测定过氧化、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；氢酶活性的原理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。、了解过氧化氢酶的作用。 一、实验目的：一、实验目的： 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2H2O2发生累积。发生累

2、积。H2O2H2O2可进一步生成氢氧自在基可进一步生成氢氧自在基OHOH。 氢氧自在基氢氧自在基OHOH是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非常间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜蒙受损害，加速细高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜蒙受损害，加速细胞的衰老和解体。胞的衰老和解体。 过氧化氢酶过氧化氢酶(catalase(catalase；CAT)CAT)可以去除可以去除H2O2H2O2、分解氢氧自在、分解氢氧自在基，维护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因

3、此基，维护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CATCAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性亲密相关。物的抗逆性亲密相关。二、实验原理二、实验原理: CAT活性大小以一定时间内分解的活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：量来表示： 在一定条件下，在一定条件下，CAT能把能把H2O2分解为分解为H2O和和O2。当当CAT与与H2O2反响一定时间反响一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解后，再用碘量法测定未分解的的H2O2，以钼酸铵作催化剂，以钼酸铵作催化剂，H2O2与与KI反响，放出游离碘，反响，放出游离碘，然后

4、用硫代硫酸钠滴定碘，反响式为：然后用硫代硫酸钠滴定碘，反响式为： H2O2余余+2KI+H2SO4-I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 -2NaI+Na2S4O6连二硫酸钠连二硫酸钠 用硫代硫酸钠分别滴定空白液用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的可求出总的H2O2量量)和反和反响液响液(可求出未分解的可求出未分解的H2O2量量)，再根据二者滴定值之差求出，再根据二者滴定值之差求出分解的分解的H2O2量。量。二、实验原理二、实验原理:1、实验资料：三叶草、实验资料：三叶草2、仪器：、仪器： (1) 滴定管滴定管 (2)研钵研钵 (3) 容量瓶容量瓶 (4)移液管移液管 (5)

5、三角瓶三角瓶(100ml) 3、试剂：、试剂： 10.05M H2O2 20.2M Na2S2O3 31.8M H2SO4 41.5%淀粉溶液淀粉溶液 510%NH4)6Mo7O24 620% KI 7CaCO3-，石英砂，石英砂 三、实验资料、仪器和试剂：三、实验资料、仪器和试剂：1 1、酶液提取：、酶液提取： 称取称取0.5g0.5g三叶草，加少量石英砂，三叶草，加少量石英砂，CaCO3CaCO3，2ml2ml水，研成匀浆，水，研成匀浆，移入移入50ml50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。 2 2、酶促反响：、酶促反响： 1 1取锥形瓶取

6、锥形瓶2 2个，编号个，编号A A，B B，各参与，各参与10ml10ml酶液，之后立刻向酶液，之后立刻向A A瓶瓶中参与中参与1.8mol/L H2SO45ml1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。，终止酶活性，作空白滴定。2 2向向A A，B B两瓶各加两瓶各加H2O2 5mlH2O2 5ml，摇匀，在参与，摇匀，在参与B B瓶那一刻起，记录瓶那一刻起，记录 时间，时间，5 5分钟后迅速向分钟后迅速向B B瓶中参与瓶中参与1.8mol/LH2SO45ml1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。，终止酶活性。3 3、滴定：、滴定： 向向A A，B B两瓶各加两瓶各

7、加1ml 20% KI1ml 20% KI和和3 3滴滴NH4NH46Mo7O246Mo7O24，摇匀后迅速参与摇匀后迅速参与5 5滴滴1.5%1.5%淀粉溶液，用淀粉溶液，用Na2S2O3Na2S2O3进展滴定至蓝色恰进展滴定至蓝色恰好消逝，记录两次耗费好消逝，记录两次耗费Na2S2O3Na2S2O3的体积的体积VA(VA(空白空白) )，VB(VB(反响液反响液) )。四、实验步骤：四、实验步骤： 酶活性测定酶活性测定管管号号酶酶液液(ml)1.8M 1.8M H H2 2SOSO4 4(ml)(ml)0.05M0.05MH H2 2O O2 2保保温温1.8M1.8MH H2 2SOSO

8、4 4(ml)(ml)20% 20% KIKI溶溶液液(ml)(ml)钼酸钼酸铵溶铵溶液液( (滴滴) )淀粉淀粉溶液溶液( (滴滴) )0.2M0.2MNaNa2 2S S2 2O O3 3溶液的溶液的滴定量滴定量A空空白白10555分分钟钟-135V VA(A(空白空白) )= =B反反应应10-55135V VB(B(反应反应液液) )= =1 1、被分解的、被分解的H2O2H2O2量量mgmg = =空白滴定值空白滴定值- -样品滴定值样品滴定值Na2S2O3Na2S2O3摩尔浓度摩尔浓度17172 2、CATCAT活性活性mg.g-1.min-1mg.g-1.min-1= = 被分解的被分解的H2O2H2O2