HPLC法测定清火栀麦片中穿心莲内酯的含量(精)

1、HPLC法测定清火梔麦片中穿心莲内酯的含量摘 要 【目的】 建立清火栀麦片中穿心莲内酯的含量测定方法。 【方 法】 HPLC法，以甲醇一水（50： 50, pH=4.5）为流动相，检测波长为 225nm。【结果】加样回收率为 98.4%, RSD=2.03%【结论】该法测定结果准确，精密 度、重现性均好，可用于该产品的质量控制。关键词 清火栀麦片 穿心莲内酯 HPLC 法中分类号 R284清火栀麦片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册1。本品由穿心莲、栀子、麦冬组成，具有清火，解毒，凉血，消肿之功效，用于咽喉 肿痛，急性扁桃腺炎，头痛等。穿心莲内酯为穿心莲的主要有效成分之一，本 文以 HP

2、LC 法测定其含量，报告如下。1 仪器与试药1.1仪器 LC-10A 高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10A 紫外检测器，威玛 通用多媒体色谱工作站，赛多利斯 BP211D 型十万分之一分析天平。1.2 试药 穿心莲内酯对照品，购自中国药品生物制品检定所（含量测定用）。样品：清 火栀麦片为本所抽验样品，分别为广西 A 药厂（990181）； B 药厂（991104012）； C 药厂（991106057）。试剂：甲醇为优级纯；乙醇、氯仿、 盐酸等试剂均为分析纯；水为离子交换水。2 实验方法与结果2.1色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇一水（50 : 50,

3、用盐酸调至 pH=4.5）；检测波长为 225nm；流速 0.8ml/min ;理论塔板数按穿心莲内酯峰计不低于1000,分离度大于 1.5，色谱见 1。1 清火栀麦片及穿心莲内酯对照品 HPLC 谱2.2标准曲线的绘制 精密称取穿心莲内酯 10.13mg,置 25ml 量瓶中，用甲 醇稀释至刻度，溶解并摇匀，即得穿心莲内酯对照品溶液。取对照品溶液适量于 12000r/min 下离心 10min,精密吸取上清液 4 卩 I、8 卩 I、12 卩 I、16 卩 I、20 卩 I 注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并以峰面积为纵坐标，进样量为横 坐标，绘制标准曲线， 结果得一不通过原点的直线。 回归

4、方程为：y=2132488.908x+2318.38,r=0.9997 。结果表明穿心莲内酯进样量在 0.324 1.621mg 之间呈良好的线性关系。2.3供试品溶液的制备 取样品 10 片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约 0.5g ），置 100ml 三角烧瓶中，加乙醇 25ml,超声处理 60min,滤 过，滤液加水使含醇量约为 40%用氯仿萃取 4 次（20ml，15ml，15ml， 10ml），合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，滤过，定容至5ml 的量瓶中，摇匀，即为供试品溶液。用前，取适量，于12000r/min 下离心 10min,取上清液进样分析。2.4精密度试

5、验 取同一穿心莲内酯对照品溶液，重复测定 5 次，测得峰面积 分别为：1832994, 1880949, 1886427，1823028, 1889505, RSD 为 1.71%。说 明精密度良好。2.5稳定性试验 取同一供试品溶液， 每隔 2 小时测定一次峰面积， 结果得： 1778584,1696461, 1744056, 1713420, RSD 为 2.1%,表明供试品溶液在 6 小时 内稳定。2.6重复性试验取同一批样品 5 份，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，测得每片含量（mg 分别为：0.201,0.218, 0.210, 0.207, 0.211, RSD为 2.96%,

6、表明重现性良好。2.7样品测定 精密吸取供试品溶液 10 卩 I 及对照品溶液 8 卩 I 和 16 卩 I，注入高效液相色谱仪，依法测定，按二点法计算含量。结果见表1：表 1 样品含量测定结果（n=3）药厂批号每片平均含量（mgRSD( %A 药厂99011810.2090.99B 药厂 9911040121.2172.05C 药厂 9911060571.6262.132.8回收率试验 精密称取已知含量的同一样品一定量 5 份，分别加入穿心莲 内酯对照品 （精密称取对照品 4.45mg,配制成 0.089mg/ml， 精密加入 2ml,即 加入 0.178mg） ,按拟定方法配成 5ml，进

7、样 10 卩 I，测定峰面积，计算回收 率，结果见表 2：表 2 回收率试验结果1-1样品量(mg/5ml)加入量(mg/5ml)测得量(mg/5ml)回收率（%）平均回收率（%） R：D10.1840.36199.420.1850.363100.030.1870.1780.35795.598.42.034J0.1820.360100.0510.1890.36297.23 讨论3.1流动相调为弱酸性后，分离效果较好。是否由于穿心莲为内酯类化合物， 遇酸后，内酯环闭合而影响其效果，还有待进一步研究。4.2提取方法的选择：穿心莲内酯的提取，文献报道有用索氏提取器，先加石油醚回流至无色，除去部分杂质后，再用乙醇回流34 小时提取；另有用乙醇冷浸，放置过夜后，再超声处理一定时间，滤过即得2。作者认为第一种方法较为繁琐，第二种方法则对色谱柱不利。而本法简单，快捷，且能充分提取出 穿心莲内酯，同时又能除去部分杂质，对色谱柱起到保护作用。4.3实验结果表明，不同厂家清火栀麦片中穿心莲内酯的含量相差甚远，究其 原因与原料的来源、加工及不同生产厂家的质量把关等有关，但最为重要的原 因是至今未有控制其含量的统一标准。因此，建议制定以穿心莲内酯作为清火 栀麦片中穿心莲含量测定的标准，以利于更好地