HPLC校验方案..

1、1西安益尔渭之阳制药有限公司高效液相色谱仪校验报告(Xi n Yier Weizhiyang Pharmaceutical CO.,LTD HPLC Calibration Protocol)报口准备：时间:Prepared by:Date:报告复核：时间:Reviewed by:Date:报告许可：时间:Approved by:Date:二零零五年三月高效液相色谱仪校验报告Detail HPLC Calibratio n protocol1. 适用范围该方案仅针对于本公司新购，使用中以及大修后的具有紫外-可见波长检测器 的高效液相色谱仪(HPLC)TIER2的检定。2. 检定结果处理和检定周

2、期按此要求检定合格的仪器为合格仪器，反之，为不合格。仪器的检定周期为 1 年。3. 校验依据中华人民共和国国家计量检定规程JJG 705-2002液相色谱仪4. 液相色谱检定的主要技术指标检定项目标准外观参见校验报告泵流量设定误差v5%流量稳定性误差v3%梯度准确度误差3%柱温箱温度设定误差2 七控温稳定性误差VC检测器基线漂移(AU/h)5X10-3基线噪声(AU)5X10-4最小检测浓度(g/ml)1X10-7波长示值误差鱼 2nm波长示值重复性鱼 2nm线性范围羽 03定性、定量重复性定性测量重复性误差1.5%定量测量重复性误差2.0%手动进样器相对准确度2.0%35.校验内容5-1 检

3、定环境要求结果温度15 C 30 C相对湿度20% 85%5-2 受检仪器组成液相色谱型号制造商手动进样器型号序列号泵型号序列号柱温箱型号序列号检测器型号序列号5-3 检定设备仪器有效期备注秒表设备编号：确认机构：证书编号：分析天平电子天平设备编号：确认机构：证书编号：数字温度计设备编号：确认机构： 证书编号：5-4 标准物质名称编号有效期萘-甲醇溶液紫外分光光度计溶液标准物质5 校验要求及结果5-5-1 外观的检定仪器型号日期检定员复核员检杳项目检查结果仪器上是否有清晰的名称4仪器上是否有清晰的型号仪器的旋钮，按键，开关是否正常仪器输液的接头是否紧密，牢固仪器在规定的压力范围有无泄漏结论5-

4、5-2 输液系统的检定5-5-2-1 泵流量设定值误差和流量稳定性误差的检定以 100%甲醇为流动相，流量为 1ml/min 该流速，待流速稳定后，在流动相排 出口用事先清洗校验过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地记录 规定体积的相应收集时间。计算泵流量设定值误差 SS和流量稳定性误差的检定 SR。结果按下式计算：SS= （ FM-FS）/FSX100%SR=（FMAX-FMIN）/F平均X100%FM= V/t式中：SS- 流量设定值误差（%）FS- 流量设定值（ml/min）V 收集流动相的体积（ml）t-收集流动相的时间（min）SR流量稳定性误差（%）FMAX-同一组测量中流量

5、最大值（ml/min ）FMIN- 同一组测量中流量最小值（ml/mi nF平均-同一组测量值的算术平均值（ml/min）泵流量设定值误差和流量稳定性误差测量要求及标准流量设疋值（ml/min）0.51.03.0测量次数333收集流动相时间（min）864允许误差SS5%3%2%SR3%2%2%5泵流量设定值误差及流量稳定性误差的检定记录仪器型号日期检定员复核员泵流量设定值误差及流量稳定性误差接受标准：泵流量设定值的误差 SS:(2%“ 5%)流量稳定性误差 SR:V (2%“ 3%)流动相甲醇流动相密度P0.791 g/cm3FSFS= 0.5 ml/minFS= 1.0 ml/minF3=

6、 3.0 ml/mintW容量瓶W容量瓶+w流动相V(ml)FmFmeanSSSR结论5-5-2-2 梯度准确度的检定设置溶剂梯度程序。A 溶液为水，B 溶液为含 0.1%丙酮的水溶液。A 从 100%变 为 0。先以 A 溶液走基线，(流动相不通过色谱柱)，基线平稳后执行梯度程序， 画出梯度变化曲线，并读出在每个测量点的信号值。重复测量两次，求平均值。从 B 溶液的含量及相对应的信号值 Lmi和 Lm计算梯度准确度 Gci。Gci最大值为 仪器梯度准确度误差。计算公式如下：Gci= (Lmi -_m) / LmX 100%式中：Gci=第 i 段梯度准确度；Lmi=第 i 段输出信号或记录仪

7、的读数；Lm=各段输出信号或记录仪读数总均值6梯度准确度的检定记录仪器型号日期检定员复核员梯度准确度误差接受标准：梯度准确度误差Gci: 3%流动相 A水|流动相 B0.1%丙酮水溶液F=3.0ml/minB 溶液的变化范围0%20%40%60%80%100%Time记录仪读数12LmLm(maen)Gci(%)结论5-5-3 柱温箱温度控制系统的检定5-5-3-1柱温箱温度设定值误差 Ts与控温稳定性误差 TC选择最低使用温度(20 C)和最高使用温度(60 C)进行检定，待指示温度稳定后， 每隔 10 分钟记录一次，共计 7 次，求出算术平均值。设定值与平均值之差为 UTs, 7 次测量值

8、中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。柱温箱温度控制系统的检定记录仪器型号日期检定员复核员柱温箱温度控制系统的接受标准：柱温箱温度设定值误差 AT: 29 控温稳定性误差 TC : VCTS1CC)20Tm1No1234567平均读数T2TC1TS260Tm2No1234567平均读数T2TC2结论5-5-4 检测器5-5-4-1 基线漂移和基线噪声检定使用如下色谱条件：色谱柱：Ci8,检测波长为 254nm，流动相为 100%7甲醇，流速为 1.0ml/min。待基线稳定后，记录基线 30 分钟，计算基8线漂移和噪声。基线噪声及基线漂移检定记录仪器型号日期检定员复核员基线噪声及基线漂移接

9、受标准： 基线噪声：5X10-4（ AU ）基线漂移：5X10-3（ AU/h ）色谱柱流动相流速检测波长基线噪声（AU ）基线漂移测定值结论5-5-4-2 最小检测浓度在测定仪器的基线噪声的条件下，注射 20ul 浓度为 1X10-7g/ml 的萘 -甲醇溶液，记录样品峰高。在其样品峰高大于或等于两倍基线噪声 峰高时，计算最小检测浓度公式如下：CL=2 HN C/H式中：CL最小检测浓度（g/ml ）HN噪声峰高（记录仪格数或实测高度 mm ）C样品浓度（g/ml ）H样品峰高（记录仪格数或实测高度 mm ）最小检定浓度检定记录仪器型号日期检定员复核员最小检测浓度接受标准：最小检测浓度：4X

10、10-8g/ml（萘的甲醇溶液）样品浓度噪声值峰高最小检测浓度结论5-5-4-3 波长示值误差用水将流动池冲洗干净，置零。用 0.0005mol/l 硫酸溶液冲洗流动池， 并将其注满。设定流速为0.5ml/min, 检测器波长为 200nm。测定其 从 200nm 到 400nm 条件下的紫外吸收值。（在规定的标准波长（235nm,257nm, 313nm, 350nm） 周围正负 5nm 范围内每 1nm 测试 1 次，测试 范围应含括 200nm,及400nm 两点）记录相应的紫外吸收值或峰高。用0.006%重铬酸钾标准溶液清洗流动池，并将其注满。设定检测器波长 为 200nm, 进样 2

11、0ul/min。测定其从 200nm 到 400nm 条件下 的紫外 吸收值。记录相应的紫外吸收值或峰高。重复 3 次。扣除空白后的极 点吸收值对应的波长与标准波长间的差为波长示值误差。3 次测量中最大值与最小值之差为波长重复性误差9波长示值误差及波 长重复性误差的检定记录仪器型号日期检定员复核员波长误差接受标准：示值误差 ： 2nm重复性误差：103线 性范 围丙酮%0. 10.20. 30. 40. 50.60. 70. 80. 91.0读数平均值线性范围结论5-5-5 手动进样器进样线性使用适当的萘-甲醇标准溶液或稳定的待分析样品，以甲醇为流动相，波长设定为 254nm，分 别进样 5u

12、l、10ul、15ul、20ul，至 少进样 2 针。记录萘的峰面积，计算其平均峰面积相对于进样量的线性回归。仪器型号日期检定员复核员自动进样器相对准确度接受标准：相对准确度 RA : 土 2%V12345A平均RSD%5ul10ul15ul20ul线性方程结论5-5-6 定性，定量测量重复性的检定使仪器处于正常工作状态，注入适当的萘-甲醇标准溶液或稳定的待 分析样品，记录保留时间和峰面积，连续测定 6 次，按如下公式计算RSD%。RSD定性（定量）=刀（Xi-X平均）2/（n-1）0.5/X平均X100%日期复核员11式中：Xi第 i 次测得的保留时间或峰面积12X平均一一 n 次测量结果的

13、算术平均值I测量序号n- 测量次数定性，定量测量重复性的检定的记录仪器型号日期检定员复核员定性，定量测量重复性接受标准定性测量重复性误差 RSD定性： 1.5% 定量测量重复性误差 RSD定量：3.0%试样名称浓度进样量波长流动相流量No123456平均保留时间(mi n)峰面积定性重复性结果定量重复性结果结论定性重复性与定量重复性符合要求6.附图a.定性，定量测量重复性的检定色谱图b.自动进样器线性图谱c.波长示值误差图谱d.梯度误差图谱e.基线噪声和基线漂移13附 录 1 ：HPLC 检 定 证 书检定结果B.1 外 观 检 查:B.2 泵流量设定误差和重 复性误 差: 泵 流 量 设 定

14、 值 /(ml/min): 0.5 实 测值 /(l/min): 设 定 误 差 Ss/%: 重 复 性 误 差SR/%: 泵 梯 度 误 差 Gc/%:B.3 柱箱温度设定值误差 Ts：柱箱温度稳定性 Tc:B.4 检测器性能 : 基 线 噪 声 /AU: 基 线 漂 移/(AU/h): 波长示值误差/nm:最小检测浓度/(g/ml 萘冲醇):线性范围:B.5 整 机 性 能定 性 重 复 性 RSD6/%:定 量 重 复 性 RSD6/%:审 核人/日 期:复核人 /日期 :附录 2：色谱柱性能测试A.1 液相色谱柱性能A.1.1 柱效：反相色谱柱的理论塔板数一般在 3X1044X104m

15、-1范围内，正相色谱柱的 理论塔板数在 4X1045X104m-1范围内.A.1.2 色谱峰对称性：被测物(蒽)的不对称因子As一般在 0.81.6 范围内.A. 2 柱性能测试方法1.0 1.5检定人/日期:14A.2.1 测试条件和标准溶液 色谱柱性能测试条件和液相色谱仪的检定条件基本相同 .反相色谱柱侧使用的标准溶液为 10g/ml 尿嘧啶,10g/ml 联苯和蒽( (萘)的甲醇 溶液,正相色谱柱测试用的标准溶液为 10ml/ml 甲苯和 10ml/ml 硝基苯的正己烷 溶液.A.2.2 柱效的测试方法 :将被测试的色谱柱接到检定合格的液相色谱仪器上,反相柱用甲醇 +水(85%+15%)为流动相，内径为 4.6mm 时,流速为 1.0ml/min,紫外检测波长为 254nm,灵敏度选择在0.04 左右,按色谱柱说明书操作，开启仪器稳定后，从进样口 注入 10ul 反相柱测试标准溶