实验室生物安全管理操作

1、实验室生物安全实验室生物安全国内概况（1）起步n20世纪世纪80年代我国自己研制第一个国产三级生物安全年代我国自己研制第一个国产三级生物安全防护水平实验室诞生防护水平实验室诞生n我国也建造了一批此种防护水平或接近我国也建造了一批此种防护水平或接近BSL-3水平的水平的生物安全实验室。生物安全实验室。n2002年颁布了微生物和生物医学实验室生物安全通年颁布了微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（用准则（WS 2332002），），这是一个开创性工作。这是一个开创性工作。 n2003年兽医实验室生物安全通用标准并已颁布实兽医实验室生物安全通用标准并已颁布实施。施。国内概况（2）国家标准国家标准n

2、2003年年8月开始起草，实验室生物安全通月开始起草，实验室生物安全通用要求用要求GB19489-2004。2004年年5月中华月中华人民共和国质量监督检验检疫总局人民共和国质量监督检验检疫总局 和中华人和中华人民共和国标准化管理委员会正式颁布了该标民共和国标准化管理委员会正式颁布了该标准。准。n2004年年9月月1日中华人民共和国建设部与国家日中华人民共和国建设部与国家质量监督检验检疫总局又联合发布了生物质量监督检验检疫总局又联合发布了生物安全实验室建设技术规范安全实验室建设技术规范(GB50346-2004）国内概况（3） 病原微生物实验病原微生物实验室生物安全管理条例室生物安全管理条例n

3、2004年年11月月12日，由温家宝总理签发中华日，由温家宝总理签发中华人民共和国国务院令人民共和国国务院令(第第424号号)公布施行病公布施行病原微生物实验室生物安全管理条例（简称原微生物实验室生物安全管理条例（简称条例）。该条例规定了在病原微生条例）。该条例规定了在病原微生物实验活动中保护实验人员和公众健康的宗物实验活动中保护实验人员和公众健康的宗旨，从而使我国病原微生物实验室的管理工旨，从而使我国病原微生物实验室的管理工作步入法制化管理轨道。不言而喻，条例作步入法制化管理轨道。不言而喻，条例对我国防生物威胁和处理突发卫生事件的建对我国防生物威胁和处理突发卫生事件的建设具有现实的和深远的意

4、义。设具有现实的和深远的意义。病原微生物实验室的有关概念病原微生物实验室的有关概念n1. 生物因子（剂）生物因子（剂）: 具有一定生物活性的制剂具有一定生物活性的制剂n2. 微生物微生物: 微生物是指活的生物因子，包括能够复制微生物是指活的生物因子，包括能够复制或基因物质传递的细胞或非细胞的微小生物实体，其或基因物质传递的细胞或非细胞的微小生物实体，其中包括致病和非致病的微生物。主要指细菌（螺旋体、中包括致病和非致病的微生物。主要指细菌（螺旋体、立克次体、衣原体）、真菌、病毒和某些寄生虫。立克次体、衣原体）、真菌、病毒和某些寄生虫。n3. 病原体病原体: 病原体是能致病的生物因子，包括能够引病

5、原体是能致病的生物因子，包括能够引发人和动物、植物传染病的生物因子，主要指致病微发人和动物、植物传染病的生物因子，主要指致病微生物。生物。病原微生物实验室的有关概念病原微生物实验室的有关概念n4生物气溶胶生物气溶胶 ： 气溶胶是指悬浮于气体介气溶胶是指悬浮于气体介质中粒径一般为质中粒径一般为 0.001-100m的固态或液的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。分分散相含有生物因子的气溶胶散相含有生物因子的气溶胶。n5. 生物战剂气溶胶生物战剂气溶胶： 分散相含有生物战剂的分散相含有生物战剂的气溶胶。气溶胶。气溶胶喷洒是国外生物战释放生物气溶胶喷洒是国

6、外生物战释放生物战剂的主要方式。战剂的主要方式。病原微生物实验室的有关概念病原微生物实验室的有关概念n6.生物危害生物危害 和生物危险和生物危险：生物危害是由生物危害是由生物因子形成的伤害。生物危险是生物生物因子形成的伤害。生物危险是生物因子将要或可能形成的危害，是伤害概因子将要或可能形成的危害，是伤害概率和严重性的综合。率和严重性的综合。n7. 危险废物危险废物：即有潜在危险的废物，即即有潜在危险的废物，即可燃、易燃、腐蚀、有毒、传染、放射可燃、易燃、腐蚀、有毒、传染、放射或其他破坏作用的废物或其他破坏作用的废物 病原微生物实验室的有关概念病原微生物实验室的有关概念n8污染污染：是指物质或事

7、物由外来的物质或是指物质或事物由外来的物质或因子的混入，而造成的不希望的影响。例因子的混入，而造成的不希望的影响。例如空气、水体和固体受到物理的如空气、水体和固体受到物理的(灰尘灰尘)、气体的气体的(有害气体有害气体)、生物、生物(气溶胶微生物气溶胶微生物)的的污染。在生物安全实验室里的空气、水体污染。在生物安全实验室里的空气、水体和固体都视为被实验生物因子的污染。和固体都视为被实验生物因子的污染。病原微生物实验室的有关概念病原微生物实验室的有关概念n9去除污染去除污染：即为了安全，去除或减少污染即为了安全，去除或减少污染物（原）或其影响的过程或方法。去除生物物（原）或其影响的过程或方法。去除

8、生物污染不一定杀灭微生物。所以：污染不一定杀灭微生物。所以：n（1）安全柜内操作n（2）向室外排放的空气要用高效空气颗粒）向室外排放的空气要用高效空气颗粒 滤器过滤滤器过滤, n（3）排出的废水和废物要进行高压灭菌）排出的废水和废物要进行高压灭菌, 对对传出的仪器和样本容器表面进行消毒。传出的仪器和样本容器表面进行消毒。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（1）n1生物安全防护生物安全防护：是指避免生物危险是指避免生物危险因子，特别是偶然的和有意利用的生物因子，特别是偶然的和有意利用的生物因子，对生物体包括实验室工作者在内因子，对生物体包括实验室工作者在内的伤害和对环境的污染的意识和措施

9、。的伤害和对环境的污染的意识和措施。实验室生物安全防护分为一级防护（屏实验室生物安全防护分为一级防护（屏障）和二级防护（屏障）障）和二级防护（屏障）。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（2）n2一级防护：包括两方面内容：一级防护：包括两方面内容：n（1）生物安全柜）生物安全柜 和类似的设备等，分成三和类似的设备等，分成三个级别；个级别；n（2）个人防护装备）个人防护装备，也分成三个级别。也分成三个级别。n3. 二级防护二级防护: 是指实验室屏障设施，其建设有是指实验室屏障设施，其建设有4 种不同的结构。种不同的结构。n各种一级防护和二级防护的组合构成不同防各种一级防护和二级防护的组合构

10、成不同防护水平级别的实验室（护水平级别的实验室（BSL-14）。）。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（3）n4. 生物安全防护实验室生物安全防护实验室: 指能够避免或控制被操作的指能够避免或控制被操作的有害生物因子危险的实验室。有害生物因子危险的实验室。n措施：通过规范的实验室设计和精心施工、正确的实措施：通过规范的实验室设计和精心施工、正确的实验设备的配置、适合的个人防护装备的使用、严格管验设备的配置、适合的个人防护装备的使用、严格管理、翔实的操作规程（理、翔实的操作规程（SOP) 实现其功能。实现其功能。n建造具有建造具有BSL-1和和BSL-2的实验室称为基础实验室；的实验室称

11、为基础实验室；具有具有BSL-3防护水平的实验室被称为生物安全防护实防护水平的实验室被称为生物安全防护实验室；达到验室；达到BSL-4水平的称为高度生物防护实验室。水平的称为高度生物防护实验室。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（4）n5生物安全柜生物安全柜：是直接操作危险性微生是直接操作危险性微生物时所用的箱形安全设备，是生物安全物时所用的箱形安全设备，是生物安全实验室必备的装备，保护使用者和环境，实验室必备的装备，保护使用者和环境，保护样品。保护样品。n按防护水平生物安全柜分为按防护水平生物安全柜分为I级、级、II级、级、III级级, II级的又分为级的又分为4 种类型种类型生物安

12、全防护相关概念（生物安全防护相关概念（5）n6安全罩安全罩：即覆盖在生物医学实验室即覆盖在生物医学实验室工作台或仪器设备上的内部空气压力低工作台或仪器设备上的内部空气压力低于环境压力的经滤器过滤的排风罩，以于环境压力的经滤器过滤的排风罩，以减少对实验室工作者和环境的危害。减少对实验室工作者和环境的危害。 n7围场操作围场操作：是指操作有害生物因子是指操作有害生物因子时，用物理防护设备把病原微生物局限时，用物理防护设备把病原微生物局限在一定的空间内，避免生物因子对人体在一定的空间内，避免生物因子对人体的暴露和污染环境。的暴露和污染环境。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（6）n8气锁和缓

13、冲间气锁和缓冲间：气锁是设置在气压不气锁是设置在气压不同的邻近二区之间的气压可调节的密闭同的邻近二区之间的气压可调节的密闭小室，作为二区的过渡通道。小室，作为二区的过渡通道。n缓冲间缓冲间 是设在生物安全实验室的清洁区是设在生物安全实验室的清洁区与半污染区之间，或半污染区与污染区与半污染区之间，或半污染区与污染区之间的类似于气锁的密闭小室，小室的之间的类似于气锁的密闭小室，小室的两门互锁。两门互锁。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（7）n9个人防护装备：用于防止人员受到个人防护装备：用于防止人员受到化学和生物等有害因子伤害的器材和装化学和生物等有害因子伤害的器材和装备。其根本目的是屏

14、蔽生物因子备。其根本目的是屏蔽生物因子,不与人不与人体发生直接接触。我国在传染病和微生体发生直接接触。我国在传染病和微生物实验室把个人防护分为三级。物实验室把个人防护分为三级。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（8）n（1）清洁区：是指在正常情况下不可能有实）清洁区：是指在正常情况下不可能有实验因子的污染的区域。验因子的污染的区域。n（2）半污染区：是指在正常情况下只有轻微）半污染区：是指在正常情况下只有轻微污染可能的区域。此区的功能是大量的准备工污染可能的区域。此区的功能是大量的准备工作作, 例如培养基、细胞、制剂的配制、低温冰例如培养基、细胞、制剂的配制、低温冰箱的放置等。在此工作

15、的人员要做好个人防护箱的放置等。在此工作的人员要做好个人防护, 如穿上一层防护服、戴口罩和手套等。如穿上一层防护服、戴口罩和手套等。n（3）污染区：是指操作实验因子的地方）污染区：是指操作实验因子的地方 ，在，在操作过程中一定会有污染的区域操作过程中一定会有污染的区域, 有潜在严重有潜在严重污染的可能。污染的可能。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（9）n（4）“缓冲间缓冲间”：是指在：是指在A和和B之间之间, B和和C之间的区域（小室）。缓冲间有送、排风进之间的区域（小室）。缓冲间有送、排风进行净化换气行净化换气, 以保证在人员出入时污染空气不以保证在人员出入时污染空气不会直接向清洁

16、区扩散或分割到清洁区。其功会直接向清洁区扩散或分割到清洁区。其功能包括空气隔离、更衣换鞋、去污染消毒淋能包括空气隔离、更衣换鞋、去污染消毒淋浴。浴。n（5）传递窗：在）传递窗：在BSL-3的的A和和B, B和和C之间各之间各设一个物流通道设一个物流通道, 以便传递实验物资。它也是以便传递实验物资。它也是2门连锁门连锁, 并可进行消毒。并可进行消毒。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（11）（7）“零泄漏零泄漏” ：我国的我国的BSL-3和和BSL-4实验室要求活性实验因子不能有任何泄实验室要求活性实验因子不能有任何泄漏。为此，对于离周围建筑物较近的漏。为此，对于离周围建筑物较近的BSL

17、-3实验室实验室, 除了采取其他措施外，建除了采取其他措施外，建议排入大气的空气要经过双议排入大气的空气要经过双HEPA滤器串滤器串联过滤联过滤, 并经过人工生物气溶胶法的监测并经过人工生物气溶胶法的监测和验证。和验证。生物安全防护相关概念（生物安全防护相关概念（12）(8)生物气溶胶验证方法生物气溶胶验证方法：指用人工生物指用人工生物气溶胶验证生物安全实验室、生物安全气溶胶验证生物安全实验室、生物安全设备和个人防护装备的安全参数是否达设备和个人防护装备的安全参数是否达到要求的方法，对于生物安全柜的安全到要求的方法，对于生物安全柜的安全性能检测和验证，主要进行个体、环境性能检测和验证，主要进行

18、个体、环境和样本保护实验和交差污染实验。和样本保护实验和交差污染实验。其他概念（其他概念（1）1消毒消毒：是减少细菌芽胞除外的微生物的数量，是减少细菌芽胞除外的微生物的数量，使其达到无害的程度，不一定杀灭或清除全使其达到无害的程度，不一定杀灭或清除全部的微生物。部的微生物。2灭菌灭菌：灭菌是有效地使目的物没有微生物的灭菌是有效地使目的物没有微生物的措施和过程，即杀灭所有的微生物。一般的措施和过程，即杀灭所有的微生物。一般的细菌繁殖体和病毒细菌繁殖体和病毒1210C 20min即可灭菌即可灭菌,对对细菌芽胞需要细菌芽胞需要30min以上以上; 对朊病毒对朊病毒 要要1340C 20min以上才能

19、灭菌。以上才能灭菌。其他其他概念概念（2）3. 高效空气过滤器高效空气过滤器：是指在额定风量和有是指在额定风量和有效滤过面积下及气流阻力在效滤过面积下及气流阻力在245Pa以下以下的对粒子径的对粒子径0.3m的粒子捕集效率在的粒子捕集效率在99.97%以上空气过滤器。以上空气过滤器。4. 净化净化：是指去除生物和非生物的所有类是指去除生物和非生物的所有类型污染的措施和过程。生物净化其方法型污染的措施和过程。生物净化其方法可能是消毒，也可能是灭菌或只是过滤。可能是消毒，也可能是灭菌或只是过滤。其他其他概念概念（3）5. 动态密闭和静态密闭：动态密闭和静态密闭：在在BSL-4实验室中要求静态密闭实

20、验室中要求静态密闭, 即实验室即实验室在正压情况下能保证实验室的空气不会在正压情况下能保证实验室的空气不会外溢。外溢。在在BSL-3实验室中要求动态密闭实验室中要求动态密闭, 即实验室即实验室允许有少量的漏气允许有少量的漏气, 但当排气大于送气时但当排气大于送气时能保持室内的负压状态或定向气流。能保持室内的负压状态或定向气流。其他其他概念概念（4）6. 硬件和软件：硬件是指实验室的设备和硬件和软件：硬件是指实验室的设备和个人防护装备个人防护装备 (一级防护一级防护)和设施和设施(二级防二级防护护)。在高致病性病原微生物实验室中硬。在高致病性病原微生物实验室中硬件要在性能上过硬件要在性能上过硬,

21、 功能上齐全。软件是功能上齐全。软件是指实验室的生物管理体系，包括组织机指实验室的生物管理体系，包括组织机构、管理制度、操作规程、人员素质等。构、管理制度、操作规程、人员素质等。其他其他概念概念（4）7材料安全数据单材料安全数据单：提供详细的危险因提供详细的危险因素及预防信息的技术清单或有关资料，素及预防信息的技术清单或有关资料，在制定研究计划时应包含此内容。在制定研究计划时应包含此内容。管理制度实验室设置n在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区和污染区n非实验有关人员和物品不得进入实验室n实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准 实验室准入制

22、度 基础生物安全二级实验室或更高级实验室门上应有国际生物危险警告标志。 只有经过授权的人员才允许进入实验室的工作区。 实验室的门应保持关闭。 16岁以下儿童不应被授权或允许进入实验室工作区。 只有经过专门的授权,方可进入动物房。 与实验室工作无关的动物禁止进入实验室。 实验室内外应有明显的禁止吸烟、禁止吃喝东西的标志。 实验室准入制度 实验室应保持整洁、干净、与工作无关的物品禁 止放入实验室。 任何潜在的危险物溅出或工作日结束后,工作台表面应净化。 所有污染的物品、标本和培养基在丢弃或清洗再利用之前应先进行净化。 包装及运输时必须遵守适当的国家或国际规则。 能打开的窗子必须安装防蚊虫的纱窗。实

23、验室工作人员资格和培训n实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作n实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接收实验室安全教育，自愿从事实验室工作n实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程n三级和四级生物安全防护实验室的工作人员留本底血清进行相关检测，以后定期复检。实验室特殊管理n对可能的危险因素，制定保证安全的工作程序n事前进行有效的培训和模拟训练n对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性保健治疗的措施，足以应付紧急情况n实验室事故处理及上报n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备

24、适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。n包含微生物举例 大肠杆菌 格鲁伯耐格里原虫 感染性犬肝炎病毒 枯草杆菌一级生物安全防护实验室n实验室应设洗手池（靠近出口处）n实验室围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯n实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废弃物容器的台（架）n实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热n实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗一级生物安全防护实验室实验室设计及建造实验室设计及建造 n工作过程中禁止非工作人员进入实验室。n接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手n禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及

25、存储食物n使用机械移液器吸取液体，禁止口吸n制定尖锐器具的安全操作规程一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程标准微生物操作规程n按照实验室安全规程操作，降低溅出和气溶胶的产生n每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒n所有培养物、废弃物在运出实验室前须进行灭活（如高压）。需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。n制定有效的防鼠防虫措施n无特殊微生物操作规程一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程一级生物安全防护实验室 安全设施和个体防护安全设施和个体防护n一般无须使用生物安全柜等专用安全设备n工作人员在实验室应穿工作服，带防护眼镜n工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套负责人

26、负责人：在微生物及相关学科进行过专门培训的专家 工作人员工作人员： 曾经就实验室操作规程进行过培训n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。n包含微生物举例 麻疹病毒 沙门氏菌 弓形体 乙型肝炎病毒 衣原体 志贺氏菌二级生物安全防护实验室BSL-2门上标志满足一级实验室 (标准微生物操作规程) 各款要求，在此基础上特别注意n制定出入制度n实验室人口贴上生物危险标志n制定实验室特定的生物安全操作规则n每年一次最新培训制度二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程特殊微生物操作规程生物危险级v 禁止禁止用手处理破碎的玻璃器具。二级生物安全防护实验室特殊微生物

27、操作规程特殊微生物操作规程v使用塑料器材代替玻璃器材。v用过的针头禁止禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止禁止用手直接从注射器取下。v用过的针头必须必须直接放入防穿透的容料中。v非一次性利器必须必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒n 针具 利器使用注意事项：n培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌n工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)n必要时收集从事危险性工作人员的本底血清n实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒n人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案n禁止将无关动物

28、带入实验室二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程特殊微生物操作规程n在一级生物安全基础上，处理以下致病微生物时应在生物安全柜 (级) 中进行 ，包括: 高浓度高浓度 大容量大容量 有喷溅可能性有喷溅可能性n上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。n当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置n应有相应的应有相应的SOP(标准操作程序标准操作程序二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护n在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或

29、丢弃。n当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。二级生物安全防护实验室负责人n应为更具责任感、能力的专家v限制免疫耐受者进入实验室v限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室工作人员n认识到工作中可能存在的危险n操作/技术熟练废弃物处理废弃物是指任何要丢弃的物品。在实验室里，废弃物的净化和最终的处理密切相关。对于日常用品、污染后被真正地拿出实验室销毁的情况很少、大多数的玻璃器皿、用具和实验服都将重新投入使用。最重要的原则就是所有的感染性物品都应该在实验室内净化、高压灭菌

30、或焚烧。废弃物处理从实验室拿出污染物品或材料以前应保证: 这些物品和材料是否已经过可靠的程序有效净化和灭菌。 如果没有，它必须有可靠的包装，以利于现场焚烧，或运送到另一个有焚烧功能的设施。 己经净化处理的物品对那些直接参与处理程序的人员或可能接触这些丢弃物的人员不会涉及任何额外的潜在危险，包括生物和其它危害。废弃物处理程序（分类）1 首先将感染性物品及盛装这些感染性物品的容器依据下列原则进行： 能被再利用的或能象普通废弃物一样处理的非感染性物品:生活废弃物。 污染的(感染性的)利器皮下注射针头、解剖刀、刀和碎玻璃,这些物品应该始终收集到防刺透的、有盖子的容器里,并且象感染性物品一样对待。 要通

31、过高压灭菌净化后,清洗再利用的污染物。 要高压灭菌后处理的污染物。 要直接送去焚烧的污染物。处理程序利器 使用后的皮下注射针头不应再盖帽或从一次性注射器上夹掉或移走。完整的注射器应装在利器盒里,利器盒应是防刺透的,并且不能装满,当装至容积的四分之三时、就应放入“感染性材料”容器里拿去焚烧。一次性注射器、单独使用或与针头一起使用，应该放入容器里焚烧，需要的情况下焚烧前要先高压，利器盒不许丢到垃圾里。焚烧是处理污染物(包括宰杀后的实验动物)的终末步骤，污染物的焚烧必须取得公共卫生机构和大气污染机构的批准，也要得到实验室生物安全员的批准。n处理程序n要高压和再利用的感染性物品n 感染性物品在高压和再

32、利用之前不得预清洗,任何必要的洗涮和修复工作都要在高压灭菌或消毒之后进行，所有感染性材料都应该在防渗露的容器里高压灭菌。如果使用化学消毒剂，则消毒液每天新鲜配制，废弃物应保持和消毒剂直接接触（不能被气泡隔住）并根据所使用的消毒剂选择浸泡时间，然后把消毒剂倒到一个容器里以备高压或焚烧。盛装废弃物的罐子在使用前应高压并洗净。n对于所有的净化过程蒸汽高压都是首选的方法。要净化和处理的材料应放在容器里,如放在耐高压的塑料袋里，袋上以颜色标识其内容物要高压灭菌和/或焚烧。也可以设计其它净化方法、但它们必须可消除或消灭微生物，如消毒剂和化学药品，一般实验室推荐使用次氯酸纳和酚类化合物作为消毒剂。 净化n净

33、化n用于特殊目的各种表面活性剂或脂溶剂，包括酒精、腆酒、腆载体和极高或极低PH一样，也可能是有效的，但要先确定要杀灭的微生物对此无抗性，以保证每种消毒剂在特定的用途中有效。不建议使用干热、微波、紫外线、电离辐射等不确定方法。菌毒种的管理和使用菌毒种包括致病的和人类寄生的病毒、细菌真菌、端钩螺旋体、立克次体等微生物。菌毒种的管理和使用来源从病人、感染者或动物分离培养的致病微生物、研制诊断试剂、疫苗或其他生物制品的微生物，从研制机构购买的标准品。 菌毒种的管理和使用取和发放菌毒种：严格执行国家有关规定，手续完备，并认真作好记录，按菌毒种分类要求，一类菌毒种报卫生部审批，二类菌毒种报省级卫生行政部门

34、审批。一、二类菌毒种不得邮寄，三类菌毒种在邮寄时应执行有关规定。菌毒种的管理和使用保存按菌毒种特性种类要求，分别放置于最适条件下保存，专人保管，双人双锁。分类保存，按制度严格管理收入菌毒种，随时做好标记，编号，登记，造册。按期检测活性，定期传代保存，发现污染或活性减低，及时挽救，菌毒种死亡或变异,报批后销毁并登记。菌毒种的管理和使用保存：按菌毒种特性种类要求，分别放置于最适条件下保存，专人保管，双人双锁。分类保存，按制度严格管理收入菌毒种，随时做好标记，编号，登记，造册。按期检测活性，定期传代保存，发现污染或活性减低，及时挽救，菌毒种死亡或变异，报批后销毁并登记。易燃易爆危险品、剧毒药品、放射

35、性标准源的使用管理n易燃易爆危险品、剧毒药品、水、电或n放射事故可能会间接引起传染性微生物n的扩散。因此任何微生物实验室在这些n方面都应有很高的安全要求。 剧毒药品、放射性标准源必须做到专门场所、双人、专柜加密加锁管理。危险品（易燃易爆）应储存在专柜内，专柜须防火、防盗、隔热、避光、通风专人保管。易燃易爆危险品、剧毒药品、放射性标准源的使用管理 放射性标准源必须存放于有铅屏蔽的铁柜中有专人管理。 剧毒药品、放射性标准源及危险品建立建全进出帐目，定期检查，做到帐物相符，任何人不得外借或作其它用途。易燃易爆危险品、剧毒药品、放射性标准源的使用管理 剧毒药品、放射性标准源使用是严格履行审批请领手续，

36、危险品严格履行请领手续，做好使用登记，保管者严格按规范和制度办事，加强管理建立制度。易燃易爆危险品、剧毒药品、放射性标准源的使用管理 对违犯制度者、渎职者、失职者、违规者的任何人都应追查其责任，严肃处理，情节严重者由公安司法部门依法处理。易燃易爆危险品、剧毒药品、放射性标准源的使用管理实验室高致病性微生物泄漏事故处理 从事高致病性微生物实验室必须严格执行上述条例，严防高致病性微生物从实验室泄漏，万一发生高致病性微生物泄漏事故，实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案处置。实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案意外割伤和擦伤 受伤人员应脱去保护服，洗净双手和受伤部位，使用适当的消毒剂，进入急救室，同时

37、通知负责人受伤的原因及所污染的微生物，根据需要和医生的建议进行处理，并保存完整的医疗档案。实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案潜在的危险材料的意外吸入 立即脱去防护服并送至急救室，告诉医生吸入的材料，根据需要和医生的建议进行处理并保存完整的医疗档案，同时通知实验室负责人。 实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案 有潜在危险的气溶胶的释放 在实验过程中如果有潜在危险的气溶胶的释放时，所有人员应立即撤离现场，任何暴露的人员都应进行医疗咨询。并且马上通知实验室负责人。至少1小时内任何人不得进入事发房间，以使气溶胶散去及重粒子沉降，如果实验室无中央排风系统，要延迟24小时进入房间，并贴出标识以禁止进入。

38、规定时间过后，应穿上防护服并戴呼吸保护装置，在安全生产督查员的监督下进行房间净化。实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案打碎或溅出传染性物质 污染了感染性物质的破碎物品，感染性物质溅出，应该先用一块布或纸巾盖上，再把消毒剂倒到上面，至少静置30分钟，然后才把布或纸巾及打碎的物品清理走并高压消毒。玻璃碎片应用镊子夹取，污染区应用消毒剂拖干净。如果使用了簸箕清理打碎的器皿，应将簸箕高压或在有效的消毒剂里浸泡24小时。如果实验室记录被污染，则需重新填写记录并将污染的原件消毒处理。实验室高致病性微生物泄漏应急处置预案含有潜在危险物离心管破裂 在离心机正在运行时发生了破裂时，应关闭动力并保持离心机盖子关闭

39、30分钟，在机器停止后发生破裂，离心机盖子应立即关闭并保持30分钟，同时通知实验室负责人并在有效的防护条件下清理现场，所有打破的离心管、玻璃碎片、桶、套管及转轴都要高压或放到对该微生物有效的无腐蚀性的消毒剂中浸泡24小时。清理中所有的物品都应视为污染物消毒处理。 实验室工作人员出现所从事微生物感染症状或体征时应按下列处置规程 实验室工作人员出现所从事微生物感 染症状或体征时应按下列处置规程立即封锁该实验室（动物房），并明显标识严禁无关人员进入。立即通知实验室负责人，并逐级上报。迅速将被感染人员送指定医院隔离治疗，同一实验室工作人员进行健康体检并进行医学观察，必要时进行预防性治疗。实验室工作人员

40、出现所从事微生物感染症状或体征时应按下列处置规程n 进行流行病学调查，明确污染来源并列出其他密切接触者或暴露人员（感染者家属、同楼层人员）名单及处理方案。 在微生物和流行病专家的指导和有严格防护设施的条件下对实验室进行消毒处理，在未得到验收许可之前不能启用该实验室。 会同微生物和流行病专家找出泄漏原因，提出整改意见，对实验室存在的安全隐患进行改造，并追究相关人员的责任。 生物安全管理组织体系生物安全管理组织体系国家国家地区地区单位上级主管部门单位上级主管部门实验室所在单位实验室所在单位实验室实验室 国家级 n国务院卫生主管部门国务院卫生主管部门主管与人体健康有主管与人体健康有关的实验室及其实验

41、活动的生物安全监关的实验室及其实验活动的生物安全监督工作。督工作。 n国务院兽医主管部门国务院兽医主管部门主管与动物有关的主管与动物有关的实验室及其实验活动的生物安全监督工实验室及其实验活动的生物安全监督工作。作。 n国务院其他有关部门国务院其他有关部门在各自职责范围内在各自职责范围内负责实验室及其实验活动的生物安全管负责实验室及其实验活动的生物安全管理工作。理工作。 各地：n 县级以上地方人民政府及其县级以上地方人民政府及其有关部门在各自职责范围内负责有关部门在各自职责范围内负责实验室及其实验活动的生物安全实验室及其实验活动的生物安全管理工作管理工作县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管

42、县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自分工，履行下列职责：部门依照各自分工，履行下列职责： ( (一一) )对病原微生物菌对病原微生物菌( (毒毒) )种、样本的采集、运输、种、样本的采集、运输、储存进行监督检查；储存进行监督检查； ( (二二) )对从事高致病性病原微生物相关实验活动的实对从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室是否符合本条例规定的条件进行监督检查；验室是否符合本条例规定的条件进行监督检查； ( (三三) )对实验室或者实验室的设立单位培训、考核其对实验室或者实验室的设立单位培训、考核其工作人员以及上岗人员的情况进行监督检查；工作人员以及上岗人员的情况进行监

43、督检查； ( (四四) )对实验室是否按照有关国家标准、技术规范和对实验室是否按照有关国家标准、技术规范和操作规程从事病原微生物相关实验活动进行监督检查。操作规程从事病原微生物相关实验活动进行监督检查。 实验室的设立单位及其主管部门实验室的设立单位及其主管部门n实验室的设立单位实验室的设立单位应当依照条例的规定应当依照条例的规定制定科学、严格的管理制度，并定期对制定科学、严格的管理制度，并定期对有关生物安全规定的落实情况进行检查，有关生物安全规定的落实情况进行检查，定期对实验室设施、设备、材料等进行定期对实验室设施、设备、材料等进行检查、维护和更新，以确保其符合国家检查、维护和更新，以确保其符

44、合国家标准。标准。 n实验室的设立单位及其实验室的设立单位及其主管部门主管部门应当加应当加强对实验室日常活动的管理。强对实验室日常活动的管理。 实验室感染控制机构及人员实验室感染控制机构及人员n实验室的设立单位应当指定实验室的设立单位应当指定专门的专门的机构或者人员机构或者人员承担实验室感染控制承担实验室感染控制工作，定期检查实验室的生物安全工作，定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌防护、病原微生物菌(毒毒)种和样本种和样本保存与使用、安全操作、实验室排保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置放的废水和废气以及其他废物处置等规章制度的实施情况。等规章制度的实施情况。

45、实验室感染控制机构及人员实验室感染控制机构及人员n负责实验室感染控制工作的机构或负责实验室感染控制工作的机构或者人员者人员应当具有应当具有与该实验室中的病与该实验室中的病原微生物有关的传染病防治知识，原微生物有关的传染病防治知识，并定期调查、了解实验室工作人员并定期调查、了解实验室工作人员的健康状况的健康状况 n从事高致病性病原微生物相关实验活动从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的设立单位，的实验室的设立单位，应当建立应当建立健全安健全安全保卫制度。全保卫制度。n从事高致病性病原微生物相关实验活动从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的实验室应当应当向当地公安机关备案，并向当地公安

46、机关备案，并接受接受公安机关有关实验室安全保卫工作公安机关有关实验室安全保卫工作的监督指导的监督指导。 实验室负责人实验室负责人-实验室生物安全的第一责任实验室生物安全的第一责任人人 n实验室负责人实验室负责人应当指定专人应当指定专人监督监督检查实验室技术规范和操作规程检查实验室技术规范和操作规程的落实情况。的落实情况。 实验室安全手册实验室安全手册 安全手册应在工作区随时可用。手册应针对实安全手册应在工作区随时可用。手册应针对实验室的需要，主要包括但不限于以下几方面：验室的需要，主要包括但不限于以下几方面：n生物危险；生物危险； n消防；消防；n电气安全；电气安全；n化学品安全；化学品安全；

47、n辐射；辐射；n危险废物处理和处置。危险废物处理和处置。n从工作区撤离和事件处理规程有详细说明。从工作区撤离和事件处理规程有详细说明。 实验室主任人应至少每年对安全手册评审和实验室主任人应至少每年对安全手册评审和更新。更新。 标准操作程序（标准操作程序（SOP）n应根据实验对象、生物危害程度评估、研究内应根据实验对象、生物危害程度评估、研究内容、设施特点、设备具体制定相应的标准操作容、设施特点、设备具体制定相应的标准操作程序。程序。n实验室的标准操作程序应包括对涉及的任何危实验室的标准操作程序应包括对涉及的任何危险以及如何在风险最小的情况下开展工作之详险以及如何在风险最小的情况下开展工作之详细

48、的作业指导书。细的作业指导书。n负责工作区活动的管理责任人每年应对这些程负责工作区活动的管理责任人每年应对这些程序至少评审和更新一次序至少评审和更新一次, ,应制定书面计划。应制定书面计划。 获得、维持和分发实验室所有使用材料之安获得、维持和分发实验室所有使用材料之安全数据单（全数据单（MSDS）的程序；的程序；实验室设备安全去污染和维护的程序；实验室设备安全去污染和维护的程序；紧急程序，包括漏出处理程序；紧急程序，包括漏出处理程序；事件记录、报告及调查；事件记录、报告及调查；废物处理和处置。废物处理和处置。小结n认真学习条例和国标、行标。n生物安全管理是一个复杂工程。n各个部门有机配合，负责

49、。n各路专家真诚合作，讨论、研究。n单位领导长抓不懈。n工作人员严谨、严密、严格。生物安全实验室人员管理生物安全实验室人员管理n人员培训人员培训n健康监测与就医程序健康监测与就医程序 人员培训n实验室或者实验室的设立单位应当实验室或者实验室的设立单位应当每年定期每年定期对工作人员进行培训，保对工作人员进行培训，保证其掌握实验室技术规范、操作规证其掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作程、生物安全防护知识和实际操作技能，并进行考核。工作人员经考技能，并进行考核。工作人员经考核合格的，方可上岗。核合格的，方可上岗。 人员培训n从事高致病性病原微生物相关实验从事高致病性病原微生物相

50、关实验活动的实验室，活动的实验室，应当每半年应当每半年将培训、将培训、考核其工作人员的情况和实验室运考核其工作人员的情况和实验室运行情况向省、自治区、直辖市人民行情况向省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部政府卫生主管部门或者兽医主管部门报告。门报告。 培训对象培训对象n实验室所有相关人员：实验室所有相关人员：n管理人员管理人员n实验人员实验人员n运输工运输工n清洁工清洁工n修理工修理工n不但要对新员工进行培训和指导，对老员工也不但要对新员工进行培训和指导，对老员工也要开展周期性的再培训要开展周期性的再培训 培训目的培训目的 使所有相关人员熟悉工作环境，熟悉使所有相关人员熟悉工作

51、环境，熟悉所从事的病原微生物的危害、预防和相所从事的病原微生物的危害、预防和相关实验活动的操作程序，掌握所使用仪关实验活动的操作程序，掌握所使用仪器设备的性能和操作程序，了解生物安器设备的性能和操作程序，了解生物安全知识，掌握意外事故发生时的相关处全知识，掌握意外事故发生时的相关处理程序等理程序等 。培训内容培训内容n包括为实现实验操作目标所必须掌握的知识或包括为实现实验操作目标所必须掌握的知识或技术。技术。n还应注重培训解决工作中可能出现意外事件的还应注重培训解决工作中可能出现意外事件的能力，并纠正在使用某一技术过程中容易出现能力，并纠正在使用某一技术过程中容易出现的错误。的错误。n同时还要

52、有消防和预备状态、化学和放射安全、同时还要有消防和预备状态、化学和放射安全、生物危险和传染预防、急救等课程生物危险和传染预防、急救等课程 培训方法培训方法n专题讲座、广播介绍、计算机辅助教学、交互专题讲座、广播介绍、计算机辅助教学、交互式影像、示范练习、模拟演练等各种方式。式影像、示范练习、模拟演练等各种方式。n新员工上岗后还应由有经验的技术负责人或职新员工上岗后还应由有经验的技术负责人或职工带一段时间，以充分熟悉工作工程。工带一段时间，以充分熟悉工作工程。n同时还应考虑不同培训对象的差异。对某些人同时还应考虑不同培训对象的差异。对某些人应采用更直观的或应采用更直观的或“手把手手把手”的方式更

53、好；的方式更好；n建议制定安全培训规划的人员要熟悉了解成人建议制定安全培训规划的人员要熟悉了解成人教育的基本原则。教育的基本原则。 培训评估培训评估n检查培训对象对所进行培训的反应；检查培训对象对所进行培训的反应；n考核培训对象对所培训内容的记忆和考核培训对象对所培训内容的记忆和/ /或或操作执行情况；操作执行情况；n评估培训对象在工作中的行为变化；评估培训对象在工作中的行为变化；n按培训机构的目的或目标来考查是否已按培训机构的目的或目标来考查是否已有明显的效果。有明显的效果。培训档案培训档案 实验室负责人应负责建立培训档实验室负责人应负责建立培训档案，记录被培训者的培训经历。其案，记录被培训

54、者的培训经历。其中包括：培训内容、培训时间、培中包括：培训内容、培训时间、培训教师、考核或评估结果等训教师、考核或评估结果等健康监测健康监测n从事高致病性病原微生物相关实验从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室，还应当对实验室工活动的实验室，还应当对实验室工作人员进行健康监测，每年组织对作人员进行健康监测，每年组织对其进行体检，并建立健康档案；必其进行体检，并建立健康档案；必要时，应当对实验室工作人员进行要时，应当对实验室工作人员进行预防接种。预防接种。 健康监测（健康监测（1 1）n每个实验室必须指定专人负责健康每个实验室必须指定专人负责健康监测工作。负责健康监测工作的人监测工作。负责健

55、康监测工作的人员应当具有与该实验室中所操作的员应当具有与该实验室中所操作的病原微生物有关的传染病防治知识，病原微生物有关的传染病防治知识，坚持出勤登记制度，并及时调查、坚持出勤登记制度，并及时调查、了解实验室工作人员的健康状况。了解实验室工作人员的健康状况。 健康监测（健康监测（2 2）n常规监测：开展实验室工作前对常规监测：开展实验室工作前对实验室人员进行健康体检并建立实验室人员进行健康体检并建立健康档案，对实验室人员进行定健康档案，对实验室人员进行定期临床检查，实行系统监测。在期临床检查，实行系统监测。在开展实验工作前还要采集本底血开展实验工作前还要采集本底血清标本并长期保存。清标本并长期

56、保存。健康监测（健康监测（3 3）n实验室工作人员必须在身体状况良好的实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入情况下，才能进入BSL-2BSL-2（ABSL-2ABSL-2）及以及以上级别的实验室工作。上级别的实验室工作。n出现下列情况，不应进入上述区域：患出现下列情况，不应进入上述区域：患发热性疾病；感冒、上呼吸道感染、或发热性疾病；感冒、上呼吸道感染、或其他导致抵抗力下降的情况；妊娠；已其他导致抵抗力下降的情况；妊娠；已经在实验室控制区域内连续工作经在实验室控制区域内连续工作4 4h h以上，以上，或其他原因造成的疲劳状态。或其他原因造成的疲劳状态。健康监测（健康监测（4 4）n

57、进入进入BSL-3 (ABSL-3)BSL-3 (ABSL-3)及以上级别实验室及以上级别实验室工作的相关人员，应每日早、晚测量体工作的相关人员，应每日早、晚测量体温并观察相应症状；温并观察相应症状；n结束实验室工作后，应继续进行相应时结束实验室工作后，应继续进行相应时段（相关疾病的平均潜伏期）的健康监段（相关疾病的平均潜伏期）的健康监测。测。n一旦出现异常情况应立即报告实验室负一旦出现异常情况应立即报告实验室负责人，以便及时采取相应控制措施。责人，以便及时采取相应控制措施。生物安全柜基础知识生物安全柜基础知识目目 录录n前言前言n安全柜简介安全柜简介n安全柜的自动控制安全柜的自动控制n安全柜

58、的性能要求及检测安全柜的性能要求及检测n安全柜的选择原则安全柜的选择原则n安全柜的检测安全柜的检测一、前一、前 言言n生物安全柜n负压过滤排风柜：在生物因子操作过程中用来保护操作人员、环境和（或）实验物品，防止其暴露于实验中（可能）产生的危险性或潜在危险性生物气溶胶或溅出物。n是微生物实验室的重要设备，是 “病原体操作的一级安全隔离屏障”，关系生命安全和环境安全，要求非常严格。二、安全柜简介二、安全柜简介n安全柜分级 ：、三级A-前窗操作口 B-观察窗 C-排气过滤器 D-负压排气系统图1 级安全柜结构和气流模式示意图 级安全柜级安全柜 操作者可通过前窗操作口在安全柜内进行操作。 前窗操作口向

59、内吸入的负压气流保护人员的安全 污染气流经高效过滤器过滤后排出，保护环境不受污染。 不能对产品实施保护。级安全柜级安全柜n操作者可以通过前窗操作口在安全柜内进行操作。n操作口流入气流：保护人员n经高效过滤器过滤的下降气流：保护产品n被污染气流经高效过滤器过滤后排出：保护环境级安全柜的分类级安全柜的分类n级安全柜根据结构特点和气流模式的不同分为 A1、A2、B1、B2四种类型级A1型安全柜n前窗操作口流入气流的最低速率为0.40m/s；n下降气流为安全柜的部分流入气流和部分下降气流的混合气体，经过高效过滤器过滤后送至工作区； A 前窗操作口 B观察窗 C排气过滤器 D 下降气流过滤器 E 压力排

60、气系统 F风机图2 级A1型安全柜结构和气流模式示意图（侧视图）级级A2A2型安全柜型安全柜n操作口流入气流的最低速率为0.50m/s。n下降气流为部分流入气流和部分下降气流的混合，经过高效过滤器过滤后送至工作区。n污染气流经过高效过滤器过滤后可以排到实验室或经安全柜的外排接口通过排风管道排到大气中。级级A2A2型安全柜型安全柜n安全柜内所有污染部位均处于负压状态或者被负压通道和负压通风系统环绕。n安全柜用于进行以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验时，必须连接功能合适的排气罩。A-前窗操作口 B-观察窗 C-排气过滤器 D-下降气流过滤器 E-压力排气系统 F-风机图3